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폐상피세포에서 Triptolide에 의한 NF-${\kappa}B$ 의존성 IL-8 유전자 전사활성 억제기전
지영구,김윤섭,윤세영,김용호,최은경,박재석,김건열,채기남,곽상준,이계영,Jee, Young-Koo,Kim, Yoon-Seup,Yun, Se-Young,Kim, Yong-Ho,Choi, Eun-Kyoung,Park, Jae-Seuk,Kim, Keu-Youl,Chea, Gi-Nam,Kwak, Sahng-June,Lee, Kye-Young 대한결핵및호흡기학회 2001 Tuberculosis and Respiratory Diseases Vol.50 No.1
연구배경 : 폐상피세포가 능동적으로 IL-8을 분비한다는 것은 주지의 사실이다. NF-${\kappa}B$는 IL-8 발현 조절에 있어서 가장 중요한 역할을 담당하는 전사인자이다. Triptolide는 최근 밝혀진 NF-${\kappa}B$ 억제제로서 중국한약제인 뇌공등 (Tripterygium Wilfordii)에서 추출된약제이다. 연자들은 새로운 NF-${\kappa}B$ 억제제인 triptolide가 폐상피세포에서 NF-${\kappa}B$ 의존성 IL-8 유전자의triptolide가 염증성 폐질환에서 새로운 치료제로서의 가능성을 확인하기 위하여 본 연구를 시행하였다. 방법 : 폐상피세포로서 A549 사용하였고 triptolide는 미국의 Pharamagenesis(Palo Alto, CA)사로부터 제공받았다. NF-${\kappa}B$ 활성유도물질로는 IL-$1{\beta}$(R&D)와 PMA(Sigma)를 이용하였다. IL-8 유전자의 발현은 RT-PCR과 ELISA를 이용하여 측정 하였다. NF-${\kappa}B$의존성 IL-8 유전자의 전사활성을 평가하기 위하여는 IL-8 NF-${\kappa}B$ luciferase construct를 안정적으로 유전자주입한 A549 IL-8 NF-${\kappa}B$ luciferase 세포주를 제조해 사용하였고 NF-${\kappa}B$ DNA 결합은 electromobility shift assay(EMSA)를 이용하였다. p65 전사활성을 assay하기 위해서는 Gal4-p65 fusion protein expression system을 유전자주입과 luciferase assay를 통하여 시행하였다. Transcriptional coactivator의 역할을 규명 하가 위하여서는 CBP(CREB-binding protein)와 SRC-1(steroid receptor coactivator-1) 발현 벡터를 유전자 주입하고 luciferase assay를 이용하여 확인하였다. 결과 : Luciferase assay로 triptolide가 PMA와 IL-$1{\beta}$자극에 의한 IL-8 NF-${\kappa}B$ 활성을 의미있게 감소시킴을 확인하였다. IL-8 ELISA와 RT-PCR로 triptolide가 PMA와 IL-$1{\beta}$ 자극에 의해 유도되는 IL-8 발현을 각각 단백질과 mRNA 수준에서 억제함을 관찰하였다. Triptolide가 PMA와 IL-$1{\beta}$에 의한 IL-8 NF-${\kappa}B$의 전사활성을 억제시킨 반면 EMSA와 $I{\kappa}B{\alpha}$ Western blot을 이용한 실험에서는 triptolide가 NF-${\kappa}B$ DNA 결합과 $I{\kappa}B{\alpha}$의 분해에 전혀 영향을 미치지 못함을 확인하였다. 이러한 전사활성 억제와 DNA 결합 간의 불일치의 원인으로서는 DNA 결합 이후에 발생하는 핵내 에서의 transactivation에 triptolide가 영향을 미치리라고 생각되어 p65 transactivation study를 Gal4-p65T A(p65의 transactivation domain) fusion protein 발현 시스템과 luciferase assay를 이용하여 시행한 결과 triptolide가 p65 transactivation을 억제함으로써 NF-${\kappa}B$를 억제함을 확인하였다. 그러나 CBP나 SRC-1과 같은 coactivator의 역할을 규명하기 위한 유전자주입 실험에서 triptolide에 의한 p65 transactivation 억제에 대해 CBP나 SRC-1의 과발현이 별다른 영향을 미치지 못하였다. 결론 : Triptolide는 폐상피세포에서 NF-${\kappa}B$ 의존성 IL-8 유전자의 전사활성을 억제하고 그 기전은 $I{\kappa}B{\alpha}$ 경로가 아닌 핵내에서의 p65 transactivation 억제에 의해 발생하며 이에는 CBP나 SRC-1과 같은 coactivator가 관여하지 않음을 확인하였다. Background : NF-${\kappa}B$ is the most important transcriptional factor in IL-8 gene expression. Triptolide is a new compound that recently has been shown to inhibit NF-${\kappa}B$ activation. The purpose of this study is to investigate how triptolide inhibits NF-${\kappa}B$-dependent IL-8 gene transcription in lung epithelial cells and to pilot the potential for the clinical application of triptolide in inflammatory lung diseases. Methods : A549 cells were used and triptolide was provided from Pharmagenesis Company (Palo Alto, CA). In order to examine NF-${\kappa}B$-dependent IL-8 transcriptional activity, we established stable A549 IL-8-NF-${\kappa}B$-luc. cells and performed luciferase assays. IL-8 gene expression was measured by RT-PCR and ELISA. A Western blot was done for the study of $I{\kappa}B{\alpha}$ degradation and an electromobility shift assay was done to analyze NF-${\kappa}B$ DNA binding. p65 specific transactivation was analyzed by a cotransfection study using a Gal4-p65 fusion protein expression system. To investigate the involvement of transcriptional coactivators, we perfomed a transfection study with CBP and SRC-1 expression vectors. Results : We observed that triptolide significantly suppresses NF-${\kappa}B$-dependent IL-8 transcriptional activity induced by IL-$1{\beta}$ and PMA. RT-PCR showed that triptolide represses both IL-$1{\beta}$ and PMA-induced IL-8 mRNA expression and ELISA confirmed this triptolide-mediated IL-8 suppression at the protein level. However, triptolide did not affect $I{\kappa}B{\alpha}$ degradation and NF-$_{\kappa}B$ DNA binding. In a p65-specific transactivation study, triptolide significantly suppressed Gal4-p65T Al and Gal4-p65T A2 activity suggesting that triptolide inhibits NF-${\kappa}B$ activation by inhibiting p65 transactivation. However, this triptolide-mediated inhibition of p65 transactivation was not rescued by the overexpression of CBP or SRC-1, thereby excluding the role of transcriptional coactivators. Conclusions : Triptolide is a new compound that inhibits NF-${\kappa}B$-dependent IL-8 transcriptional activation by inhibiting p65 transactivation, but not by an $I{\kappa}B{\alpha}$-dependent mechanism. This suggests that triptolide may have a therapeutic potential for inflammatory lung diseases.
지영구,조희경 대한가정의학회 2004 Korean Journal of Family Medicine Vol.25 No.6
기침은 외래에서 가장 흔히 접하게 되는 증상 중의 하나로서 다양한 원인질환에 의해서 일어날 수 있다. 흉부X선 소견이 정상이면서 기침의 지속기간이 3주 이상이면 만성기침이라고 한다. 적절한 진단적 접근 방법을 이용하면 기침의 원인을 90% 이상 밝힐 수 있으며, 비흡연자에서 후비루증후군, 기관지천식, 위식도역류 등이 가장 흔한 원인질환이다. 만성기침의 원인은 한 가지가 아니라 여러 가지일 수가 있으며 이런 경우에는 각각의 질환에 대한 복합치료가 필요하다. 만성기침은 원인질환에 대한 충분한 이해를 기초로 체계적인 진단적 접근 방법과 구체적인 치료에 의해서 좋은 결과를 얻을 수 있다.
만성 기침으로 내원한 환자에서 원인 질환 및 빈도에 관한 전향적 연구
지영구,오형태,이계영,김건열,조상헌,민경업,김유영 (Young Koo Jee,Hyung Tae Oh,Kye Young Lee,Keun Yeol Kim,Sang Heon Cho,Kyung Up Min,You Young Kim) 대한천식알레르기학회 1998 천식 및 알레르기 Vol.18 No.2
Background: Chronic cough is commonly defined as a persistent or recurrent cough exceeding 3 weeks duration and the prevalence of chronic cough is reported to range from 14-23% among non-smoking adults. Irwin et al previously reported that common causes of chronic cough are postnasal drip syndrome asthma, and gastroesophageal reflux using the anatomic and diagnostic protocol. Objective: To determine the spectrum and frequency of chronic cough and to aid establishing algorithmic approach for chronic cough. Materials and metkod: We prospectively evaluated 105 consecutive and unselected immunocompetent patients complaining of chronic cough utilizing modified anatomic and diagnostic protocol proposed by Irwin et al. Initial diagnosis was made by history, physical examination and laboratory test including spirometry, methacholine provocation test, and 24 hour pH monitoring. Specific treatment was done based upon initial diagnosis and cough score was compared before and after treatment. Reassessment was done in case of treatment failure. Resalt: The causes of cough were determined in 100 of 105 patients(95% ). Cough was due to one condition in 94.8% and two in 15.2%. 121 causes of cough were identified and their spectrum and frequency were found to be postnasal drip syndrome (39.3% ), asthma (32.2% ), gasteroesophageal reflux (14.1%), chronic bronchitis (5.0%), others (4.1%: drug-induced, bronchiolitis, endobronchial tuberculosis, and lung cancer). History about nasal symptoms was useful, but history about gastroesophageal reflux were not useful for the diagnosis. Conclusion: The results suggest that anatomic and diagnostic approach for evaluating chronic cough is also useful in Korea and the most common causes of chronic cough are postnasal drip syndrome, asthma and gastroesophageal reflux.