동종골수이식 후 Variable Number of Tandem Repeat 다형성을 이용한 생착의 확인과 키메리즘 양상의 감시

안진석,박영이,정철원,양성현,이숭덕,이정빈,박선양,김병국 대한조혈모세포이식학회 2002 대한조혈모세포이식학회지 Vol.7 No.1

연구배경: 성공적인 동종골수이식 후 조혈세포는 공여자에서 유래하는 세포로 완전 대치된다. 따라서 키메리즘을 분석하는 것이 이식의 생착과 실패를 조기에 발견하는 데 도움을 줄 수 있다. 그러나 환자 세포와 공여자 세포가 혼재하는 혼합 키메리즘이 지속되어도 생착과 무병생존이 가능하므로 그 임상적 의미에 대한 규명이 필요하다. 한편 VNTR은 다형성이 높아 개체 감별력이 우수하다. 저자들은 VNTR에 대한 PCR 조건을 확립하고 이식 초기의 생착 확인과 이식 후 환자의 추적 조사에서의 유용성을 알아보고자 하였다. 방법: 각종 혈액질환으로 동종골수이식을 받은 50명의 환자를 대상으로 하였다. 이식 전에 환자와 공여자의 혈액을 채취하였다. 이식 후 첫 1개월 동안에는 1주 간격으로, 이후로는 수개월 간격으로 환자의 혈액 혹은 골수를 채취하였다. 혈액 혹은 골수의 단핵세포층에서 DNA를 분리하여 D1S80, D17S5, ApoB, vWF, MBP, TC-11, Col2A1 유전자자리에 대한 PCR을 시행하였다. 증폭 생성물은 4% 폴리아크릴아미드겔에서 전기영동 후 은염색으로 확인하였다. 결과: 환자와 공여자 50쌍 모두에서 정보를 제공하는 유전자자리를 확인하였다. 50명 중 46명이 1개월 내에 공여자 완전 키메리즘으로 전환되었다. 1개월 내에 완전 키메리즘으로 전환되지 않은 환자 4명 가운데 2명은 이식 거부, 1명은 질환의 재발을 보였고, 1명은 관해 상태로 1년 후 완전 키메리즘으로 전환되었다. 이식 후 추적기간 동안 질환이 재발한 10명 중 9명에서 사전에 혼합 키메리즘을 발견하지 못한 반면 경과 중 일시적 혼합 키메리즘을 보였던 5명의 백혈병 환자는 재발 없이 관해를 유지하고 있었다. 결론: 동종골수이식에서 VNTR에 대한 PCR은 공여자와 환자 세포의 감별, 이식 초기의 생착 및 이식 거부의 확인에 유용한 검사 방법이었다. 추적 기간 중 혼합 키메리즘의 의미에 대해서는 더 많은 연구가 필요할 것으로 생각한다. Background: After successful allogeneic bone marrow transplantation (BMT), Donor cells replace patient's hematopoietic cells. Therefore, it is useful to evaluate chimerism for the early detection of engraftment and graft failure. However persistence of host cells, so called mixed chimerism, can be compatible with engraftment and prolonged disease-free survival. So, it is necessary to document the significance of mixed chimerism. Variable number of tandem repeat (VNTR) is very polymophic and excellent marker for individual identification. We intended to establish the PCR condition for VNTR and the usefulness of VNTR in the early documentation of engraftment and monitoring of chimerism after BMT. Methods: Fifty patients who were treated with allogeneic BMT for hematologic diseases were studied. Blood samples of both patient and donor were drawn before BMT. Blood or marrow samples from patient were drawn with 1-week interval during the first month and a few month intervals thereafter. DNA was extracted from mononuclear cells of blood or bone marrow and amplified by PCR for D1S80, D17S5, ApoB, vWF, MBP, TC-11, and Col2A1. The amplified product was separated on 4% polyacrylamide gel and was confirmed by silver staining. Results: We identified the informative loci in all 50 patient/ donor pairs. Forty-six out of 50 had complete chimerism within 1 month after BMT. Of 4 patients who did not achieve complete chimerism within 1 month, 2 developed graft rejection, 1 developed disease relapse, and 1 was in complete remission and achieved delayed complete chimerism after 1 year. While we could not find mixed chimerism beforehand in 9 out of 10 patients who developed relapse after BMT, 5 leukemic patients who showed temporary mixed chimerism during follow-up period sustained complete chimerism without relapse. Conclusion: PCR amplification of VNTR is a useful method for the identification of cell origin between patient and donor, thus, early documentation of engraftment or graft failure. More studies with regular follow up are needed to evaluate the significance of mixed chimerism after BMT.

미니동종 조혈모세포 이식에서 T림프구 수용체 단클론성 항체의 이용 가능성 및 혼합 림프구 배양에서 림프구 억제효과에 대한 연구

손상균,박성원,백진호,김동환,정진태,현동우,곽동석,이재태,이규보 대한조혈모세포이식학회 1999 대한조혈모세포이식학회지 Vol.4 No.2

연구배경: 조혈모세포이식 및 조건화 치료는 원발성 질환을 제거 후 새로운 조혈세포를 이용한 공간을 마련하고 세포의 생착을 이름으로써 치료의 목표를 달성하고자 하나 심한 부작용으로 인한 높은 조기 사망률은 극복하여야 할 점이다. 저독성 조건화 처치를 하면 불충분한 면역세포의 살해로 인한 거부반응이 큰 문제가 된다. 이에 거부반응 및 이식편대숙주반응의 중요한 역할을 하는 림프구에 대한 억제작용을 갖는 단클로성 항체의 생체 내에서 효과를 추측하기 위해 DLA(Dog lymphocyte Antigen) mismatched dog의 말초혈액을 이용한 MLC assay를 시행하였다. 방법: DLA typing의 결과와 비교하기 위해 단클론성 항체 첨가 없이 DLA가 서로 다른 3마리의 말초혈액을 이용하여 서로의 MLC 반응을 비교 실험하였다. T림프구 수용체에 대한 단클론성 항체의 농도에 따른 proloferation 억제효과를 보기 위해 2, 10, 20, 200ug/ml의 농도로 DM5 (antigranulocyte antbody: 음성 대조군)와 비교하였다. 항원에 감작된 림프구에서의 D5에 대한 효과를 보기위해 장기 골수 배양 배지에서 responder를 stimulator 및 D5와 함께 3일간 배양후 세척하고 2일간의 배양후 다시 stimulator로서 재자극 후 5일 뒤에 proliferation assay를 시행하였다. 실제 이식을 시행한 donor 및 recipient의 세포를 분리하여 proliferation assay를 하여 이식 전후를 비교하였다. 결과: T림프구 수용체에 대한 단클론성 항체의 농도를 달리한 실험에서 2, 10 ,20ug/ml 모두에서 같은 농도의 DM5는 억제효과가 없는데 비해상 당한 림프구증식 억제효과가 관찰되었다. In vivo 실험에서 중용량의 방사성 치료 및 면역 억제 요법으로 DLA matched 2마리 모두에서 성공적인 생착을 확인하였다. 공여자의 mismatched sample에 대해 G-CSF를 이용한 가동화 치료전 보다 낮은 proliferation score를 보였다. 결론: T림프구 수용체에 대한 단클론성 항체는 In vitro 실험에서 T림프구의 억제효과가 관찰되었고 동물 이식에서 부작용을 줄이는 저용량의 조건화 치료 후 생착을 유도하는 면역억제제로서 그 가능성을 확인하였고 향후 그 기전에 대한 연구 및 많은 생체 실험이 필요하다고 생각된다. 재생불량성 빈혈 같은 저세포 충실도의 골수 질환이나 과거에 방사선 치료를 심하게 받은 경우는 이미 골수 내 생착을 위한 공간이 마련된 상태이므로 특별한 면역억제 요법이 가능하다면 이러한 저독성의 조건화 처치가 유용하게 응용될수 있을 것으로 전망된다. Background: The objective of this study was to evaluate the effect of anti-TCR monoclonal antibody in mixed lymphocyte culture and as a part of immunosuppressive regimens in the allogeneic stem cell transplantation. Since marrow space is empty in the patients with aplastic anemia or previous radiation and no new space for allograft needs to be created, nontoxic imminosuppressive conditioning regimens should be feasible. These may include monoclonal antibody directed against T cell receptor other surface determinants on T cell. Moncoclonal antibody (MAb) 15.9D5 raised to canine TCR α β was found to induce hyporesponsiveness to allogeneic stimulator cells in primary and secondary mixed lymphocyte culture (MLC). Methods: Anti-TCR monoclonal antibody was tested to evaluate its suppressive effect of lymphocyte activity in vitro compared with anti- granulocyte anti body and used as an immuno-suppressive agent in two recipient dogs. Four different concentration of anti-TCR MAbs was tested in MLC to know the appropriate concentration for suppressing lymphocyte proliferation, and MLC assays were serially done from blood sample of recipient dogs and donor dogs before and after transplantation. Results: Anti-TCR monoclonal antibody had significantly suppressed H3-thymidine uptake in MLC compared with anti-granulocyte antibody(control). In two recipient dogs conditioned with non-myeloablative regimens and MAb, transplanted with DLA- matched donor dogs, successful mobilizing stem cells were less reactive to the stimulator lymphocytes than the lymphocytes from the dogs not treated before. Conclusion: The precise mechanism of immunosuppression induced by anti- TCR MAb needs to be elucidated. G-CSF had a role in suppressing lymphocyte activity of donor dogs and might have a role in preventing GVHD. Non-myeloablative conditioning strategy might be useful in patients with hypoplastic marrows who require immunosuppression only (e. g. aplastic anemia) and already has some spaces for engraftment in the marrow (e. g. irradiated marrows).

고용량 항암요법 및 자가 조혈모세포 이식을 시행받은 유방암 환자에서 미세진행암 검색을 위한 Cytokeratin-19 검사의 의의

정재화,정희정,이규택,박성규,원종호,백승호,서원석,홍대식,박희숙,이민혁 대한조혈모세포이식학회 2000 대한조혈모세포이식학회지 Vol.5 No.2

배경:1978년 악성 림프종에서 처음으로 자가골수이식이 성공적으로 수행된 후 자가골수이식이 급속도로 증가하여 최근에는 동종골수이식보다 더 많이 시술되고 있다. 이러한 자가 조혈모세포이식은 유방암 환자에서 최근 그 빈도가 증가하고 있는 추세이나 자가이식의 잠재적인 한계인 골수나 말초 조혈모세포 수집으로부터 얻은 오염된 조혈모세포의 재주입의 가능성 여지가 있다는 것이 문제점으로 지적되고 있다. 최근 자가 조혈모세포이식에 따른 잔존 세포암에 대한 중요성이 증가되어져 왔고 이는 잔존 암세포를 발견할 수 있는 분자적 기술의 발전에 기인하고 있다. 유방암 환자에 있어 정상 혈액 단핵구내 유방암 세포 발견을 위해 cytokeratin-19 (CK-19) mRNA와 epithelial growth factor receptor는 민감도와 특이도가 뛰어난 표지자로 알려져 있다. 최근에 세포 특이 단백질에 대한 mRNA를 RT-PCR에 의존한 검사로서 10^(7)개의 정상세포중 최소 1개의 tumor cell을 발견할 수 있게 되었다. 본 연구에서는 autograft 내의 유방암 세포의 발견을 위한 RT-PCR 방법의 민감도를 평가하고 CK-19에 대한 RT-PCR 검사 양성인 말초혈액 내 암세포의 존재와 임상양상 결과를 비교 분석하였다. 방법:1996년 9월부터 1999년 12월까지 순천향대학병원에서 입원하여 고용량 항암요법 및 자가 조혈모세포 이식을 시행받은 환자들을 대상으로 하였다. 이들 총 13명의 환자중에서 10개 이상의 림프절 양성을 보이는 고위험군 유방암 환자가 6명이었고 재발성 유방암 환자가 7명이었다. 대상환자들에게 2번의 FAC 요법이후 mobilization으로 doxorubicin, paclitaxel 및 GM-CSF를 투여하였고 전처치로는 thio-tepa, carboplatin, mitoxantrone을 사용하였다. Mobilization 이후 채취한 조혈모세포의 일부를 이용하여 CK-19에 대한 RT-PCR을 시행하였다. 결과:RT-PCR의 민감도는 유방암 세포주인 MCF-7을 이용하였을때 정상 골수세포 100만개 중 1개의 MCF-7 세포가 존재하여도 RNA가 증폭되는 결과를 얻음으로써 감수성은 1:10^(6)의 비를 보였다. CK- 19에 대한 RT-PCR 결과는 13명의 환자 중 2명에서 CK-19 양성 소견을 보임으로써 15.4%의 양성률을 보였다. 2명의 환자는 모두 재발된 유방암 환자군에 속했으며 이중 1명은 1번에서만 CK-19 양성 소견을 보였고 나머지 한명은 2번 모두 apheresis 내에 CK-19 mRNA를 포함하고 있었다. 또한 전체 생존율을 비교하였을 때 고위험군에서 2년 생존율이 52.6%, 재발된 군에서 19.1%가 관찰되었으나 PCR 양성인 2명의 재발환자는 각각 4개월과 16개월째 사망하였다. 결론:고위험군과 재발된 유방암 환자에서 고용량 항암요법 및 자가조혈모세포 이식은 비교적 안전하며 잠재적 이득이 있는 치료법이다. 유방암 환자의 말초혈액 조혈모세포 내에 미세 잔존암 여부를 확인 위해 시행한 cytokeratin-19에 대한 RT-PCR은 특이도와 민감도가 뛰어난 검사이며 말초혈액 조혈모세포 내 잔존 암세포의 존재는 무병 생존률이나 전체 생존율을 감소시키는 경향을 보여 향후 유방암에서 조혈모세포이식을 시행할 때 잔존 암세포의 검색을 시행할 필요가 있을 것으로 생각되며 채집된 조혈모세포 내에 오염되어 있는 암세포의 제거 방법의 개발이 필요할 것으로 생각된다. Background:Breast cancer is a chemosensitive tumor and dose intensification might improve the disease-free survival and cure rates in high risk and relapsed breast cancer patients with poor prognosis. Autologous peripheral blood stem cells (PBSCs) provide accelerated hematopoietic recovery after myeloablative and myelosuppressive chemotherapy. The appreciation of the importance of minimal residual disease has been associated with a dramatic increase in reports describing application of technology to detect minimal disease, especially molecular techniques based primarily on the polymerase chain reaction. Cytokeratin-19 mRNA and epithelial growth factor receptor mRNA were shown to be highly specific and sensitive markers for the detection of breast cancer cells within normal peripheral blood mononuclear cells. The purpose of this study is to establish a sensitivity of RT-PCR assays for the detection of breast cancer cells within autografts and to evaluate the correlation between clinical outcome and the presense of tumor cells in PBSCs that positively reacted to RT-PCR assays. Methods:A cytokeratin-19 (CK-19) specific-nested RT-PCR assay was developed andoptimized by using limited dilutions of the MCF-7 breast cancer line mixed with normal bone marrow cells. The optimized assay was then used to examine PBPCs samples obtained from 13 patients with high risk and relapsed breast cancer. Results: In the sensitivity, CK-19 expressing tumor cells were detected in the mixture of 10 MCF-7 cells in 10^(7) normal bone marrow cells. Two patients of 13 (15.4%) scored positive to CK-19 in PBSCs with breast cancer, indicating minimal residual disease. Two patients with relapsed breast cancer with positive of CK-19 were died at 4 and 16 months after PBSCT. Conclusion: RT-PCR of cytokeratin-19 assay is a sensitive, specific and rapid method for the detection of minimal residual cancer cells within PBSCs in breast cancer patients. The presence of minimal residual tumor in PBSCs was trending toward short median disease-free survival and overall survival and this assay can be used for detection of cancer cells in harvested PBSCs in breast cancer patients with high dose therapy with autologous PBSCT.

조혈모세포이식 환자에서의 기계 환기의 위험 인자 : Assessment of Risk Factors

안중경,이홍기,황정혜,박세훈,이효락,송서영,이순일,박준오,김기현,김원석,정철원,임영혁,강원기,박근칠 대한조혈모세포이식학회 2002 대한조혈모세포이식학회지 Vol.7 No.1

연구배경: 조혈모세포이식을 시행한 환자에서 집중 치료 시 예후가 매우 나쁜 것으로 알려져 있고, 기계 환기는 강력한 사망 예측 인자로서 보고되고 있다. 그러나 현재까지 이식 환자에서 기계 환기의 위험 인자를 밝힌 연구는 매우 드물다. 따라서 기계 환기를 시행한 조혈모세포이식 환자의 임상적 특징을 살펴보고 기계 환기에 대한 위험 인자를 알아보고자 하였다. 방법: 삼성서울병원에서 조혈모세포이식을 시행한 환자 중 기계 환기를 시행한 23명과 기계 환기를 시행하지 않은 142명을 대상으로 후향적 연구를 시행하였다. 기계 환기에 대한 위험 인자의 여부에 관해서는 chi-square 또는 Fisher's exact 검정을 시행하였으며 기계 환기에 대한 각 위험 인자의 영향에 관해서는 다중로지스틱 회귀분석을 시행하였다. 결과: 기계 환기를 시행한 23명의 환자 중 30일째 생존자는 1명이었고 6개월째 생존율은 0%였다. 생존자와 사망자 모두에서 다기관 기능부전이 관찰되었으며, APACHE II 점수와 SAPS II 점수에 의한 예측 사망률은 각각 56%, 59%였다. 조혈모세포이식 후 기계 환기의 위험 인자로는 선행 질환이 혈액질환, 부분불일치 동종이식, 간정맥폐색성질환, 이식 전 질병 상태가 재발하였거나 약물에 반응하지 않는 경우였다. 다중로지스틱 회귀분석 결과 기계 환기의 위험 인자로 통계적으로 유의한 차이를 나타낸 것은 단지 부분불일치 동종이식을 시행한 경우였다. 결론: 현재까지 조혈모세포이식 환자에서 집중 치료의 역할에 대해서는 확실히 정립되어 있지는 않으며, 이식 환자에서 기계 환기는 강력한 사망 예측 인자이다. 따라서, 조혈모세포이식을 시행한 환자에서 기계 환기의 위험 인자와 불량한 예후 인자를 고려하여 기계 환기 여부에 대한 신중한 결정을 내려야 한다. Background: Respiratory failure requiring mechanical ventilation is a frequent, critical complication of hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). Patients who require mechanical ventilatory support after HSCT generally have a very poor prognosis. Mechanical ventilation in HSCT recipients is a strong predictive factor of mortality. The objectives of this study are to describe clinical characteristics of HSCT recipients undergoing mechanical ventilation and to identify the risk factors for mechanical ventilatory support after HSCT. Methods: We performed a retrospective chart review of all patients >15 yrs old who received HSCT at Samsung Medical Center and subsequently required mechanical ventilatory support between 1996 and 2001. Results: Thirty-day mortality rate in HSCT recipients undergoing mechanical ventilation was 95.6%. The mean predictive mortality rates of APAHCE II score and SAPS II score were 56% and 59%, respectively. Reasons for mechanical ventila-tion were sepsis (47.8%) followed by fungal infection (13%) and diffuse alveolar hemorrhage (8.7%). Univariate analysis identified relapsed or refractory diseases at HSCT, hematologic disease, hepatic venoocclusive disease and allogeneic or HLA-mismatched transplant as significant risk factors for mechanical ventilation. On multivariate logistic regression analysis, only allogeneic mismatched transplant remained significant. Conclusion: Overall outcome of HSCT recipients undergoing mechanical ventilation is very poor. Therefore, the risk factors and the poor prognostic factors for mechanical ventilation should be taken into account in making further treatment decision for HSCT recipients requiring mechanical ventilation.

동종 골수이식 후 후기 거부반응을 보인 재생불량성 빈혈환아에서 동종 G-CSF 가동화 말초혈 조혈모세포이식 후 생착을 보인 1례

정낙균,조빈,정대철,김학기 대한조혈모세포이식학회 1998 대한조혈모세포이식학회지 Vol.3 No.1

중증 재생불량성 빈혈의 가장 효과적인 치료는 조직적합성 항원이 일치하는 형제자매의 골수이식이지만 골수이식 후에 거부반응으로 기대한 효과를 보지 못하는 경우 구제요법으로 수년 전까지만 해도 면역억제를 목적으로 방사선을 포함한 강력한 전처치 후에 동종 골수이식을 재시행 하였으나 성공률이 떨어지며 전처치로 인해 심각한 부작용을 초래하는 등 문제점이 있었다. 그러나 최근에는 가동화된 말초혈 조혈모세포이식이 보편화됨에 따라 동종 골수이식 후 생착부전이 있는 경우 강력한 전처치없이 재차 가동화된 말초혈 조혈모세포를 이식하는 방법으로 생착에 성공한 사례들이 국내외에서 보고되고 있으며, 특히 가동화된 말초혈 조혈모세포이식은 골수이식의 경우보다 조기 생착을 보이며 면역적인 면에서도 빠른 회복을 보이는 것으로 알려져 있다. 저자들은 동종 골수이식 후 후기 거부반응을 보인 중증 재생불량성 빈혈 환아에서 골수 공여자에게 G-CSF를 투여하여 가동화된 말초혈 조혈모세포를 이식하여 구제요번에 성공한 1례를 경험하여 보고하는바이다. 환아는 내원 4년7개월 전 중등도 재생불량성 빈혈로 진단되어 본원에서 항림프구 글로불린으로 치료 받았으며 치료 3개월 후 완전관해를 보였으나 18개월 이후 다시 악화되며 중증 재생불량성 빈혈의 소견을 보였다. 남동생과 조직적합성 항원이 일치하여 procarbazine, 항흉선세포 글로불린 및 cyclophosphamide 로 전처치 후 내원 17개월 전 동종 골수이식을 시행하였다. 환자에게 주입된 세포수로는 단핵구는 1.09×10^(8)/㎏, CD34+세포는 6.65×10^(6)/㎏이었으며 이식편대숙주반응을 예방하기 위하여 CSA와 methotrexate를 사용하였다. 이식 후 7개월까지는 급성 및 만성 이식편대숙주반응없이 성공적인 생착 소견을 보였으나 이후 혈소판의 수치가 감소하기 시작하면서 12개월 이후에는 다시 수혈이 필요한 정도로 전혈구의 수가 감소하였다. 입원직전 시행한 골수검사에서도 적혈구,백혈구, 혈소판들의 전구세포들이 모두 관찰되기는 하나 세포밀도가 20%이하로 감소되어있었으며 PCR-RFLP검사에서도 지속적으로 공여자와 환아의 혼합된 양상으로 나타나는 후기 거부반응의 소견을 보였다. 구제요법으로 골수이식과 동일한 공여자로부터 G-CSF가동화된 말초혈 조혈모세포이식을 시행하기위해 전처치로 750 cGy의 total nodal irradiation (TNI)를 시행하고 ATG를 4일간 투여하였다. 환아에게 ATG를 투여하기 시작한 다음날부터 공여자에게는 rhG-CSF(GrasynR)를 10㎍/㎏/day의 용량으로 6일간 투여하였으며 투여 5일째부터 말초혈에서 조혈모세포 및 단핵구를 3일에 걸쳐 채집하여 환자의 중심정맥을 통하여 투여하였다. G-CSF를 투여하고 조혈모 세포를 채집하는 기간중 공여자에게 특별한 이상 소견은 없었으며 환아에게 이식된 단핵구 및 CD34+ 조혈모세포수는 각각 환아의 몸무게 ㎏당 18.5×10^(8), 14.7×10^(6)이었다. 이식편대 숙주반응을 예방하기 위하여 CSA를 사용하였으며 이식 후 3일부터 말초혈액 백혈구수가 1,000/㎣으로 증가하였다. 이식 5일 후부터 GM-CSF 250㎍을 환아에게 피하 주사하였으며 이식 12일 이후 특별한 수혈 없이 혈소판수가 50,000/㎣이상으로 계속 유지되었고 이식편대 숙주반응은 나타나지 않았다. 이식 후 21일에 시행한 골수검사에서도 세포밀도 80%에 적혈구, 백혈구, 혈소판들의 전구세포들이 모두 관찰되는 생착 소견을 보였다. 환아는 이후 급성 이식편대 숙주반응 등의 특별한 이상소견 없이 이식 후 2개월이 지난 현재까지 건강하게 지내고 있다. 저자들은 동종 골수이식 후 후기 거부반응을 보인 재생불량성 빈혈 환아에서 TNI 및 ATG로 전처치 후 공여자에게 G-CSF를 투여하여 가동화된 말초혈 조혈모세포를 이식하여 생착을 보인 1례를 경험하였기에 문헌고찰과 함께 보고하는 바이다. Allogeneic bone marrow transplantation (BMT) from HLA-identical siblings is the treatment of choice in children with severs aplastic anemia(SAA). However, insufficient graft function owing to rejection remains an important and life-threatening complication following BMT for SAA. In that case, recent clinical studies have shown more rapid engraftment and faster recovery of the immune system after allogeneic transplantation of peripheral blood stem cells (PBSC) compared with BMT for the treatment of graft rejection. Here we report a case of successful transplatation of allogeneic granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) mobilized PBSC after engraftment failure of allogeneic BMT. A 7-year old male underwent allogeneic BMT for SAA from his HLA-and blood groupidentical brother. He was conditioned with cyclophosphamide, procarbazine and anti-thymocyte globulin (ATG, PAsteur). Post-transplant immunosuppression for graft versus host disease(GVHD) consisted of cyclosporine A (CSA) and a short course of methotrexate. Initially, the engraftment was sucessful until 7 months after BMT without any sign of acute and chronic GVHD. However, he failed to achieve durable trilineage hematopoietic engraftment. Evaluation of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) revealed mixed chimerism. 17 months after the first BMT, G-CSF primed PBSC from the same donor (cell dose 18.5×10^(8)/㎏ mononuclear, 14.7×10^(6)/㎏ CD34^(+) cells) was given after preparation with ATG and total nodal irradiation (TNI, 750 cGy). No side effects related to G-CSF administration or apheresis were observed in the donor. CSA was used for GVHD prophylaxis. To promote marrow recovery, granulocyte-macrophage CSF (GM-CSF, 250㎍/㎡) was administered from day +5 after the PBSC transfusion. The WBC count exceeded 1,000/㎣ on day +3 and the platelet count exceeded 50,000/㎣ on day +12 without transfusion. On day +21, BM histology showed a cellularity of 80% with trilineage engraftment. The patient is currently well with a stable engraftment 2 months following allogeneic PBSCT, without any sign of acute GVHD.

Successful Engraftment of HLA-mismatched Unrelated Transplantation Using Banked Cord Blood in Korea

Cho, Bin,Kim, Hack Ki,Kim, Chunchu,Han, Hoon 대한조혈모세포이식학회 1998 대한조혈모세포이식학회지 Vol.3 No.1

급성골수성 백혈병 2차관해 상태의 13개월 남아를 대상으로 가톨릭 골수 정보은행의 제대혈을 이용하여 주조직적합항원 불일치 비혈연간 제대혈이식을 시행하였다. 전처치로 busulfan, cyclophosphamide, melphalan 및 ATG를 투여하였다. 주입된 총유핵세포수는 1.3×10^(8)/㎏이었다. 이식편대숙주병을 예방하기 위하여 cyclosporime A와 MTX를 사용하였다. 이식 15일에 백혈구수가 0.6×10^(9)/L에 도달하였으며 17일에 Grade Ⅱ GVHD가 발생하였고 methylprednisolone투여로 잘 조절되었다. 이식 20일에는 HLA-DR이 공여자형으로 전환되었다. 이식 23일에는 백혈구수가 2.6×10^(9)/L로 상승하였다. 저자들은 국내에서는 처음으로 성공적으로 생착된 제대혈 이식을 보고하는 바이며, 본 증례는 국내 최초로 제대혈은행의 비혈연 제대혈을 환자에게 이식한 경우이다. HLA-mismatched unrelated cord blood transplatation was carried out on a 13-months-old male infant with acute myelogenous leukemia in second remission using cryopreserved cord blood at Catholic Hematopoietic Stem Cell Information Bank in Seoul. The patient was prepared for HLA-mismatched unrelated umbilical cord blood transplantation with busulfan, cyclophosphamide, melphalan and antithymocyte globulin. He was transplanted with 21mL cord blood unit containing a 1.3×10^(8)/㎏ nucleated cells per killogram, of patient weight. Methotrexate and cyclosporine A were given for the prophylaxis of GVHD. On day 15 the leukocyte count reached to 0.6×10^(9)/L. Grade Ⅱ GVHD was observed on day 17. It was easily controlled with methylprednisolone. HLA type of recipient was converted to donor pattern on day 20. Total leukocyte count increased to 2.6×10^(9)/L on day 23. In Korea, this is the first report of sucessfully engrafted cord blood clinical transplantation and the first use of banked cord blood for clinical transplantation.

조혈모세포이식 후 초기에 발생하는 일시적인 백혈구 증가의 의의

김명신,임지향,김용구,한경자,김원일,민창기,박종원,김춘추 대한조혈모세포이식학회 2003 대한조혈모세포이식학회지 Vol.8 No.2

연구배경: 조혈모세포이식 후 초기의 백혈구 수를 비희석 적혈구용 혈법을 이용하여 정확하게 추적한 결과 이식 후 초기에 백혈구 수가 일시적인 증가를 보이는 것이 알려졌다. 본 연구에서는 이식 초기에 나타나는 백혈구의 근원을 밝히고 이러한 일시적인 백혈구 증가의 임상적 의의를 알아보고자 하였다. 방법: 본 연구에서는 48예의 조혈모세포이식 후 환자를 대상을 비희석적혈구용혈법을 이용하여 이식 후 초기에 백혈구 수의 변화를 조사하였다. 백혈구의 일시적인 증가를 보이는 환자는 이식 후 1일에서 7일 사이에 백혈구 수가 이식전 최저치에 비해 50/μL 이상 증가하는 경우로 정의 하였다. 형광동소보합법을 이용하여 이식 후 출현하는 백혈구의 근원을 알아보았다. 결과: 전체 48예의 환자 중에서 11예의 환자에서 일시적인 백혈구 증가가 관찰되었다. 형광소보합법을 시행한 결과 이 기간에 나타나는 세포는 환자 자신의 세포가 대부분을 차지하였다(중앙값 85%). HLA 일치 혈연간 이식을 바기 위해 이식 전처치로 전신방사선조사를 받지 않은 중증재생불량성빈혈 환자 5예 모두에서는 일시적인 백혈구 증가가 관찰되었고, 전신방사선조사를 받은 43예의 환자들 중 6예의 환자에서 일시적인 백혈구 증가를 보였다. 이식후 환자들의 임상 경과를 추적한 결과, 이들 6예 중 단 한 예만이 이식 후 생존하였다. 이식 전처치로 전신 방사선조사를 받은 환자를 대상을 살펴보면, 이식 후 초기에 일시적인 백혈구 증가를 보이는 환자의 이식 후 사망률은 그렇지 않은 환자들에 비해 유의하게 높게 나타났다(83.3% vs. 21.6%, p<0.001). 결론: 전신방사선조사를 받은 환자들에서 조혈모세포이식 후 초기에 일시적인 백혈구 증가가 나타나는 소견은 이식 후 사망의 예측인자로 사용할 수 있을 것으로 생각된다. Background: We found that the total leukocyte count increased transiently in early post-transplant period by a new accurate leukocyte counting method using undiluted erythrocyte lysing technique. In this study, we determined the origin of leukocytes and clarified the significance of transient increase of leukocytes. Methods: Forty-eight patients who underwent stem cell transplantation (SCT) were included. Total leukocyte counts were performed using undiluted erythrocyte lysing technique. The transient increase of leukocytes was defined as a elevation in the leukocyte count greater than 50/μL when compared to the previous baseline level from the post-transplant day 1 to 7. Fluorescence in situ hybridization was performed to determine the origin of the cells in patients with a sex-mismatched graft. Results: Among the 48 patients, 11 showed a transient increase of leukocytes. The majority of cells that appeared during this period were originated from recipient (median 85%). All of the severe aplastic anemia patients who underwent allogeneic SCT and did not receive total body irradiation (TBI) showed transient increase (n=5). However, this study found that the other six patients with transient increase of leukocytes received TBI. Among these six patients, only one survived after the transplant. The mortality rate of the patients with transient increase of leukocytes was higher than without transient increase (83.3% vs. 21.6%, P<0.001). Conclusion: These results suggest that transient increase of leukocytes in the early post-transplant period can be a risk factor for an increase in post-transplant mortality in patients who received TBI.

성인 급성 림프구성 백혈병에서 조혈모세포 이식

민창기,정운동,박수정,서정곤,김동욱,이종욱,민우성,김춘추 대한조혈모세포이식학회 1999 대한조혈모세포이식학회지 Vol.4 No.2

연구배경: 성인 급성 림프구성 백혈병(adult acute lymphocytic leukemia; aALL)은 vincristine, steroid, anthracyclines 그리고 L-asparaginase 등의 화학요법으로 관해율은 60-80% 정도이나 관해 후 치료(post-remission therapies)로서 복합화학요법을 수년간 투여하여도 재발율이 높아 장기무병생존을 기대하기 힘들다. aALL에서 조혈모세포이식의 역할을 규명하기 위해 본 센터에서 시행한 동종 및 자가 조혈모세포 이식의 성적을 분석하고 장기 무병생존에 영향을 주는 인자들을 조사하였다. 방법: 1992년 10월부터 1998년 8월까지 본 센터에서 동종(n=33) 및 자가(n=19) 조혈모세포이식을 받은 aALL 환자 52예를 대상으로 하여 각 환자의 진단 당시부터 이식 시까지의 특성, 재발, 치료 관련 사망, 그리고 무병생존에 대한 후향적인 분석을 시행하였다. 이식 전처치는 동종 이식에서는 TBI+cyclophosphamide가 주로 사용되었고, 자가 이식의 경우는 TBI+cytarabine+melphalan이 사용되었으며 조혈모세포원은 전자는 주로 골수 (n=30), 후자는 G-CSF로 가동화한 말초혈액(n=15)을 이용하였다. 결과: 1) 52예 전체 환자의 연령의 중앙치는 24세(15-43)이었고, 진단 당시 백혈구수의 중앙치는 10,700/㎕(400-206,000) 이었으며 염색체 이상이 있는 경우는 27%였다. 이식 당시 동종 이식에서 1차관해와 2차 또는 재발된 환자가 각각 24예, 9예였고, 자가이식에서는 각각 15예, 4예 였다. 2) 생착은 평가 가능한 전 예에서 이루어졌고 절대중성구수가 500/㎕이상, 그리고 혈소판수가 3,000/㎕이상 회복되는데 소요되는 시간은 각각 14일(7-27),26일(10-54) 이었다. 3) 재발은 52예 중 21예에서 있었으며 동종 골수이식 33예 중 13예, 자가 조혈모세포 이식은 19예 중 8예였다. 1차 관해 시 이식을 받았던 환자 39예 중 14예(35%)가 재발하였으며 두 치료방법 사이에 유의한 차이를 보이지 않았다. 동종 이식 환자 중 이식편대 숙주 질환의 빈도와 재발율 사이에 상관관곈,s 보이지 않았다. 4) 평균 추적기간의 중앙치는 26개월(5-72)으로서 전체 환자의 3년 추정 무병생존율은 49.1%였다. 1차 관해시 이식한 환자들을 대상으로 해서 얻은 3년 추정 무병생존율은 동종 및 자가 조혈모세포이식이 각각 55.6%, 64.7%로 통계적으로 의미 있는 차이를 보여주지 않았다. 5) 무병생존에 영향을 주는 인자를 분석한 결과 FAB분류 이외에는 연령, 진단 당시 백혈구수, 염색체이상, 면역표현형, 골수외 침범 등 기존의 화학요법에서 불량한 예후를 갖는 인자들은 통계적으로 의의 있는 결과를 나타내지 않았다. 6) 24예의 환자가 사망하였으며 사망원인은 재발이 19예로 가장 많았다. 결론: aALL에서 조혈모세포 이식은 기존의 항암화학요법 시 불량한 예후 인자의 영향과 상관없이 장기 무병생존을 얻을 수 있는 치료효과를 나타냈다. 동종 골수이식 시 GVL에 대한 뚜렷한 양상은 보여주지 않았으나 일차 관해 시 조혈모세포이식은 고용량 치료를 통해 미세 잔류암(minimal residual disease)을 제거하여 장기 무병생존에 효과적인 역할을 하는 것으로 사료된다. Background: Despite advances in chemotherapy regimens, outcome of acute lymphoblastic leukemia (ALL) remains poor for adults because of a high relapse rate. In order to maintain remission after induction or treat chemotherapy-resistance disease, allogeneic stem cell transplantation(SCT) has been used. Autologous SCT, allowing the administration of high-dose radiochemotherapy to eliminate minimal residual disease, has been proposed as an alternative. Methods: From October 1992 to December 1998, Fifty two patients who was>15 years of age at the time of diagnosis and had a cytologial diagnosis of ALL underwent SCT. patients who had an HLA-identical sibling proceeded to allogeneic SCT (n=33) Patients who lacked a donor received autologous SCT after two cycles of consolidation therapies (n=19). Conditioning regimen consisted of cyclophosphamide 60 mg/kg/day over 2days and total body irradiation (TBI) in 25 patients receiving allogeneic SCT. In autologous SCT, All patients received TBI+cytosine arabinoside (3.0 g/m²/day over 3 days)+melphalan (120mg/m²), Cyclosporin and short-course of methotrexate was used as a GvHD prophylaxis. Results: 1) A median of 4.16×10^(8)/kg mononuclear cells was infused on day 0 (allogeneic 1.3×10^(8)/kg; autologous 8.46×10^(8)/kg). All patients established a sustained engraftment. A median of 14 days (range 7-27 days), allogeneic 16 days (rnage 9-26 days), autologous 10 days (range 7-27 days) was needed to reach granuloyte count 0.5×10^(9)/L. 2)Relapse occurred in 21 patients (allogeneic 13; autologous 8). Kaplan-Meier probability of relapse did not differ between allogeneic and autologous SCT in first CR. There was not seem an association between relapse rate and GvHD incodenve on allogeneic SCT. 3) With a median follow of 26 months (5-72), the estimated disease-free survival (DFS) at 3 years was 49.1% in all patients. In first CR patients(n=36), 3 year-estimated DFS was 55.6% in allogeneic SCT and 64.7% in autologous SCT(p>0.05). Relapse was the most common cause of deaths in both groups. The treatment-related mortalities were 12% in allogeneic SCT and 0% in autologous SCT. 4) In this setting, none of the studied variables except FAB classification was found to statistically influence DFS. Conclusion: In adult ALL, SCT was able to maintain long-term remission without influence of the previously known prognostic factors when performed at first CR. However, we were not able to confirm the high sensitivity of ALL to the graft-versus-leukemia effect because allogeneic SCT is less successful at preventing relapse.

비혈연간 또는 HLA 부분 일치 혈연간 동종골수이식에서 급성 이식편대 숙주 질환 예방

민창기,엄기성,김동욱,이종욱,민우성,김춘추 대한조혈모세포이식학회 1999 대한조혈모세포이식학회지 Vol.4 No.2

연구배경: 동종골수이식 후 합병증으로 인한 사망을 감소시키기 위해서는 이식편대 숙주 질환(graft-versus-host diseases; GvHD)의 예방 및 치료가 주요하다. 특히 비혈연간 또는 HLA 부분 일치 혈연간 동종골수이식에서는 GvHD의 발생빈도가 더 높으므로 기저질환의 상태와 함께 환자의 예후를 결정하는 가장 중요한 요소이다. 따라서 GvHD 발생 고위험 환자들에서 기존의 cyclosporin (CsA)=methotrexate (MTX) 예방요법만으로는 불충분하며 새로운 GvHD 예방요법의 필요성이 절실하다. 저자들은 FK506의 GvHD 예방효과, 생착에 미치는 영향, 약제의 부작용 그리고 골수 이식의 합병증 등을 CsA와 비교하였다. 방법: 1997년 4월부터 1999년 3월까지 가톨릭조혈모세포이식 센터에서 HLA 적합 비혈연간(n=27) 및 HLA 부분일치 혈연간(n=3) 동종골수이식을 받은 모든 성인 환자 중 평가 가능한 30예를 대상으로 하였다. HLA 부분일치 혈연가 공여자는 환자와 각각 HLA-A,B, 그리고 DR 부위에서 1-locus가 불일치하였고, 비혈연간 골수이식 공여자는 혈청학적으로 HLA-A,B 그리고 DR 부위가 일치하였다. 1997년 4월부터 1998년 10월까지 기간에 연속적으로 골수이식을 받은 환자 15예는 CsA+MTX를 사용하였는데 초기 용량은 CsA 3mg/kg를 24시간 정주하였고 MTX는 10 3mg/m²의 용량으로 1,3,6,11일에 투여하였다(CsA군). 1998년 11월 이후의 환자들은 FK506+MTX를 사용하였는데 FK-506은 0.05mg/kg로 24시간 정주하였으며 MTX의 투여 용량은 동일하였다.(FK506군). 결과: 1) 이식 후 모든 환자에서 골수 생착이 이루어졌으며 절대 중성구수가 0.5×10^(9)/L 이상 회복하는데 소요된 시간은 CsA군에서 19일 (10-39) 이었고 FK506군에서 15일(12-24) 이었다.(p=0.288). 2) Ⅱ도 이상 급성 GvHD의 누적발생률(cumulative incidence rate)은 CaA군과 FK506군에서 각각 66.7%와 26.7%로서 통계적으로 유의한 차이를 나타냈으며 (p=0.0423), FK506의 예방효과가 CsA보다 의의 있게 높았다. 3) 두 약제 모두 가장 흔한 합병증은 신독성 이었다. 골수 이식 후 6개월 내에 누적 신독성 발생률은 FK506군에서 26.67%로서 CsA군(13.33%)보다 많았으나 통계적으로 유의한 차이는 보이지 않았다(p=0.3865). 4) 골수이식 관련 합병증 및 감염은 CsA군에서 특발성 폐렴증후군(idiopathic pneumonia syndrome; IPS)으로 3예가 사망하였고 두 군에서 각각 pneumocystis carini 폐렴이 1예 있었으며 치료에 반응하였다. 재발은 CsA군에서 1예, FK506군에서 2예가 있었고 모두 골수 이식 당시 기저질환이 재발된 상태의 환자였다. 5) CsA군에서 9예가 사망하였고 원인으로서 급성 GvHD가 5예, IPS 3예, 그리고 재발 1예가 있었다. FK506군에서는 6예가 사망하였다. 원인은 재발이 2예, cytomegalovirus(CMV)폐렴 1예, IPS 1예 CMV에 의한 거부반응 1예 그리고 급성 GvHD가 1예 있었다. 두 군의 무병생존율은 FK506군의 추적기간이 짧아서 정확한 비교를 할수 없었다. 결론: 비혈연간 또는 HLA 부분 일치 혈연간 동종 골수이식을 받은 환자에서 FK-506은 CsA에 비해서 급성 GvHD를 감소시키는데 효과적이었으며 골수이식후 생착에는 영향이 없었고 신독성 등 약제 부작용의 발생은 CsA의 유의한 차이를 보이지 않았다. 따라서 FK506은 GvHD의 발생가능성이 높은 동종골수이식에서 CsA 보다 효과적인 예방약제로 사료된다. Background: Allogoneic bone marrow transplantation (BMT) is an effective therapy for a variety of lymphopematopoietic malignancies of bone marrow failure syndromes. For patients who lack a HLA-matched related donor, HLA-matched unrelated of partially mismatched related donors are an alternative. However, high risk of developing graft-versus-host disease(GvHD) have reduced by disparities in major histocompatibility loci or by a greater degree of disparity in minor histocompatibility loci. The prophylactic effect for acute GvHD and safety of FK506 were investigated in these high-risk patients who received a BMT, comparing with cyclosporin (CsA). Methods: Thirty patients who underwent BMT from a HLA-matched unrelated of partially mismatched related donor consecutively between April 1997 and March 1999 at the Catholic Hematopoietic Stem Cell Transplantation Center were enrolled. The prophylactic GvHD immuno-suppressive regimen in patients between April 1997 and October 1998 was CaA (3 mg/ kg/ day)/methotrexate and after November 1998, FK506 (0.05 mg/ kg/ day)/methotrexate . The incidence of acute GvHD was calculated by summing up the occurrence of GvHD up to day 100. Results: 1) In CsA group (n=15), 14(93%) patients achieved a sustained granulocyte count >0.5× 10^(9)/L at a median of 19(range, 10-39) days after BMT. All patients in FK506 GROUP (n=15) achieved a sustained granulocyte count>0.5× 10^(9)/L at median of 15 (range, 12-24) days after BMT (P=0.228) 2) In FK506 group, the cumulative incidence of acute GvHD as grade Ⅱ-Ⅳ was 26.7%, which was significantly lower (P=0.0423), compared to 66.7% in CsA group. 3) Neprotoxicity was the most common adverse effect observed in both groups. The cumulative incidence rate was 26.7% and 13.3% in the cases of the FK506 and the CsA group, respectively (p=0.3865). Dosage was reduced in 5 of 15 patients in FK506 group and 3 of 15 patients in CsA group due to the occurrence of adverse events. 4) Three patients had recurrent malignancy after transplant. They hah advanced leukemia at the time of the transplant. I n CsA group, 9 patients dided and cause of death were 5 acute GvHD , 3 idiopathic pneumonia syndrome (IPS), and I relapse. In FK506 group, 6 patients died and 4 died of complications related to transplant incluluding 1 GvHD , 1 cytomegalovirus(CMV) pnemonia, 1 IPS, and 1 rejection associated with CMV. Conclusion: This study suggests that FK506 is more useful for the prophylaxis of acute GvHD after BMT from a matched unrelated of partially mismatched related donor. There were no differences in adverse effects between CsA and FK506, although nephrotoxicity of FK506 was more than CsA. FK506 was warranted for the prevention of acute GvHD in high-risk BMT recipients.

백혈병 세포를 이용한 종양-림프구 혼합면역반응의 임상적 의의

김희제,조현일,김태규,한훈,김춘추,민우성 대한조혈모세포이식학회 2000 대한조혈모세포이식학회지 Vol.5 No.1

본 연구는 골수성 백혈병세포와 공여자 유래의 말초 혈액 단핵구를 실험관 내에서 배양하여 백혈병 특이 세포 독성 T 세포를 HLA 일치 형제 공여자로부터 유도하고, 유도된 T 세포의 특성을 규명하여 조혈모세포이식 후의 임상적인 소견과의 연관성을 조사하고자 하였다. 만성기 5례, 가속기 3례, 급성기 2례를 포함하는 10례의 만성 골수성 백혈병 환자들과 1차 완전 관해 상태에 있는 2례의 급성 골수성 백혈병 환자들의 말초혈액에서 수상돌기 세포를 유도하여 항원제시세포로 사용하였다. 백혈병 세포에 대한 세포 독성 T 세포의 효과적인 유도는 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병의 만성기와 급성기, 가속기의 순서였다. 세포 독성은 세가지 표적 세포인 K562 세포주, 백혈병 세포와 환자의 PHA 자극세포에 대한 세포독성 실험을 통해 세포독성 T 세포에 의한 것인지 또는 자연 살해 세포 (NK 세포)에 의한 것인지 구별할 수 있었다. 세 가지 표적세포에 대한 세포살해는 결과를 종합하여 동종 조혈모 세포이식 후 백혈병의 제발 가능성을 예측할 수 있었다. 즉 세가지 표적세포들 중 한 가지에서라도 양성 반응을 보인 경우 이식편대 백혈병 효과로 인해 백혈병 재발률이 낮았다. 2례의 만성 골수성 백혈병 가속기 환자들에서 유도된 백혈병성 수상돌기 세포들은 세포의 형태학적 소견과 유세포 분석기를 사용한 면역 표현형이 수상돌기 세포와 동일하였으나 이를 이용해 유도한 세포독성 T 세포는 유의한 활성을 나타내지 않았다. 결론적으로 백혈병 세포에 대한 공여자 기원의 항 백혈병 세포독성 T 세포는 Interleukin-2로 자극하여 실험관내 배양이 가능하며, 이를 통해 질환의 특성이나 백혈병 세포의 생물학적 이질성에 따른 세포 살해능의 다양성을 규명할 수 있을 것으로 사료된다. Background:Allogeneic bone marrow transplantation (BMT) is an effective treatment for a large number of patients suffering from malignant hematological disorders. An immune-mediated graft-versus-leukemia (GVL) effect is an important feature of this treatment modality. Although numerous clinical and experimental data have given evidence for both T and NK cells involved in this phenomenon, leukemic relapse and graft-versus-host disease (GVHD) mediated by T cells still remain the major problems of allogeneic BMT. In this study, we tried to define the characteristics of anti-leukemic CTLs and to evaluate the clinical implications of the cellular immunity in leukemic patients. Methods:Leukemic cells were incubated concurrently with peripheral mononuclear cells isolated from HLA-matched sibling donors. Cytotoxic T lymphocytes (CTLs) have been generated from peripheral blood cells of 12 patients with chronic myelogenous leukemia (CML) including 5 in chronic phase (CP), 3 in accelerated phase (AP), 2 in blastic crisis (BC) and 2 patients with acute myelogenous leukemia (AML) in first complete remission. The activity of CTLs and NK cells was measured by 51Cr release assay using autologous leukemic cells, K562 cell line and patient's PHA blasts as target cells. Results:The efficacy of generating CTLs against leukemic target cells were AML, CML-CP and CML-BC, CML-AP in order. Low leukemia relapse events was found to be associated with the strong intensity of cytotoxcity for K562 cell lines, and in addition to this, if we combine the cytotoxicity effects for all thee target cells, the possibility of relapse after allogeneic stem cell transplantation (SCT) was significantly predictable. Any significant association of the cytotoxicity against three target cells with GVHD was not found. Sex-matching or mismatching between donor and recipient did not affected on the NK cell activity. Conclusion:Our results demonstrated that donor-derived antileukemic cytotoxic T-cells against patient's own leukemic cells are producible in vitro and the activity of CTLs and NK cells may be variable according to disease-specificity or to biological heterogeneity of leukemia. If the specific, stable and reproducible anti-leukemic CTLs could be generated in vitro, these CTL lines could be used for the treatment of relapsed or predictable relapse high-risk leukemia after allogeneic BMT and for post-mini-transplantation immunotherapy in the near future.