고용량 항암요법 및 자가 조혈모세포 이식을 시행받은 유방암 환자에서 미세진행암 검색을 위한 Cytokeratin-19 검사의 의의

정재화,정희정,이규택,박성규,원종호,백승호,서원석,홍대식,박희숙,이민혁 대한조혈모세포이식학회 2000 대한조혈모세포이식학회지 Vol.5 No.2

배경:1978년 악성 림프종에서 처음으로 자가골수이식이 성공적으로 수행된 후 자가골수이식이 급속도로 증가하여 최근에는 동종골수이식보다 더 많이 시술되고 있다. 이러한 자가 조혈모세포이식은 유방암 환자에서 최근 그 빈도가 증가하고 있는 추세이나 자가이식의 잠재적인 한계인 골수나 말초 조혈모세포 수집으로부터 얻은 오염된 조혈모세포의 재주입의 가능성 여지가 있다는 것이 문제점으로 지적되고 있다. 최근 자가 조혈모세포이식에 따른 잔존 세포암에 대한 중요성이 증가되어져 왔고 이는 잔존 암세포를 발견할 수 있는 분자적 기술의 발전에 기인하고 있다. 유방암 환자에 있어 정상 혈액 단핵구내 유방암 세포 발견을 위해 cytokeratin-19 (CK-19) mRNA와 epithelial growth factor receptor는 민감도와 특이도가 뛰어난 표지자로 알려져 있다. 최근에 세포 특이 단백질에 대한 mRNA를 RT-PCR에 의존한 검사로서 10^(7)개의 정상세포중 최소 1개의 tumor cell을 발견할 수 있게 되었다. 본 연구에서는 autograft 내의 유방암 세포의 발견을 위한 RT-PCR 방법의 민감도를 평가하고 CK-19에 대한 RT-PCR 검사 양성인 말초혈액 내 암세포의 존재와 임상양상 결과를 비교 분석하였다. 방법:1996년 9월부터 1999년 12월까지 순천향대학병원에서 입원하여 고용량 항암요법 및 자가 조혈모세포 이식을 시행받은 환자들을 대상으로 하였다. 이들 총 13명의 환자중에서 10개 이상의 림프절 양성을 보이는 고위험군 유방암 환자가 6명이었고 재발성 유방암 환자가 7명이었다. 대상환자들에게 2번의 FAC 요법이후 mobilization으로 doxorubicin, paclitaxel 및 GM-CSF를 투여하였고 전처치로는 thio-tepa, carboplatin, mitoxantrone을 사용하였다. Mobilization 이후 채취한 조혈모세포의 일부를 이용하여 CK-19에 대한 RT-PCR을 시행하였다. 결과:RT-PCR의 민감도는 유방암 세포주인 MCF-7을 이용하였을때 정상 골수세포 100만개 중 1개의 MCF-7 세포가 존재하여도 RNA가 증폭되는 결과를 얻음으로써 감수성은 1:10^(6)의 비를 보였다. CK- 19에 대한 RT-PCR 결과는 13명의 환자 중 2명에서 CK-19 양성 소견을 보임으로써 15.4%의 양성률을 보였다. 2명의 환자는 모두 재발된 유방암 환자군에 속했으며 이중 1명은 1번에서만 CK-19 양성 소견을 보였고 나머지 한명은 2번 모두 apheresis 내에 CK-19 mRNA를 포함하고 있었다. 또한 전체 생존율을 비교하였을 때 고위험군에서 2년 생존율이 52.6%, 재발된 군에서 19.1%가 관찰되었으나 PCR 양성인 2명의 재발환자는 각각 4개월과 16개월째 사망하였다. 결론:고위험군과 재발된 유방암 환자에서 고용량 항암요법 및 자가조혈모세포 이식은 비교적 안전하며 잠재적 이득이 있는 치료법이다. 유방암 환자의 말초혈액 조혈모세포 내에 미세 잔존암 여부를 확인 위해 시행한 cytokeratin-19에 대한 RT-PCR은 특이도와 민감도가 뛰어난 검사이며 말초혈액 조혈모세포 내 잔존 암세포의 존재는 무병 생존률이나 전체 생존율을 감소시키는 경향을 보여 향후 유방암에서 조혈모세포이식을 시행할 때 잔존 암세포의 검색을 시행할 필요가 있을 것으로 생각되며 채집된 조혈모세포 내에 오염되어 있는 암세포의 제거 방법의 개발이 필요할 것으로 생각된다. Background:Breast cancer is a chemosensitive tumor and dose intensification might improve the disease-free survival and cure rates in high risk and relapsed breast cancer patients with poor prognosis. Autologous peripheral blood stem cells (PBSCs) provide accelerated hematopoietic recovery after myeloablative and myelosuppressive chemotherapy. The appreciation of the importance of minimal residual disease has been associated with a dramatic increase in reports describing application of technology to detect minimal disease, especially molecular techniques based primarily on the polymerase chain reaction. Cytokeratin-19 mRNA and epithelial growth factor receptor mRNA were shown to be highly specific and sensitive markers for the detection of breast cancer cells within normal peripheral blood mononuclear cells. The purpose of this study is to establish a sensitivity of RT-PCR assays for the detection of breast cancer cells within autografts and to evaluate the correlation between clinical outcome and the presense of tumor cells in PBSCs that positively reacted to RT-PCR assays. Methods:A cytokeratin-19 (CK-19) specific-nested RT-PCR assay was developed andoptimized by using limited dilutions of the MCF-7 breast cancer line mixed with normal bone marrow cells. The optimized assay was then used to examine PBPCs samples obtained from 13 patients with high risk and relapsed breast cancer. Results: In the sensitivity, CK-19 expressing tumor cells were detected in the mixture of 10 MCF-7 cells in 10^(7) normal bone marrow cells. Two patients of 13 (15.4%) scored positive to CK-19 in PBSCs with breast cancer, indicating minimal residual disease. Two patients with relapsed breast cancer with positive of CK-19 were died at 4 and 16 months after PBSCT. Conclusion: RT-PCR of cytokeratin-19 assay is a sensitive, specific and rapid method for the detection of minimal residual cancer cells within PBSCs in breast cancer patients. The presence of minimal residual tumor in PBSCs was trending toward short median disease-free survival and overall survival and this assay can be used for detection of cancer cells in harvested PBSCs in breast cancer patients with high dose therapy with autologous PBSCT.

조혈모세포이식 환자에서의 기계 환기의 위험 인자 : Assessment of Risk Factors

안중경,이홍기,황정혜,박세훈,이효락,송서영,이순일,박준오,김기현,김원석,정철원,임영혁,강원기,박근칠 대한조혈모세포이식학회 2002 대한조혈모세포이식학회지 Vol.7 No.1

연구배경: 조혈모세포이식을 시행한 환자에서 집중 치료 시 예후가 매우 나쁜 것으로 알려져 있고, 기계 환기는 강력한 사망 예측 인자로서 보고되고 있다. 그러나 현재까지 이식 환자에서 기계 환기의 위험 인자를 밝힌 연구는 매우 드물다. 따라서 기계 환기를 시행한 조혈모세포이식 환자의 임상적 특징을 살펴보고 기계 환기에 대한 위험 인자를 알아보고자 하였다. 방법: 삼성서울병원에서 조혈모세포이식을 시행한 환자 중 기계 환기를 시행한 23명과 기계 환기를 시행하지 않은 142명을 대상으로 후향적 연구를 시행하였다. 기계 환기에 대한 위험 인자의 여부에 관해서는 chi-square 또는 Fisher's exact 검정을 시행하였으며 기계 환기에 대한 각 위험 인자의 영향에 관해서는 다중로지스틱 회귀분석을 시행하였다. 결과: 기계 환기를 시행한 23명의 환자 중 30일째 생존자는 1명이었고 6개월째 생존율은 0%였다. 생존자와 사망자 모두에서 다기관 기능부전이 관찰되었으며, APACHE II 점수와 SAPS II 점수에 의한 예측 사망률은 각각 56%, 59%였다. 조혈모세포이식 후 기계 환기의 위험 인자로는 선행 질환이 혈액질환, 부분불일치 동종이식, 간정맥폐색성질환, 이식 전 질병 상태가 재발하였거나 약물에 반응하지 않는 경우였다. 다중로지스틱 회귀분석 결과 기계 환기의 위험 인자로 통계적으로 유의한 차이를 나타낸 것은 단지 부분불일치 동종이식을 시행한 경우였다. 결론: 현재까지 조혈모세포이식 환자에서 집중 치료의 역할에 대해서는 확실히 정립되어 있지는 않으며, 이식 환자에서 기계 환기는 강력한 사망 예측 인자이다. 따라서, 조혈모세포이식을 시행한 환자에서 기계 환기의 위험 인자와 불량한 예후 인자를 고려하여 기계 환기 여부에 대한 신중한 결정을 내려야 한다. Background: Respiratory failure requiring mechanical ventilation is a frequent, critical complication of hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). Patients who require mechanical ventilatory support after HSCT generally have a very poor prognosis. Mechanical ventilation in HSCT recipients is a strong predictive factor of mortality. The objectives of this study are to describe clinical characteristics of HSCT recipients undergoing mechanical ventilation and to identify the risk factors for mechanical ventilatory support after HSCT. Methods: We performed a retrospective chart review of all patients >15 yrs old who received HSCT at Samsung Medical Center and subsequently required mechanical ventilatory support between 1996 and 2001. Results: Thirty-day mortality rate in HSCT recipients undergoing mechanical ventilation was 95.6%. The mean predictive mortality rates of APAHCE II score and SAPS II score were 56% and 59%, respectively. Reasons for mechanical ventila-tion were sepsis (47.8%) followed by fungal infection (13%) and diffuse alveolar hemorrhage (8.7%). Univariate analysis identified relapsed or refractory diseases at HSCT, hematologic disease, hepatic venoocclusive disease and allogeneic or HLA-mismatched transplant as significant risk factors for mechanical ventilation. On multivariate logistic regression analysis, only allogeneic mismatched transplant remained significant. Conclusion: Overall outcome of HSCT recipients undergoing mechanical ventilation is very poor. Therefore, the risk factors and the poor prognostic factors for mechanical ventilation should be taken into account in making further treatment decision for HSCT recipients requiring mechanical ventilation.

동종골수이식 후 Variable Number of Tandem Repeat 다형성을 이용한 생착의 확인과 키메리즘 양상의 감시

안진석,박영이,정철원,양성현,이숭덕,이정빈,박선양,김병국 대한조혈모세포이식학회 2002 대한조혈모세포이식학회지 Vol.7 No.1

연구배경: 성공적인 동종골수이식 후 조혈세포는 공여자에서 유래하는 세포로 완전 대치된다. 따라서 키메리즘을 분석하는 것이 이식의 생착과 실패를 조기에 발견하는 데 도움을 줄 수 있다. 그러나 환자 세포와 공여자 세포가 혼재하는 혼합 키메리즘이 지속되어도 생착과 무병생존이 가능하므로 그 임상적 의미에 대한 규명이 필요하다. 한편 VNTR은 다형성이 높아 개체 감별력이 우수하다. 저자들은 VNTR에 대한 PCR 조건을 확립하고 이식 초기의 생착 확인과 이식 후 환자의 추적 조사에서의 유용성을 알아보고자 하였다. 방법: 각종 혈액질환으로 동종골수이식을 받은 50명의 환자를 대상으로 하였다. 이식 전에 환자와 공여자의 혈액을 채취하였다. 이식 후 첫 1개월 동안에는 1주 간격으로, 이후로는 수개월 간격으로 환자의 혈액 혹은 골수를 채취하였다. 혈액 혹은 골수의 단핵세포층에서 DNA를 분리하여 D1S80, D17S5, ApoB, vWF, MBP, TC-11, Col2A1 유전자자리에 대한 PCR을 시행하였다. 증폭 생성물은 4% 폴리아크릴아미드겔에서 전기영동 후 은염색으로 확인하였다. 결과: 환자와 공여자 50쌍 모두에서 정보를 제공하는 유전자자리를 확인하였다. 50명 중 46명이 1개월 내에 공여자 완전 키메리즘으로 전환되었다. 1개월 내에 완전 키메리즘으로 전환되지 않은 환자 4명 가운데 2명은 이식 거부, 1명은 질환의 재발을 보였고, 1명은 관해 상태로 1년 후 완전 키메리즘으로 전환되었다. 이식 후 추적기간 동안 질환이 재발한 10명 중 9명에서 사전에 혼합 키메리즘을 발견하지 못한 반면 경과 중 일시적 혼합 키메리즘을 보였던 5명의 백혈병 환자는 재발 없이 관해를 유지하고 있었다. 결론: 동종골수이식에서 VNTR에 대한 PCR은 공여자와 환자 세포의 감별, 이식 초기의 생착 및 이식 거부의 확인에 유용한 검사 방법이었다. 추적 기간 중 혼합 키메리즘의 의미에 대해서는 더 많은 연구가 필요할 것으로 생각한다. Background: After successful allogeneic bone marrow transplantation (BMT), Donor cells replace patient's hematopoietic cells. Therefore, it is useful to evaluate chimerism for the early detection of engraftment and graft failure. However persistence of host cells, so called mixed chimerism, can be compatible with engraftment and prolonged disease-free survival. So, it is necessary to document the significance of mixed chimerism. Variable number of tandem repeat (VNTR) is very polymophic and excellent marker for individual identification. We intended to establish the PCR condition for VNTR and the usefulness of VNTR in the early documentation of engraftment and monitoring of chimerism after BMT. Methods: Fifty patients who were treated with allogeneic BMT for hematologic diseases were studied. Blood samples of both patient and donor were drawn before BMT. Blood or marrow samples from patient were drawn with 1-week interval during the first month and a few month intervals thereafter. DNA was extracted from mononuclear cells of blood or bone marrow and amplified by PCR for D1S80, D17S5, ApoB, vWF, MBP, TC-11, and Col2A1. The amplified product was separated on 4% polyacrylamide gel and was confirmed by silver staining. Results: We identified the informative loci in all 50 patient/ donor pairs. Forty-six out of 50 had complete chimerism within 1 month after BMT. Of 4 patients who did not achieve complete chimerism within 1 month, 2 developed graft rejection, 1 developed disease relapse, and 1 was in complete remission and achieved delayed complete chimerism after 1 year. While we could not find mixed chimerism beforehand in 9 out of 10 patients who developed relapse after BMT, 5 leukemic patients who showed temporary mixed chimerism during follow-up period sustained complete chimerism without relapse. Conclusion: PCR amplification of VNTR is a useful method for the identification of cell origin between patient and donor, thus, early documentation of engraftment or graft failure. More studies with regular follow up are needed to evaluate the significance of mixed chimerism after BMT.

미니동종 조혈모세포 이식에서 T림프구 수용체 단클론성 항체의 이용 가능성 및 혼합 림프구 배양에서 림프구 억제효과에 대한 연구

손상균,박성원,백진호,김동환,정진태,현동우,곽동석,이재태,이규보 대한조혈모세포이식학회 1999 대한조혈모세포이식학회지 Vol.4 No.2

연구배경: 조혈모세포이식 및 조건화 치료는 원발성 질환을 제거 후 새로운 조혈세포를 이용한 공간을 마련하고 세포의 생착을 이름으로써 치료의 목표를 달성하고자 하나 심한 부작용으로 인한 높은 조기 사망률은 극복하여야 할 점이다. 저독성 조건화 처치를 하면 불충분한 면역세포의 살해로 인한 거부반응이 큰 문제가 된다. 이에 거부반응 및 이식편대숙주반응의 중요한 역할을 하는 림프구에 대한 억제작용을 갖는 단클로성 항체의 생체 내에서 효과를 추측하기 위해 DLA(Dog lymphocyte Antigen) mismatched dog의 말초혈액을 이용한 MLC assay를 시행하였다. 방법: DLA typing의 결과와 비교하기 위해 단클론성 항체 첨가 없이 DLA가 서로 다른 3마리의 말초혈액을 이용하여 서로의 MLC 반응을 비교 실험하였다. T림프구 수용체에 대한 단클론성 항체의 농도에 따른 proloferation 억제효과를 보기 위해 2, 10, 20, 200ug/ml의 농도로 DM5 (antigranulocyte antbody: 음성 대조군)와 비교하였다. 항원에 감작된 림프구에서의 D5에 대한 효과를 보기위해 장기 골수 배양 배지에서 responder를 stimulator 및 D5와 함께 3일간 배양후 세척하고 2일간의 배양후 다시 stimulator로서 재자극 후 5일 뒤에 proliferation assay를 시행하였다. 실제 이식을 시행한 donor 및 recipient의 세포를 분리하여 proliferation assay를 하여 이식 전후를 비교하였다. 결과: T림프구 수용체에 대한 단클론성 항체의 농도를 달리한 실험에서 2, 10 ,20ug/ml 모두에서 같은 농도의 DM5는 억제효과가 없는데 비해상 당한 림프구증식 억제효과가 관찰되었다. In vivo 실험에서 중용량의 방사성 치료 및 면역 억제 요법으로 DLA matched 2마리 모두에서 성공적인 생착을 확인하였다. 공여자의 mismatched sample에 대해 G-CSF를 이용한 가동화 치료전 보다 낮은 proliferation score를 보였다. 결론: T림프구 수용체에 대한 단클론성 항체는 In vitro 실험에서 T림프구의 억제효과가 관찰되었고 동물 이식에서 부작용을 줄이는 저용량의 조건화 치료 후 생착을 유도하는 면역억제제로서 그 가능성을 확인하였고 향후 그 기전에 대한 연구 및 많은 생체 실험이 필요하다고 생각된다. 재생불량성 빈혈 같은 저세포 충실도의 골수 질환이나 과거에 방사선 치료를 심하게 받은 경우는 이미 골수 내 생착을 위한 공간이 마련된 상태이므로 특별한 면역억제 요법이 가능하다면 이러한 저독성의 조건화 처치가 유용하게 응용될수 있을 것으로 전망된다. Background: The objective of this study was to evaluate the effect of anti-TCR monoclonal antibody in mixed lymphocyte culture and as a part of immunosuppressive regimens in the allogeneic stem cell transplantation. Since marrow space is empty in the patients with aplastic anemia or previous radiation and no new space for allograft needs to be created, nontoxic imminosuppressive conditioning regimens should be feasible. These may include monoclonal antibody directed against T cell receptor other surface determinants on T cell. Moncoclonal antibody (MAb) 15.9D5 raised to canine TCR α β was found to induce hyporesponsiveness to allogeneic stimulator cells in primary and secondary mixed lymphocyte culture (MLC). Methods: Anti-TCR monoclonal antibody was tested to evaluate its suppressive effect of lymphocyte activity in vitro compared with anti- granulocyte anti body and used as an immuno-suppressive agent in two recipient dogs. Four different concentration of anti-TCR MAbs was tested in MLC to know the appropriate concentration for suppressing lymphocyte proliferation, and MLC assays were serially done from blood sample of recipient dogs and donor dogs before and after transplantation. Results: Anti-TCR monoclonal antibody had significantly suppressed H3-thymidine uptake in MLC compared with anti-granulocyte antibody(control). In two recipient dogs conditioned with non-myeloablative regimens and MAb, transplanted with DLA- matched donor dogs, successful mobilizing stem cells were less reactive to the stimulator lymphocytes than the lymphocytes from the dogs not treated before. Conclusion: The precise mechanism of immunosuppression induced by anti- TCR MAb needs to be elucidated. G-CSF had a role in suppressing lymphocyte activity of donor dogs and might have a role in preventing GVHD. Non-myeloablative conditioning strategy might be useful in patients with hypoplastic marrows who require immunosuppression only (e. g. aplastic anemia) and already has some spaces for engraftment in the marrow (e. g. irradiated marrows).

동종 조혈모세포이식 후 재발 방지를 위한 저용량 Interleukin-2 치료

최연주,김병주,김문규 대한조혈모세포이식학회 2002 대한조혈모세포이식학회지 Vol.7 No.2

연구배경: 동종 골수이식 후 재발은 항암 화학요법을 시행하거나 2차 이식을 시행하거나 또는 공여자 림프구를 주입함으로 치료하게 된다. 그러나 효과를 보지 못하는 경우가 있으며 이러한 경우 IL-2를 투여하여 이식편대 백혈병 효과를 증가시킬 수 있다. 저자들은 동종 골수이식 후 재발 가능성이 높은 6명의 환아를 대상으로 저용량의 IL-2를 사용함으로써 재발이 예방되는 효과가 있는지 살펴 보았다. 방법: 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병으로 진단 받고 동종 골수이식을 받은 6명의 환아를 대상으로 IL-2를 14일을 한 주기로 하여 처음 2일은 5.0×10^(6) U/m2, 연이은 12일은 1.0×10^(6) U/m2를 피하 주사하였다. 치료 전후로 일반혈액 검사, 호산구 수치, T세포아형분석 등을 검사하였다. 분자생물학적 재발을 확인하기 위하여 각 환자에 따른 microsatellite polymorphysm, SRY (sex determining region of Y) PCR, bcr-abl PCR 등을 주기적으로 검사하였다. 결과: 대상 환아에게 IL-2를 2~8회 투여하였다. 전반적으로 림프구의 증가가 관찰되었고, 특히 총호산구수(total eosinophil count)와 CD4, CD8 양성세포가 증가하였으나 통계적 유의성은 없었다. 그밖에 CD16과 CD56에 동시에 발현하는 자연살상세포, IL-2 receptor을 발현하는 CD25 및 CD3 세포의 증가는 없었다. IL-2 투여 후에 이식편대숙주 질환의 발생은 없었다. 하지만 동종 골수이식 후 분자생물학적인 재발을 나타내는 소견이 없어지는 현상을 모든 환아에서 볼 수 있었다. 결론: 고위험군의 소아 백혈병 환아에게 동종 조혈모세포이식 후 재발의 소견이 분자생물학적 진단 방법으로 감지될 때 저용량 IL-2를 피하 주사함으로써 혈액학적 재발을 방지할 수 있을 것으로 생각한다. Background: Leukemic relapse after allogeneic transplantation can be treated with donor lymphocyte infusion (DLI) or chemotherapy but it is not so effective in overt relapse. Interleukin-2 can potentiate graft-versus-leukemic (GVL) effect without aggravating graft-versus-host disease (GVHD). We treated the 6 leukemic patients with high risk for relapse after allogeneic transplantation with low dose IL-2 to prevent overt hematologic relapse. Methods: Six cases underwent low dose IL-2 therapy after allogeneic bone marrow transplantation (allo BMT). IL-2 was started at 5.0×10^(6) U/m2 for 2 days followed by 1.0×10^(6) U/m2 for 12 days. Patients rest for 14 days then start the next cycle until no evidence of leukemia. We examined CBC, eosinophil count, T cell subsets. The microsatellite polymorphism, SRY (sex determining region of Y) PCR, bcr-abl PCR were tested periodically to monitor minimal residual disease according to patients' condition. Results: The patients were treated with IL-2 for 2~8 cycles. There were increase in lymphocyte, total eosinophil count, CD4, and CD8 without statistical significance. The patients tolerated to low dose IL-2 well without aggravation of GVHD. The duration follow-up is 9~44 months and all patients had a negative conversion of molecular markers. Conclusions: The immunotherapy with low dose IL-2 was effective at the stage of molecular relapse. Meticulous monitoring for relapse is needed for every patient after transplantation and IL-2 can be an additional option for molecular relapse.

NOD/SCID 마우스 모델을 이용한 인간 제대혈 혼합이식에서의 생착 양상 분석

정양조,김동욱,조빈,강영주,박보배,김혜정,김태규,오일환 대한조혈모세포이식학회 2002 대한조혈모세포이식학회지 Vol.7 No.2

연구배경: 제대혈은 골수에 비해 많은 장점을 가지고 있음에도, 이식 후 성적에 있어 총세포수에 의해 좌우되며, 한 개의 태반으로부터 얻을 수 있는 총세포수의 한계가 있어 주로 소아에 국한되고 있다. 따라서 제대혈 응용의 확대를 위해 생착량을 늘이기 위한 방법으로 다중공여자에 의한 제대혈 혼합이식을 늘일 수 있는지 연구하기 위하여, 본 연구에서는 주조직적합성 형별로 조합된 제대혈을 NOD/ SCID 생쥐에 이식하는 방법으로, 혼합생착의 가능성을 연구하였다. 방법: 조합된 2개 공여자로부터 얻어진 제대혈들을 단일이식 및 혼합이식하여, 혼합이식된 숙주에 생착된 세포를 PCR-SSOP 방법을 사용하여 공여자 별로 추적하였다. 또한 각 공여자세포의 상대적 생착비율을 대조군인 단일제대혈 이식에서 얻어진 생착량과 비교하는 정량적 비교도 함께 하였다. 결과: 총단핵구를 혼합이식한 실험군에서는 주조직적합성의 일치도에 관계없이 한쪽공여자의 세포가 다른쪽에 비해 우세한 편향생착을 보였다. 그러나 임파구를 비롯한 Lineage 양성세포를 제거한 실험군에서는 주조직적합성의 불일치에도 불구하고 뚜렸한 생착의 공존이 관찰되었다. 결론: 본 연구는 제대혈의 생착량을 증가를 목적으로 총단핵구를 혼합이식할 경우 한쪽공여자의 세포에 의해 편중되며, 이것을 이식 후 생착과정에서의 두 종류의 세포의 경쟁에 의해 초래된다는 것을 보이고 있다. 또한 이러한 경쟁은 제대혈에 포함되어 있던 임파구들에 의한 것이며, 생착공존을 위하여는 공여자간 주조직적합성의 일치도 보다, 임파구의 제거가 더 중요하다는 것을 보여주고 있다. Background: Although umbilical cord blood (UCB) has been an attractive alternatives for bone marrow cells, application is limited to pediatric case due to limitation in total number of nucleated cells, that is a single most important factor for outcomes of UCB transplantation. Therefore, increasing overall engraftment by mixed transplantation of UCB derived from multiple donor should comprise one strategy to circumvent the posed limitation of UCB transplantation. In order to investigate the feasibility of establishing co-engraftment by multi-donor UCB cells, we carried out a xenotransaplantation study using NOD/SCID mice for systemic analysis of results on the input-based control of single unit transplantation. Methods: UCB units with various extent of HLA-matchings were co-transplanted into NOD/SCID mice along with single unit transplantation control. The relative contributions of engraftment by cells from each donor-derived were analyzed by HLA polymorphism using PCR-SSOP. Results: In all HLA-based mixed transplantation of total nucleated UCB cells, engraftment of one donor predominated over the other despite that equivalent amount of engraftments were achieved by single donor transplantation. When lineage depleted UCB units were co-transplanted, significant degree of co-engraftments were observed regardless of HLA disparity. Conclusion: Our result show that one donor cells dominate over the other in mixed UCB transplantation and that it is due to competition between donor cells during post-transplantation process. Our results suggest that immune cells contained in UCB unit mediate such competitioin and that 6 locus HLA matching would not be sufficient to prevent the competition.

소아 자가말초혈액 조혈모세포이식 환자의 감염 양상

유건희,이계향,이수현,김성혜,김상종,유동길,황수정,조은주,구홍회 대한조혈모세포이식학회 2002 대한조혈모세포이식학회지 Vol.7 No.2

연구배경: 소아 자가 조혈모세포이식 환자를 대상으로 감염의 양상을 파악하여 이의 예방 및 치료를 위한 합리적인 대처 방안에 대해 모색하고자 하였다. 방법: 2001년 3월부터 2002년 4월까지 삼성서울병원 소아과에서 고용량 화학요법 및 자가 조혈모세포이식을 시행받은 27명을 대상으로 의무기록을 후향적으로 조사하여 발열 및 감염의 양상에 대한 전반적인 분석을 시행하였다. 결과: 이식 시 중앙연령은 60개월(16~195개월)이었고 남아가 18예, 여아가 9예이었다. 진단별로는 신경모세포종 12예, 급성골수성백혈병 3예, 비호지킨림프종 3예, 수모세포종 2예, 생식세포종 2예, 원시신경외배엽종양 2예, 기타가 3예이었다. 24예(88.9%)에서 발열이 있었고 총 32회의 새로운 발열이 있었다. 발열이 없이 감염 병소가 있었던 1예를 포함하여 25예(92.6%)에서 감염이 발생하였고 미생물학적으로 확인된 감염이 11.1%, 임상적으로 확인된 감염이 22.2%, 미확인 발열이 59.3%였다. 발열 기간 중 동반된 증상으로는 설사(70.8%)와 구내염(58.3%)이 가장 흔하였다. 총발열 기간은 중앙값 5일(0~13일)이었으며 전신방사선조사를 받은 경우 발열 기간이 더 길었다(P=0.0398). 발열의 65.6%는 ANC 500/μL 미만에서 발생하였으나 ANC 1,000/μL 이상에서도 31.3%가 발생하였다. 1차 경험적 항균요법의 성공률은 26%이었고 항생제 사용 일수는 중앙값 19일(7~50일)이었다. 진균 감염이 증명된 예는 없었다. 이식된 CD34 양성세포의 수가 5×10^(6)/kg 이상일 때 그 미만인 경우보다 항생제 투여 기간이 짧았다(15.5일 vs 18일, P=0.0182). 총 7예가 사망하였으나 감염이 사망의 직접 원인으로 작용한 예는 없었다. 결론: 본 연구 결과를 통해 소아 자가 조혈모세포이식 환자에서는 비교적 이른 시기에 발열이 시작되어 장기간의 항생제 투여가 필요하나 감염에 의한 사망은 드문 것으로 기대된다. 세균 이외의 발열 원인에 대한 쉽고 정확한 진단법의 개발이 필요하며, 항균요법의 방법을 개선하여 과거의 대조군과 비교하는 연구를 통해 더욱 효과적인 감염 예방과 치료방법을 모색해야 하겠다. Background: In this study, we intended to describe the infectious manifestations in children undergoing autologous peripheral blood stem cell transplantation (APBSCT) and to establish the proper methods of preventing and treating infectious complications in those patients. Methods: We retrospectively reviewed medical records of 27 patients who underwent APBSCT from March 2001 to April 2002 at Samsung Seoul Hospital and analyzed the general manifestations of infectious complications. Results: Median age at transplant was 60 months (16~195 Mo). Patients' diagnoses were neuroblastoma (n=12), acute myeloid leukemia (n=3), non-Hodgkin's lymphoma (n=3), medulloblastoma (n=2), germ cell tumor (n=2), primitive neuroectodermal tumor (n=2), and others (n=3). Fever developed in 24 patients (88.9%) with 32 febrile episodes. Infectious complications occurred in 25 patients (92.6%) including 1 afebrile patient having pneumonic infiltrates. The types of infection were microbiologically documented infection in 11.1%, clinically documented infection in 22.2%, and undefined fever in 59.3%. Diarrhea (70.8%) and oral mucositis (58.3%) were the leading symptom and sign accompanied by febrile episodes. The median duration of fever was 5 days (0~13 days), and it was longer in patients who received total body irradiation (P=0.0398). Fever developed at absolute neutrophil count (ANC) <500/μL in 65.6%, but 31.3% of fever developed at ANC >1,000/μL. The success rate to initial empirical antibiotics was only 26% of patients and the median duration of antibiotic treatment was 19 days (7~50 days), which was significantly shorter when infused CD34^(+) cell count exceeded 5×10^(6)/kg (P=0.0182). There was no proven fungal infection. There were 7 deaths but no patient died from infectious complication. Conclusion: Fever developed relatively earlier, which led to the prolonged use of antibiotics but, mortality rate from infectious complication was rare in children. More accurate and easy diagnostic methods to detect infectious organisms other than bacteria and prospective studies to determine optimal empirical antibiotics for the treatment of fever of unknown origin in APBSCT, would uncover more effective strategy of preventing and treating infectious complications in children undergoing APBSCT.

書報-84年度(第 9 回) 大韓赫斗시臟f繩學會

대한치과이식임플란트학회 대한치과이식임플란트학회 1984 The Korean Academy of Implant Dentistry Vol.5 No.1

기타 혈액암에서의 이식 후 재발의 치료

정철원 대한조혈모세포이식학회 2002 대한조혈모세포이식학회지 Vol.7 No.1

재발한 전이성 유방암 환자에서의 고용량 Paclitaxel 화학요법 및 CD34+ 조혈모세포이식

김병수,서재홍,최철원,신상원,김열홍,김준석 대한조혈모세포이식학회 2000 대한조혈모세포이식학회지 Vol.5 No.2

배경:저자 등은 고려대 의료원에서 유방암의 수술 및 anthracycline을 포함한 화학요법 후 재발한 불량한 예후인자를 지닌 전이성 유방암 환자들에게 시행한 고용량 paclitaxel 화학요법 후 Immune-magnetic 법으로 채집된 자가 CD34+ 조혈모세포이식의 경험을 보고하고자 한다. 방법:수술 및 CAF (cyclophosphamide, adriamycin, 5-FU) 화학요법 후 관해를 유지하다가 전이성으로 재발한 32~59세(중앙값: 40세)의 유방암 환자 8명을 대상으로 하였다. 화학요법 후 재발 발견까지의 기간은 7~46개월이었다. 우선 paclitaxel (175 mg/m2) 및 ifosfamide (1,800 mg/m2) 요법을 4회 실시하였고, 모두에서 부분 반응 이상의 효과가 관찰되었다. CD34+ 조혈모세포는 수술실에서 채집된 골수혈로부터 CEPRATEⓡ System을 이용하여 분리한 다음, controlled-rate freezing 후 -196℃ 액체질소에 보존되었다가 paclitaxel (625 mg/m2), cisplatin (165 mg/ m2), cyclophosphamide (5,625 mg/m2)으로 이루어진 고용량 화학요법 후 다시 환자에게 이식되었다. 본 시술의 평가를 위하여 CEPRATEⓡ System의 CD34+ 조혈모세포 분리효율(%) 및 조혈기능 회복까지의 기간, 그리고 이식 후 합병증을 포함한 현시점까지의 경과를 분석하였다. 결과:각 환자 당 CD34+ 조혈모세포의 분리효율의 분포는 53~90%로 그 중앙값은 74%이었다 이식 후 화학요법과 관련된 부작용으로는 오심 및 구토, 점막염, 중추 및 말초 신경계 증상들이 전례에서 관찰되었고, 한 환자에서는 흡인성 폐렴으로 사망하였다. 그리고, 이식 후 7명의 환자들에서 저과립구성 발열이 발생하였으며, 그 기간의 중앙값은 4일(범위; 2~7일)이었다. 이식 후 과립구 수가 500/μL 및 2,000/μL 이상으로 회복되는 데 걸리는 기간의 중앙값은 각각 11일(범위; 9~17일), 23일(범위; 15~38일)이었고 혈소판 수가 20,000/μL 및 50,000/μL 이상으로 회복되는데 소요된 기간의 중앙값은 각각 15일(범위; 12~23일), 18일(범위; 14~35일)이었다 흡인성 폐렴으로 사망한 1명을 제외한 7명에서의 추적기간의 중앙값은 7 개월(범위; 3~35개월)이었다. 이 중 이식시 완전관해였던 환자가 3명, 부분관해였던 환자가 4명이었고, 부분관해 환자들 중 1명에서는 이식 후 완전관해로 호전이 되었다. 그러나 본 환자들 모두에서 이식 후 2-36+ 개월에 재발 혹은 진행 소견을 보이면서 이식 후 3-37+ 개월에 사망하였다. 결론:본 연구를 통하여 anthracycline을 포함한 기존의 항암제 치료 후 재발한 불량한 예후인자들을 지닌 환자들을 대상으로 한 고용량 paclitaxel 화학요법 후 CD34+ 조혈모세포이식은 기존의 고용량 화학요법 후 자가 조혈모세포이식의 성적과 차이가 없었음을 알 수 있었지만, 비교적 안전하게 우리나라의 환자들에서도 적용될 수 있다는 사실을 본 연구를 통하여 확인할 수 있었다. 그러므로, 본 연구를 기초로 하여 고용량 화학요법으로 치료효과를 극대화시킬 수 있는 예후인자들을 지닌 재발성 전이성 유방암 환자들을 대상으로 한 추가 연구가 필요하리라고 사료된다. Background: Autologous hematopoietic stem cell transplantation using a positive purging method to detect CD34+ cells has a benefit of having a less chance of contamination with cancer cells in the transplanted blood containing stem cells than that using a negative purging method. And, paclitaxel is approved to be a new effective chemotherapeutic agent for breast cancer. So, the clinical results of the CD34+ hematopoietic stem cell transplantation with high-dose paclitaxel chemotherapy in the recurred metastatic breast carcinoma patients have been reported in this study. Methods: 8 patients (woman, median age: 40 years, range; 32~59 years) with metastatic (liver, bone, lymph nodes) breast carcinoma recurred after the treatment of curative operation and adjuvant CAF (cyclophosphamide, adriamycin, 5-FU) chemotherapy, have been enrolled in this study. All patients had been responded to 4 cycles of paclitaxel (175 mg/m2) and ifosfamide (1,800 mg/m2) chemotherapy. CD34+ hematopoietic stem cells were purified from bone marrow blood by CEPRATEⓡ SC Stem Cell Concentration System using avidin-coated polyacrylamide beads column. The high-dose chemotherapy regimen was consisted with paclitaxel (625 mg/m2), cisplatin (165 mg/m2), and cyclophosphamide (5,625 mg/m2). The separation yield of CD34+ hematopietic stem cells, the hematopoietic recovery time, and the clinical outcomes of transplantation have been evaluated in this study. Results: The separation yield of CD34+ hematopietic stem cells with CEPRATEⓡ SC Stem Cell Concentration System was ranged from 53~90% (median: 74%). All patients had been experienced nausea with vomiting, mucositis, central or peripheral neuropathy after high-dose paclitaxel chemotherapy. One patient had been expired due to aspiration pneumonitis. Neutropenic fever was developed in seven patients with the duration of 2~7 (median: 4) days. The median (range) duration of neutrophil recovery to 500/μL and 2,000/μL was 11 (9~17) and 23 (15~38) days, respectively. The median (range) duration of platelet recovery to 20,000/μL and 50,000/μL was 15 (12~23) and 18 (14~35) days, respectively. The median follow-up duration after transplantation was 7 (3~37) months. All patients experienced disease relapse or progression after 2-36+ months after transplantation. Therefore, overall rate of 3 year disease free survival in this study was 14.3 (1/7)%. Conclusion:CD34+ hematopoietic stem cell transplantation with high-dose paclitaxel chemotherapy in the recurred metastatic breast carcinoma patients seems to have no superior clinical outcome compared to the other modalities of high-dose chemotherapy with hematopoietic stem cell transplantation. But, we can find that high-dose paclitaxel (625 mg/m2, dose ratio; 3.57) therapy is relatively safe in Korean patients. Therefore, further studies targeted to the recurred metastatic breast cancer patients with moderate to good prognostic factors will be warranted.