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        Growth Inhibition of Escherichia coli during Heterologous Expression of Bacillus subtilis Glutamyl-tRNA Synthetase that Catalyzes the Formation of Mischarged Glutamyl-tRNA1Gln

        Ji-Won Baick,Jang-Ho Yoon,Suk Namgoong,Dieter S?l,Sung-Il Kim,Soo-Hyun Eom,Kwang-Won Hong 한국미생물학회 2004 The journal of microbiology Vol.42 No.2

        It is known that Bacillus subtilis glutamyl-tRNA synthetase (GluRS) mischarges E. coli tRNA1 Gln with glutamate in vitro. It has also been established that the expression of B. subtilis GluRS in Escherichia coli results in the death of the host cell. To ascertain whether E. coli growth inhibition caused by B. subtilis GluRS synthesis is a consequence of Glu-tRNA1 Gln formation, we constructed an in vivo test system, in which B. subtilis GluRS gene expression is controlled by IPTG. Such a system permits the investigation of factors affecting E. coli growth. Expression of E. coli glutaminyl-tRNA synthetase (GlnRS) also ameliorated growth inhibition, presumably by competitively preventing tRNA1 Gln misacylation. However, when amounts of up to 10 mM L-glutamine, the cognate amino acid for acylation of tRNA1 Gln, were added to the growth medium, cell growth was unaffected. Overexpression of the B. subtilis gatCAB gene encoding GlutRNAGln amidotransferase (Glu-AdT) rescued cells from toxic effects caused by the formation of the mischarging GluRS. This result indicates that B. subtilis Glu-AdT recognizes the mischarged E. coli GlutRNA 1 Gln, and converts it to the cognate Gln-tRNA1 Gln species. B. subtilis GluRS-dependent Glu-tRNA1 Gln formation may cause growth inhibition in the transformed E. coli strain, possibly due to abnormal protein synthesis.

      • 각종 조혈모세포 근원별 CD34+ 양성세포율 및 혈구 집락배양의 비교

        목지오,변재호,김숙자,전진우,원종호,백승호,서원석,홍대식,박희숙 대한조혈모세포이식학회 1996 대한조혈모세포이식학회지 Vol.1 No.1

        목적: 각종 조혈모세포의 근원인 말초혈액(PB), 고용량 항암요법과 조혈성장인자 투여후 얻은 말초혈액(MPB), 골수(BM) 및 제대혈 (UB)의 단핵구를 이용하여 CD₃₄+ 세포양성율 및 각종 조혈전구 세포의 집락 형성능을 비교 관찰하고자 한다. 방법: flow cytometry와 anti-CD₃₄+ 단세포항체를 이용하여 각종 조혈모세포 근원의 CD₃₄+ 양성세포함유 정도를 측정하였고, 분리된 단핵구를 집락배양하여 CFU-GM, BFU-E, CFU-GEMM 및 HPP-CFC의 집락형성능을 관찰하였다. 결과: 1) 각 조혈모세포의 근원별 CD₃₄+ 양성세포의 분리 전후의 비교 CD₃₄+ 양성세포의 양성률은 고용량 항암요법과 조혈성장인자 투여후 얻은 말초혈액에서 3.46±0.72%로 가장 높았으며 골수와 제대혈에서 각각 1.78±0.86%과 1.53±0.43%으로 비슷하였으며 말초혈액에서 0.14%로 가장 낮았다. CD₃₄+ 세포를 분리하였을 때, 분리후 CD₃₄+ 양성세포는 제대혈액에서 96.99±1.95%로 가장 높았으며 고용량 항암요법과 조혈성장인자 투여후 얻은 말초혈액에서 72.54±14.06%, 골수에서 60.6±1.9%, 그리고 말초혈액에서 54%로 나타났다. 2)각 조혈모세포의 근원별 조혈전구세포의 집락형성 CFU-GM, BFU-E, CFU-GEMM 그리고 HPP-CFC를 사용한 집락배양결과 CD₃₄+ 양성세포 분리군에서 비분리군에 비해 집락수가 많았으며, CFU-GM의 경우 그 비는 말초혈액, 골수, 그리고 제대혈액에서 각각 112배, 10배, 5배, 26배 또한 CFU-GEMM은 각각 136배, 8배, 12배가 높았다. 결론: 각종 조혈모세포의 근원별 CD₃₄+ 양성세포의 양성세포율 및 조혈전구세포 집락배양비교시 CD₃₄+ 양성세포와 조혈전구세포가 말초혈액이나 골수보다 MPB나 제대혈에서 훨씬 많은 것을 관찰하였다. Background: Classically bone marrow is the major source of hemopoietic stem cells of the allo/autologous hemopoietic stem cell tansplantation. Recently, hemopoietic stem cells circulate in peripheral blood, "mobilized" with cytokines and/or cytotoxic chemotherapy and umbilical cord blood stem cells, are widly used for high dose chemotherapy with hemopoietic stem cells support. The aim of this study is to investigate the possibility of clinical applications of selected CD34+ cells with source of hemopoietic stem cells such as, peripheral blood(PB), mobilized PB(MPB), bone marrow(BM), and umbilical cord blood(UB) Methods: We evaluated the comparison of the clonogenicithy and percentage of CD₃₄+ cells according to each source of hemopoietic stem cells in before and after separation of CD₃₄+ cells through in vitro colony assay and flow cytometry with anti-CD₃₄+ monoclonal antibody. Results: 1) CD34+ cells were detected in PB, MPB, BM, and UB at incidences of 0.14%, 3.46 ±0.72%, 1.78±0.86%, and 1.53±0.43% of total mononuclear cells. And the most CD34+ cells were detected in UB after seperation of CD₃₄+ cells. 2) The colony counts revealed more in CD₃₄+ isolating group. Clonogenicity of CD₃₄+ cells in PB, MPB, BM, and UB was 112-fold, 10-fold, 5-fold, and 26-fold in colony forming unit-granulocyte and macrophage(CFU-GM), and 136-fold, 8-fold, 3-fold, and 12-fold in colony of forming unit-granulocyte, erythrocyte, monocyte, megakaryocyte(CFU-GEMM). The colony counts of UB and MPB were large numbers more than PB and BM. Conclusion: Clonogenicity and percentage of CD₃₄+ cells are superior MPB and UB than in PB and BM.

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