청주 제조 중 Ethyl Caproate 생성에 미치는 청주효모 Esterases의 영향

이종훈 한국산업미생물학회 1998 한국미생물·생명공학회지 Vol.26 No.1

청주가 가지고 있는 향기는 청주의 품질을 결정하는 요인 중의 하나이다. 청주의 향기는 발효과정 중 주로 효모에 의해서 발생하는 것으로 알려지고 있고, ethyl caproate는 향기성분 중의 하나로 esterase가 생성에 관여하고 있는 효소의 하나로 보고되었다. 반면 청주 제조에 사용되는 청주효모와 코지균은 ethyl caproate의 생성과 분해 활성을 가진 esterase를 생산하는 것으로 보고 되었다. 본 연구에서는 청주 제조 중 발생하는 ethyl caproate의 생성에 미치는 청주효모와 코지균이 가지고 있는 esterase들의 영향을 알아보기 위하여 코지균과 청주효모의 생장 중 발생하는 ethyl caproate 합성과 분해에 관련하고 있는 exterase들의 활성 변화에 대하여 알아 보았다. 청주효모가 가지고 있는 ethyl caproate 합성 esterase는 caproate에 의해서 유도되고, 분해 esterase는 ethyl caproate에 의해서 유도되지만 caproate에 의해서 저해되는 것으로 나타났다. 코지균의 ethyl caproate 합성과 분해 esterase 활성은 균체의 성장에 비례하여 증가하였으나 ethyl caproate 생성의 기질이 되는 caproate와 ethanol이 활성에 영향을 미치지 못하는 것으로 나타났다. 또한 코지균의 배양액에서 ethyl caproate 합성 esterase의 활성이 측정됨에도 불구하고 0.01 ppm까지 ethyl caproate를 검출할 수 있는 분석조건 하에서 배지 중의 ethyl caproate는 검출되지 않았다. 본 실험의 결과를 고려한다면 청주의 제조과정 중 생성되는 ethyl caproate는 코지균의 esterase에 의해서는 거의 생성되지 않고 당화과정 후 첨가되는 청주효모가 주로 생성하는 것으로 확인되었다. 또한 청주효모의 증식과정 중에는 효모의 생장과 더불어 ethanol이 생성되어 코지균의 생장을 억제한다. 따라서 청주제조 중 생성되는 ethyl caproate는 청주효모의 esterase에 의해 생산된 것으로 사료된다. Ethyl caproate is one of the important flavor compounts produced during the brewing of rice wine. The rice wine yeast and koji were reported to produce the esterases which synthesize and also hydrolyze ethyl caproate. From the results of monitoring the esterase activities of rice wine yeast and koji, their roles for producing ethyl caproate during brewing were postulated. In case of rice wine yeast, the production of esterase synthesizing ethyl caproate was influenced by the substrate, caproate but that of esterase hydrolyzing ethyl caproate was promoted by ethyl caproate but inhibited by caproate. The production of esterases of koji were not influenced by the substrates for ethyl caproate production but influenced by the growth of koji. The maximum concentration of ethyl caproate produced by rice wine yeast was 0.4 ppm in this research but the production of ethyl caproate by koji was not detected under our experimental conditions. Considering the results of this research, ethyl caproate is not produced by the esterases of koji during brewing but produced by the esterases of rice wine yeast. The growth of rice wine yeast represses that of koji because of the high concentration of ethanol produced by rice wine yeast. The esterases of rice wine yeast may decide the production of ethyl caproate during brewing.

재조합 대장균의 고농도 배양과 유도조건 최적화를 통한 Bacillus 유래 esterase의 생산

강승훈 ( Seung-hoon Kang ),민병혁 ( Byung-hyuk Min ),최홍열 ( Hong-yeol Choi ),김동일 ( Dong-il Kim ) 한국미생물생명공학회(구 한국산업미생물학회) 2017 한국미생물·생명공학회지 Vol.45 No.2

본 연구에서는 Bacillus 유래 esterase를 생산할 수 있는 재조합 대장균을 사용하여 유가식 배양을 이용한 고농도 균체 배양을 통해 esterase 생산성을 극대화하고자 하였다. 유가식 배양 중 순수 산소의 공급을 통해 용존산소를 30% 이상 유지한 경우와 포도당농도를 1 g/l 이상 유지한 경우 각각 OD₆₀₀ 76 (35.8 g/l DCW)과 OD₆₀₀ 90 (42.4 g/l DCW)까지 균체량을 증가시킬 수 있었다. 포도당의 공급에도 불구하고 배양 후반에 세포의 성장이 정체되는 현상을 극복하기 위해 yeast extract가 강화된 추가 배지의 공급을 시도하였으며, 그 결과 OD₆₀₀ 185 (87.3 g/l DCW)까지 고농도 균체배양이 가능함을 확인하였다. 단백질 생산 수율의 향상을 위해 성장 시기에 따라 induction에 의한 세포 성장과 esterase생산성을 평가하였고, 그 결과 대수 성장기 후반에 induction을 유도한 경우 세포 성장 측면에서는 최대 OD₆₀₀ 190(89 g/l DCW)까지 고농도 균체 배양이 가능함을 확인하였다. Esterase 생산성 측면에서는 대수 성장기 초반에 induction을 유도한 경우에 비해 최대 5.8배 생산성이 증가됨을 확인할 수 있었다. 따라서 본 연구를 통해 순수산소와 질소원의 공급을 통해 확립된 대장균 고밀도 배양방법을 기초로 IPTG유도시간을 최적화 함으로써 Bacillus 유래 esterase의 최대 생산성을 확보할 수 있는 배양방법을 확립하였다. To increase the efficiency of esterase production by Bacillus, high cell-density culture of recombinant Escherichia coli through fed batch fermentation was tested. Cells were cultured to OD₆₀₀ of 76 (35.8 g/l DCW) with dissolved oxygen level controlled to least above 30% air saturation by supplying pure oxygen. Cells were cultured to an OD₆₀₀ of 90 (42.4 g/l DCW) with glucose feeding controlled to at least 1 g/l. How-ever, the cells reached stationary phase at the late stage of culture, despite glucose being supplied. Cells were cultured to an OD₆₀₀ of 185 (87.3 g/l DCW) by supplying additional medium with fortified yeast extract. To increase the productivity of the recombinant protein, cell growth and esterase productivity based on induction time were evaluated. Late exponential phase induction for esterase production in fed batch fer-mentation resulted in maximum optical density OD₆₀₀ of 190 (89 g/l DCW) and maximum esterase activity of 1745 U/l, corresponding to a 5.8-fold enhancement in esterase production, compared to the early exponent-tial phase induction. In this study, we established fermentation methods for achieving maximum produc-tion of Bacillus-derived esterase by optimizing IPTG induction time in high-cell density culture by supplying pure oxygen and a nitrogen source.

재조합 균주 Escherichia coli가 생산하는 Bacillus stearothermophilus Acetyl Xylan Esterase의 정제 및 특성

김인숙,이철우,최용진 한국산업미생물학회 1994 한국미생물·생명공학회지 Vol.22 No.5

Bacillus stearothermophilus의 acetyl xylan esterase 유전자를 pBR322에 크로닝하여 얻은 재조합 프라스미드를 가진 E. coli HB101/pKMG6 균주에 의한 esterase 생산 최적 배지 조성을 조사, 탄소원으로 0.5% acetylated birchwood xylan, 질소원으로 1% yeast extract를 사용했을 때 최대량의 효소 생산효과를 얻었다. 또한 상기 배지에서 다량의 효소를 생산하고 생산 효소를 ammonium sulfate 분획, DEAE Sepharose CL-6B column chromatography 및 Sephacryl S-200 gel filtration 등의 과정을 거쳐 단일 단백질로 정제하였다. 정제 esterase는 45℃ ; pH 6.5에서 가장 높은 효소 활성을 보였으며 1 mM Ag^(++), Cu^(++), Hg^(-+) 등에 의해 거의 완전한 실활을 나타내었으며 촉매 활성을 위해 어떤 특별한 금속 이온을 요구하지 않는 것으로 분석되었다. 또한 본 효소의 분자량은 gel 여과법으로는 약 60,000 dal, SDS-polyacrylamide gel 전기 영동법으로는 약 29,0000 dal으로 측정됨으로써 본 효소는 동일 subunit로 구성된 dimer인 것으로 밝혀졌으며 N-말단 아미노산 서열은 Ala-X-Leu-Gln-Ile-Gln-Phe-X-X-Gln으로 결정되었다. 한편 본 esterase는 ρ-nitrophenyl propionate, ρ-nitrophenyl butyrate 및 ρ-nitrophenyl valerate 등의 기질에는 잘 작용하지 않으나 acetyl xylan, α-naphtyl acetate, β-D-glucose pentaacetate, ρ-nitrophenyl acetate 및 MAS 등에는 매우 높은 활성을 나타내었다. MAS 기질에 대한 Km 값은 2.87 mM, Vmax 값은 11.55 μ㏖/min으로 측정되었다. 그리고 acetyl xylan 기질을 본 esterase로 전처리한 다음 xylanase로 가수분해시켰을 때 뚜렷한 상승 효과를 관찰함으로써 본 esterase가 일종의 acetyl xylan esterase 임을 확인할 수 있었다. Acetyl xylan esterase was produced by E. coli HB101 harboring a recombinant plasmid pKMG6 which contained the estI gene of Bacillus stearothermophilus. The maximum production was observed when the E. coli strain was grown at 37℃ for 12 hours in the medium containing 0.5% acetyl xylan, 1.0% tryptons, 1.0% sodium chloride, and 0.5% yeast extract. The esterase produced was purified to homogeneity using a combination of ammonium sulfate fractionation, DEAE Sepharose CL-6B ion exchange chromatography and Sephacryl S-200 gel filration. The native enzyme had an apparent molecular mass of 60 kd and was composed of two identical subunits of 29 kd. The N-terminal amino acid sequence of the polypeptide was Ala-X-Ley-Gln-Ile-Gln-Phe-X-X-Gln. The acetyl esterase displayed a pH optimum of 6.5 and a temperature optimum of 45℃. The heavy metal ions such as Ag^(++), Hg^(++) and Cu^(++) inhibited nearly completely the activity of the esterase, and no specific metal ion was found to be required for the enzyme activity. The enzyme readily cleaved MAS, β-D-glucose pentaacetate, α-naphtyl acetate, ρ-nitrophenyl acetate as well as acetyl xylan, but hd no activity on ρ-nitrophenyl propionate, β-nitrophenyl butyrate or β-nitrophenyl valerate. The Km and Vmax values for MAS were 2.87 mM and 11.55 μ㏖/min, respectively. Synergistic behavior was demonstrated with a combination of xylanase and esterase from B. stearothermophilus in hydrolyzing acetyl xylan.

배추흰나비(Pieris rapae L.)의 중장내 esterase

임도선,문명진,여성문 한국곤충학회 1991 Entomological Research Vol.21 No.2

배추흰나비 (Pieris rapae L.)의 종령기 동안의 중장내 esterase위치와 활성을 투과전자현미경을 이용한 세포화학적 방법과 전기영동적 방법으로 확인하여 다음과 같은 결과를 얻었다. Esterase 기질인 a-naphthyl acetate와 fast blue B salt의 혼합액($25^{\circ}C$, 0.067M phosphate buffer, pH 5.8)으로 처리한 조직표본을 전자현미경으로 관찰한 결과, esterase의 반응생성물은 주로 배상세포(gobletcell)의 원형질 돌기와 상피세포의 미세융모(microbilli) 주위에서 전자밀도가 높은 과립의 형태로 관찰되었다. 전기영동적 방법에 의해 총 12개의 esterase band가 분리되었으며, 중장에서 분비되는 esterase의 대부분은 carboxylesterase인 것으로 극인되었다. The localization of the midgut esterase in the cabbage worm, Pieris rapae, during the last larval period was observed with cytochemical treatment using transmission electron microscope and esterase activity was also identified by electrophoresis. The reaction product of esterase to the substrate solution (mixture of a-naphthyl acetate and fast blue B salt) was observed both in the protoplasmic processes of the goblet cells and in the microvilli of the columnar epithelial cells as electron dense granules. Twelve esterase bands were separated in the midgut during this period and the major midgut esterase was identified to be the carboxylesterases.

The Comparison of Microscopic Urine Sediment, Nitrite, and Leukocyte Esterase Tests for Bacteriuria

Shin, Bo-Moon 대한감염학회 2004 감염과 화학요법 Vol.36 No.2

목적 : 세균뇨의 진단에는 요배양 검사가 확진검사이지만 임상에서는 통상적으로 요시험지를 이용한 백혈구 효소검사(leukocyte esterase), nitrite 검사 및 요침사의 현미경적 관찰로 백혈구 및 세균의 유무를 관찰하여 빠른 진단을 하고자 한다. 그러나 이들 검사는 종종 상호간의 불일치를 보이고 있어 해석상의 문제를 야기한다. 따라서 요배양 검사를 기준으로 이들 검사를 비교하여 임상적인 유용성과 진단적 가치를 알아보가자 하였다. 방법 : 290명의 요 검체로 정량적 요배양을 실시하였으며, 동일 검체로 요시험지(Combur 10, Roche, Germany)를 이용한 leukocyte esterase 및 nitrite검사와 요침사를 이용한 현미경 검사로 백혈구 및 세균 유무를 관찰하였다. 결과 : 10⁴CFU/mL을 양성 기준으로 요배양 검사를 판독하였을 때 요로 감염균군은 51예(17.6%), 오염균군은 87예(30.0%), 배양음성군은 152예(52.4%)였다. Leukocyte esterase와 현미경상의 백혈구 관찰 일치율은 70.7%였다. Leukocyte esterase, 현미경상의 백혈구 및 현미경상의 세균의 민감도 및 특이도는 각각 72.5%/ 61.8%, 76.5%/44.1%와 80.4%/92.1%였다. 이들의 양성 및 음성 예측도는 각각 24% (62.3%)/69.1% (89.7%), 21.3% (53.6%)/62.6% (88.8%), 51.9% (84.8%)/66.4% (95.3%)였다. Nitrite검사의 양성률은 감염균군에서 37.2%였고 오염균군 및 배양음성균군에서는 각각 2.2%와 1.3%였다. 결론 : 세균뇨의 빠른 진단을 위해 통상적으로 사용하고 있는 요시험지를 이용한 백혈구 효소검사(leukocyte esterase), nitrite 검사 및 요침사의 현미경적 관찰 중 백혈구 항목은 임상적 의의가 낮았다. Nitrite 검사는 양성률이 감염균군에서 오염균군과 배양음성균군에 비해 높았지만, 임상적인 의의는 상당히 낮은 것으로 판단하였다. 배양 결과를 기준으로 할 때 요침사 현미경하의 세균의 유무를 관찰하는 것이 가장 높은 민감도, 특이도, 양성 및 음성 예측도를 보여 세균뇨의 빠른 진단에 유용한 검사항목이라고 사료되었다. Background : Although bacteriologic culture remains the gold standard for detecting bactriuria, leukocyte esterase, nitrite and urine microscopy are also widely used. However, it is not uncommon to be presented with a discrepancy between these tests. Methods : We performed leukocyte esterase and nitrite tests by urine reagent strip testing (Combur 10 Test, Roche, Germany), microscopic urinalysis, and by bacteriologic urine culture on 290 persons. Results : The number of pathogens and non-pathogens were 51 (17.6%) and 87 (30.0%) respectively. The number of cases in which no microorganism was isolated (NMI group) was 152 (52.4%). The concordance rate between leukocyte esterase and microscopic leukocytes (leukocyturia) was 70.7%. The sensitivities and specificities of leukocyte esterase, microscopic leukocyte and microscopic bacteria were 72.5%/61.8%, 76.5%/44.1% and 80.4%/92.1% respectively, and their positive predictive values and negative predictive values were 24% (62.3%)/69.1% (89.7%), 21.3% (53.6%)/62.6% (88.8%) and 51.9% (84.8%)/66.4% (95.3%), respectively. Although the nitrite test showed higher positive rates inthe pathogen groups (37.2%) than in the non-pathogen group (2.2%) and NMI group (1.3%), this was only marginally significant. Conclusion : The microscopic estimation of bacteria is more a predictable mariner of bacteriuria, rather than leukocyte esterase, nitrite, and microscopic leukocytes, in urine.

Klebsiella pneumoniae의 esterase유전자 cloning과 대장균에서의 고발현

정용준 한국미생물학회 2021 미생물학회지 Vol.57 No.1

Optically active DβAcetylthioisobutyric acid (DAT) is used as a starting material in the synthesis of captopril as a valuable chiral drug in the treatment of hypertension. For an efficient DAT production by a stereoselective hydrolysis, Klebsiella pneumoniae CJ317 producing a thermostable esterase was isolated in previous study. In order to construct an esterase hyperproducing strain, the esterase gene of K. pneumoniae CJ317 was cloned into Escherichia coli and was found to show a highlevel expression, which the esterase activity of the recombinant E. coli was more than 800 times higher than that of parental strain. The nucleotide sequences of 1.6 kb BamHIEcoRI fragment containing the esterase gene were sequenced and found to include an open reading frame (ORF) of 837 bp coding 278 amino acid residues. The deduced amino acid sequence of the ORF was classified as an α/β hydrolase superfamily and showed the highest identity of 71% with that of an esterase from Pseudomonas putida MR2068. By using the recombinant E. coli as a catalyst, highly expressing the thermostable esterase gene, an efficient production of DAT by stereoselective hydrolysis with microbial cells could be useful. 고혈압 치료제로 알려진 captopril의 합성 과정에서 중간물 질인 순수 광학이성체인 DβAcetylthioisobutyric acid (DAT) 를 효율적으로 제조하기 위해 이미 보고된 Klebsiella pneumoniae CJ317가 생산하는 내열성 광학선택적 esterase 효소 의 유전자를 대장균(Escherichia coli)에 클로닝(cloning)하였 고 고발현 재조합주를 제조하였다. 발현된 대장균 재조합주는 esterase 유전자가 함유된 1.6 kb의 BamHIEcoRI 단편이 삽입 되었고 esterase 활성을 측정한 결과, 원균주인 K. pneumoniae CJ317에 비해 800배 이상 고발현되는 것으로 확인하였다. 1.6 kb 단편의 염기 서열을 분석한 결과, 837 bp로 이루어진 open reading frame (ORF)이 발견되었고 278 아미노산으로 구성된 단백질을 암호화하는 것으로 추정되었다. 아미노산 서열의 상 동성을 분석한 결과, α/β hydrolase superfamily에 속하는 효소 단백질로 추정되며, Pseudomonas putida MR2068의 esterase 서열과 71%의 가장 높은 상동성을 보여주었다. 본 연구를 통 해 제조한 고발현 대장균 재조합주를 활용함으로써 captopril 합성의 중간체로서 순수 광학이성체인 DAT의 고효율 제조기 술개발 가능성을 연구하였다.

상아질 접착에서 collagenase와 esterase가 미세인장결합강도에 미치는 영향

정영정,현홍근,김영재,김정욱,이상훈,김종철,한세현,장기택 대한소아치과학회 2007 大韓小兒齒科學會誌 Vol.34 No.2

상아질-레진 접착강도에 대한 collagenase와 esterase의 영향을 살펴보기 위해, 소구치의 교합면 상아질에 Single Bond 2와 Clearfil SE Bond로 접착을 시행하고 미세 시편을 제작하여 PBS, collagenase 용액, esterase 용액에 4주간 보관한 후 미세인장결합강도를 측정, 비교하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 모든 보관 용액에서 Single Bond 2의 미세인장결합강도는 Clearfil SE Bond보다 유의하게 낮았다(p<0.05). 2. Single Bond 2의 미세인장결합강도는 collagenase군이 PBS군, esterase군보다 낮았다(p>0.05). 3. Clearfil SE Bond의 미세인장결합강도는 esterase군이 PBS군에 비해 낮았으나(p>0.05), collagenase군보다는 높았다(p>0.05). Collagenase군은 PBS군에 비해 유의하게 낮은 미세인장결합강도를 보였다(p<0.05). The purpose of this study was to evaluate the effect of collagenase and esterase on the microtensile bond strength (μTBS) in dentin bonding. After resin composites were bonded to occlusal dentin, μTBS specimens were formed and stored in PBS, collagenase, or esterase solution. After 4-week storage, μTBS was determined and, the results were as follows: 1. μTBS values of Single Bond 2 were lower than those of Clearfil SE Bond for all storage medium (p<0.05). 2. In single Bond 2 group, collagenase solution lowered bond strength more than PBS and esterase solution (p>0.05). 3. In Clearfil SE Bond group, esterase solution lowered bond strength more than PBS(p>0.05). Collagenase solution lowered bond strength more than esterase solution(p>0.05) and PBS(p<0.05).

단일 혼합시료와 단일 반응을 이용하여 간편화시킨 이중 Esterse 염색 기법

최종원,배수환 대한임상병리학회 1998 대한임상병리학회지 Vol.18 No.2

재조합 균주 Escherichia coli가 생산하는 Bacillus stearothermophilus Acetyl Xylan Esterase Ⅱ의 정제 및 특성

김희선,서정한,최용진 한국산업미생물학회 1995 한국미생물·생명공학회지 Vol.23 No.4

Bacillus stearothermophilus estII 유전자가 클로닝된 재조합 플라스미드인 pKMG7을 가지고 있는 E. coli HB101 균주로 부터 acetylxylan esterase를 다량 생산, 정제하여 그 특성을 조사하였다. 효소 생산 최적 배지는 0.5% galactose, 1% yeast extract 그리고 1% NaCl이었으며 37℃에서 19시간 배양했을 때 가장 높은 효소생산량을 보였다. 생산 esterase는 ammonium sulfate 분획, DEAE- Sepharose CL-6B ion exchange chromatography 및 Sephacryl S-200 gel filtration chromatography 과정을 거쳐 단일 단백질로 정제하였다. 정제 효소는 pH 6, 45℃에서 가장 높은 활성을 보였고 열에 비교적 안정하였다. 또한 본 효소는 구성 아미노산 잔기 중 methionine, serine, cysteine이 촉매 활성에 필수적인 역할을 하고 있음을 알 수 있었다. 분자량은 gel 여과법으로 약 120 kDa, SDS-polyacrylamide gel 전기 영동법에 의해서는 약 28 kDa으로 측정됨으로써 본 효소분자는 4개의 동일 subunit로 구성된 단백질인 것으로 생각되며 N-말단 아미노산 서열은 Ala-Leu-Phe-Glu-Ser-Arg-Phe-Phe-Ser-Glu-Val-Leu-Gly-Leu로 결정되었다. Acetylxylan esterase II was produced by Escherichia coli HB101 harboring the recombinant plasmid pKMG7 which contained the estII gene of Bacillus stearothermophilus. Optimal medium for the production of the acetylxylan esterase by E. coli HB101/pKMG7 was determined to contain 0.5% galactose, 1% yeast extract and 1% NaCl. The enzyme produced was purified to homogeneity using a combination of 20∼50% ammonium slufate precipitation, DEAE-Sepharose CL-6B chromatography and Sephacryl S-200 gel filtration. The temperature and pH optimum of the esterase were 45℃ and pH 6, respectively. The essential amino acids for the esterase activity were found to be methionine, serine, and cysteine. Molecular weight of the esterase ws determined to be 28 kDa by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, and 120 kDa by gel filtration. This suggests that the functional enzyme is a homomeric tetramer. The esterase had an isoelectric point of pH 3.4. The N-terminal amino acid sequence of the enzyme was Ala-Leu-Pe-Glu-Ser-Arg-Phe-Phe-Ser-Glu-Val-Leu-Gly-Leu.

Bacillus stearothermophilus Acetylxylan Esterase 유전자(estⅠ)의 염기 서열 결정

이정숙,최용진 한국산업미생물학회 1997 한국미생물·생명공학회지 Vol.25 No.1

강력한 xylan 분해 분리 균주인 Bacillus stearothermophilus의 acetylxylan esterase 유전자(estⅠ)의 염기 서열을 결정 분석하였다. estⅠ 유전자는 810 bp의 270개의 아미노산을 지시하는 ORF로 구성되어 있으며 ATG initiation codon의 9 bp 윗쪽에 SD-sequence로 추정되는 AGGAGG, 그리고 53 bp 더 윗쪽에는 promoter로 추정되는 염기 서열의 존재를 확인할 수 있었다. 추정 -10 element(TCCAAT)와 -35 element(TTGAAT)는 Bacillus subtilis promoter consensus sequence와 높은 유사성을 나타내고 있다. estⅠ 유전자의 G+C 함량은 51%, codon의 세번째 자리의 G+C 분포량은 60.2%로 고온성 세균의 G+C 함량의 일반적인 경향을 보이고 있다. 한편, 염기 서열로부터 산출된 EstⅠ의 분자량은 30 kDa으로 정제 효소의 SDS-PAGE로부터 측정된 분자량인 29 kDa과 큰 차이를 보이지 않았다. 또한 상기 ORF의 N-말단 아미노산 서열은 MAMIQIQFFSQ로서 정제 EstⅠ 단백질의 N-말단 서열과 완전 일치되고 있다. 또 EstⅠ 효소의 아미노산 서열을 분석해 본 결과 지금까지 보고되고 있는 다른 esterase와 lipase 등의 촉매 부위의 conserved sequence(GXSXG)와 일치되는 GLSMG(123-127 codons)를 가지고 있어 이 부분이 EstⅠ 효소의 촉매 부위일 것으로 추정된다. 또한, estⅠ 유전자의 염기 서열은 지금까지 보고되고 있는 유일한 acetylxylan esterase 유전자인 Caldocellum saccharolyticum xylC와 55.7%, 그리고 아미노산 서열은 57%의 동일성을 나타내고 있다. The nucleotide sequence of the estⅠ gene encoding acetylxylan esterase Ⅰ of Baillus stearothermophilus was determined and analyzed. The estⅠ gene was found to consist of a 810 base pair open reading frame coding for a polypeptide of 270 amino acids with a deduced molecular weight of 30 kDa. This was in well agreement with the molecular weight (29 kDa) estimated by SDS-PAGE of the purified esterase. The coding sequence was preceded by a putative ribosome binding site 10 bp upsteam of the ATG codon. Further 53 bp upsteam, the transcription initiation signals were identified. The putative -10 sequence (TCCAAT) and -35 seqence (TTGAAT) corresponded closely to the respective consensus sequences for the Bacillus subtilis major RNA polymerase. The G+C content of the coding region of the estⅠ was 51% whereas that of the third position of codons was 60.2%. The N-terminal amino acid sequence of the EstⅠ dedeced from the nucleotide sequence perfectly matched the corresponding region of the purified esterase described previously. Comparison with the amino acid sequence of other esterases and lipases reported so far allowed us to identify a sequence, GLSMG at positions 123 to 127 of the EstⅠ which was reported to be the highly conserved active site sequence for those enzymes. The nucleotide sequence of the estⅠ revealed 55.7% homology to that of the xylC coding for the acetylxylan esterase of Caldocellum saccharolyticum.