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        대장균의 alkaline phosphatase가 융합된 anti-DR4 single-chain Fv (ScFv) 항체의 개발

        한승희,김진규,Han, Seung Hee,Kim, Jin-Kyoo 한국미생물학회 2016 미생물학회지 Vol.52 No.1

        항체의 특이적 결합을 분석하는 효소면역분석법은 항원의 탐지를 위해 주로 horseradish peroxidase (HRP) 또는 alkaline phosphatase (AP) 등의 효소를 사용한다. 이때 효소를 주로 화학적으로 항체에 결합시켜 사용하게 되는데 이 과정이 복잡하며 불규칙하게 일어나서 항체 및 효소의 기능을 감소시키게 된다. 또한 대부분의 효소면역분석법에서는 주로 일차 항체의 항원결합을 탐지하기위해 이차 항체를 사용하는데, 즉 이차 항체에 결합한 효소의 기질발색에 의해 일차 항체의 항원결합을 탐지하므로 이차 항체가 요구 되어질 뿐만 아니라 이차 항체의 일차 항체에 대한 반응을 위한 부가적인 배양시간이 필요하다. 더욱 더 중요한 것은 이차 항체만의 비특이적 항원 결합 역시 제거되어져야 한다. 본 연구에서는 대장균의 genomic DNA로부터 PCR을 통해 alkaline phosphatase 유전자(Sadeghi et al., 2008)를 증폭 분리한 다음 이를 TRAIL (tumor necrosis factor ${\alpha}$ related apoptosis induced ligand) receptor인 death receptor 4 (DR4)에 특이적으로 결합하는 hAY4 single-chain Fv (ScFv)에 융합시킨 재조합 ScFv-AP 형태로 대장균에서 발현시켜 정제하였다. 정제된 hAY4 ScFv-AP는 SDS-PAGE에서 단량체(monomer) 분자량인 73.8 kDa을 나타내었다. 그러나 size-exclusion chromatography(SEC)에서는 147.6 kDa을 나타내는 결과를 통해 hAY4 ScFv-AP는 AP의 자연적인 비공유결합에 의해 이량체(dimeric form)형성이 유도되어짐을 확인하였다. 또한 ELISA, Western blot 그리고 immunocytochemistry에서 이차 항체 없이 일차 항체 hAY4 ScFv에 직접 융합된 AP의 기질발색에 의해 ScFv 일차 항체의 특이적 항원결합을 나타내었다. 요약하면 hAY4 ScFv와 대장균의 alkaline phosphatase 유전자를 융합시켜 대장균에서 수용성 형태로 성공적으로 정제하였으며 정제된 ScFv-AP 융합단백질은 ELISA, Western blot 및 immunocytochemistry에서 항원결합력을 나타냈으며 또한 구매에 따른 고비용, 부가적인 배양시간 및 비특이적 결합에 의한 오류 등의 문제점을 갖는 이차 항체를 사용하지 않고 직접적인 항원결합력을 나타내었다. Enzyme immunoassay to analyze specific binding activity of antibody to antigen uses horseradish peroxidase (HRP) or alkaline phosphatase (AP). Chemical methods are usually used for coupling of these enzymes to antibody, which is complicated and random cross-linking process. As results, it causes decreases or loss of functional activity of either antibody or enzyme. In addition, most enzyme assays use secondary antibody to detect antigen binding activity of primary antibody. Enzymes coupled to secondary antibody provide a binding signal by substrate-based color development, suggesting secondary antibody is required in enzyme immunoassay. Additional incubation time for binding of secondary antibody should also be necessary. More importantly, non-specific binding activity caused by secondary antibody should also be eliminated. In this study, we cloned AP isolated from Escherichia coli (E. coli) chromosome by PCR and fused to) hAY4 single-chain variable domain fragment (ScFv) specific to death receptor (DR4) which is a receptor for tumor necrosis factor ${\alpha}$ related apoptosis induced ligand (TRAIL). hAY4 ScFv-AP expressed in E. coli showed 73.8 kDa as a monomer in SDS-PAGE. However, this fusion protein shown in size-exclusion chromatography (SEC) exhibited 147.6 kDa as a dimer confirming that natural dimerization of AP by non-covalent association induced ScFv-AP dimerization. In several immunoassay such as ELISA, Western blot and immunocytochemistry, it showed antigen binding activity by color development of substrates catalyzed by AP directly fused to primary hAY4 ScFv without secondary antibody. In summary, hAY4 ScFv-AP fusion protein was successfully purified as a soluble dimeric form in E. coli and showed antigen binding activity in several immunoassays without addition of secondary antibody which sometimes causes time-consuming, expensive and non-specific false binding.

      • 제6분과 <공무원 사기관리> : 발표 ; 조직운영의 평등성과 공정성이 여성 공무원의 승진 동기에 미치는 영향

        한승희,권일웅 한국정책학회 2015 한국정책학회 춘계학술발표논문집 Vol.2015 No.-

        여성 공무원의 공직 지원과 채용이 증가하면서 전체 여성 공무원의 비중은 증가하고 있지만, 채용 이후 승진에 있어서 여성들은 여전히 유리천장에 직면하고 있다. 이러한 유리천장은 여성들의 승진에 대한 기대와 동기를 낮추어 다시 여성들의 승진을 감소시키는 악순환을 생산할 수 있다. 본 연구의 목적은 이러한 악순환 과정의 고리에 있는 여성들의 승진 동기를 높이기 위하여 남녀간 동일한 대우를 강조하는 ‘평등성’을 기준으로 한 조직운영방식과 여성이 가진 지식.기술.능력에 따라 차별화를 강조하는 ‘공정성’을 기준으로 한 조직운영방식 중 어떤 운영방식이 유의미한지 알아내는 것에 있다. 서울대학교 한국정책지식센터에서 실시한 중앙공무원 인식조사를 활용한 결과, 단순한 성별 평등성을 기준으로 조직을 운영하는 방식보다는 여성공무원이 가진 지식과 기술을 효율적으로 활용하는 공정성을 기준으로 운영하는 방식이 여성의 승진 동기부여를 높이는데 유의미한 영향을 주는것으로 나타났다. 따라서 여성 고위직 할당제와 같이 평등성을 추구하는 인사정책 패러다임에서 여성이 가진 지식과 기술에 따른 차별화를 통해 공정성을 추구하는 패러다임으로 전환될 필요가 있다. 능력개발.활용 인사정책으로 패러다임을 변화시키려면, 승진에 필요한 경험.지식을 쌓을 수있는 핵심보직에서 여성 공무원을 배제시키는 유리벽(glass wall) 현상을 없애야 한다. 추가적인 분석에서는 부서원간의 원만한 관계가 여성 공무원의 승진 동기를 유의미하게 높이는 것으로 나타났으나, 직속상관에 관련된 요인은 유의미한 영향을 주지 못하고 있다. 본 연구의 결과는 여성공무원의 승진 동기를 높이기 위해 현 패러다임의 수정.변화가 필요하다는 점을 제시하였다는 점에서 의의가 있다.

      • KCI등재

        문헌정보학 교육에서 프로젝트 중심 학습법이 학생의 문제해결능력 및 자기주도적 학습능력 향상에 미치는 효과: 사례 연구

        한승희 한국문헌정보학회 2008 한국문헌정보학회지 Vol.42 No.3

        본 연구에서는 문헌정보학 교육 환경에서 프로젝트 중심 학습법을 적용하여 강의를 개발하고, 이 학습법이 문헌정보학 전공 학부생의 문제해결능력과 자기주도적 학습능력의 향상에 미치는 효과에 대해 분석하고자 하였다. 이를 위해 23명의 수강생을 대상으로 프로젝트 중심 학습을 경험하기 전과 후에 대해 동일한 검사지를 이용하여 학생의 문제해결능력과 자기주도적 학습능력에 대해 측정하였다. 그리고 사전검사와 사후검사결과의 유의성을 확인하기 위해 SPSS를 이용하여 대응표본 t-검정법으로 분석하였다. 분석 결과, 프로젝트 중심 학습법이 문헌정보학을 전공하는 학생의 문제해결능력과 자기주도적 학습능력의 향상에 큰 효과가 있음을 확인하였다. The purpose of this study is to develop a course with project-based learning method for LIS education and to examine the effects of this method on improvement of problem solving and self-directed learning ability of LIS undergraduate students. The research design was one-group pretest-posttest design in quasi-experimental research. The data were collected from 23 LIS undergraduate students and analyzed by paired t-test with SPSS. The result demonstrated that project-based learning method has an significant effect on improvement of problem solving and self-directed learning ability of LIS undergraduate students.

      • Monosodium L - Glutamate 투여로 천식 증상이 유발된 아스피린성 기관지천식 1례

        한승희,이미경,박해심,홍천수 대한천식알레르기학회 1989 천식 및 알레르기 Vol.9 No.1

        We have experienced a case of bronchial asthma sensitive to aspirin, sodium benzoate, tartrazine and monosodium L-glutamate. The patient was a 49-year old male who suffered from rhinorrhea, dyspnea, cough and sputum for 8 months. Total eosinophil count in peripheral blood was 190/mm3, serum IgE was 58.85/ml. Skin prick test to 50 inhalants and 45 food allergens was all negstive. Nasal smear revealed 30-40% of eosinophil and 3-5% of eosinophil was noted in sputum smear Ingestion of cspsules containing 30mg of aspirin resulted in severe asthma 2 hours later. Ingestion of capsules containing 400mg of sodium benzoate and 10mg of tartrazine resulted in sig-nificant decrease of pulmonary function test. Ingestion of capsules containing 2.5 g of MSG resulted in decrease of 33% of FEV1 and 42% of MMF 12 hours later. Thereafter, ingestion of 5,0 g of MSG resulted in decrease of 28% of FEV1 and 45% of MMF 8 hours later. This case suggests that MSG is not safe for some individuals with asthma. We should recognize the significance of MSG as asthrna inducing substance and then our further concerns and prompt approach are necessary.

      • KCI등재

        한.일 인터넷 정보유통을 위한 이용자 친화적 다국어 시소러스 모형 개발에 관한 연구

        한승희,Han, Seung-Hee 한국비블리아학회 2007 한국비블리아학회지 Vol.18 No.2

        본 연구의 목적은 이용자 친화적인 한 일 시소러스 구축을 위한 모형을 개발하는 것이다. 이를 위해 선행연구 분석과 한국과 일본의 시소러스 구축 경험자 인터뷰를 통해 기존의 다국어 시소러스 구축방법에서 제기될 수 있는 문제점을 분석하고 현재의 정보환경에서 언어적 혹은 문화적 차이에 따른 이용자들의 어휘사용의 차이를 확인하기 위해 한국과 일본의 이용자 태그를 분석하였다. 분석결과, 인터넷 정보유통 환경에서 적합한 시소러스모형인 탐색 시소러스 모형을 확인하고, 이를 적용하여 이용자친화적인 형태의 한 일 시소러스 모형을 제안하였다.

      • KCI등재

        GIS Application for Site Planning

        한승희,이진덕 대한공간정보학회 2009 대한공간정보학회지 Vol.17 No.1

        The general urban plan is the plane plan which limits general and uniformed constructions; however, the district unit plan is the solid plan that can leads various constructions by discriminating by plot, housing area and lot. Therefore, for the zone plan, not only the two-dimensional plot information such as plot usage plan, but also the three-dimensional plot information needs to be used to analyze lighting, sewerage and directions. To fulfill such requirements, the information can be gathered using GIS and photogrammetric method for the reasonable and efficient zone plan. In this research, the information about the testing area for the zone plan has been gathered using GIS method, and the three-dimensional model about the area has been built using the satellite image and DEM. As the result, plot usage analysis, direction analyst, water system analysis, and slope analysis has been done and used efficiently to build the district unit plan. Also, after the result after applying the analyzed result to the actual area says this is very appropriate and efficient.

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