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Cloning and Expression of the Pasteurella haemolytica A1 leukotoxin Gene in Bacillus subtilis
유한상,Yoo, Han-sang,Maheswaran, Samuel K. The Korean Society of Veterinary Science 1996 大韓獸醫學會誌 Vol.36 No.3
Bovine Pneumonic Pasteurellosis는 수송열(輸送熱)로 일반적으로 알려져 있는 질병으로서, 여러가지 요인의 복합적(複合的)인 작용에 의해 발병하는 것으로 알려져 있으나, Pasteurella haemolytica A1이 가장 주요(主要)한 인자(因子)로 밝혀져 있다. P haemolytica A1은 leukotoxin(LKT), lipopolysaccharide(LPS), capsular polysaccharide 등 여러가지의 병원성인자(病原性因子)을 생성한다. 이들 인자중 LKT가 가장 중요한 병원성인자로 밝혀져 있다. 이에 본 실험은 P haemolytical A1의 LKT 유전자를 Bacillus subtilis에서 발현(發現)시킴으로서 LPS에 오염(汚染)되지 않은 LKT을 대량으로 생산할 목적으로 실시되었다. 실험의 첫 단계(段階)로서 pLKT52 plasmid을 Sau3 A1의 제한효소을 이용하여 부분소화(部分消化)시킨 후 이 부분 소화(消化)된 유전자들로부터 3~5kb 크기의 유전자들을 순수분리하여 pUC18와 결합시킨 후 E coli NM522에 형질전환(形質轉換)시켰다. 이때 형질전환된 균주들은 LKT에 대한 단크론 항체인 MAb601을 이용하여 colony blot 법에 의해서 LKT 유전자 보유 및 발현여부(發現與否)을 조사하였다. 이들 양성 clone들은 제한효소분석(制限酵素分析), 염기서열분석(鹽基序列分析) 및 Western blot 등에 의해서 재확인(再確認)하였다. 총 9개의 양성 clone중 위의 방법에 의해서 한 clone을 선택(選擇)하여 lktCA insert를 재분리하여 shuttle vector에 subcloning 하였다. Subcloning된 LKT 유전자들은 shuttle vector의 종류(種類)(pHPS9, p602/20, pHPS9-Sac)와 각기(各其) 다른 종류(種類)의 B subtilis(spoO12A, BR121, WB3O, Raj1105) 숙주내(宿主內)에서 발현정도를 Western blot 법에 의해서 비교(比較)하였다. 이때 최적발현조건(最適發現條件)은 p602/20와 pBL1의 dual plasmid system을 이용하여 B subtilis spoO12A에서 2시간동안 IPTG로 발현을 유도(誘導)하는 것이었다. B subtilis에서 발현된 LKT을 visual 법과 neutral red uptake 법을 이용하여 소 폐포(肺胞) 대식구(大食求)에 대한 biological activity를 확인하였다. 발현된 LKT에 대한 LPS 오염은 LKT을 SDS-PAGE 후 silver stain에 의해서 확인하였다. 본 실험을 통해서 볼 때에 lktCA 유전자를 보유(保有)하고 있는 p602/20는 B subtilis에서 매우 불안정(不安定)하였고, 발현된 LKT는 세균자체(細菌自體)에서 생성되는 protease들에 의해서 파괴(破壞)됨으로서 농도(濃度)가 매우 낮았다. 이러한 문제점들은 다음 단계(段階)의 실험에서 해결되어야할 문제들이다.
구제역 : 원인체의 특성, 국내, 외 발생 상황 및 예방대책
유한상 대한감염학회 2011 Infection and Chemotherapy Vol.43 No.2
Foot and mouth disease (FMD) is highly infectious disease of cloven-hoofed animals, particularly cattle, sheep, pigs and goats. Also, it is the most important animal pathogen on the global scale because of the potential for rapid and extensive spread through susceptible animal populations. Outbreak can lead to formidable economic consequence for domestic livestock production and international trade. FMD is caused by FMD virus which is a small, non-enveloped,positive-sense RNA virus belonging to the genus Aphthovirus within the family Picornaviridae . There are seven immunologically distinct serotypes; O, A, C, SAT (Southern African Territories) 1, SAT 2, SAT 3 and Asia 1 and a diverse antigenic spectrum of virus strains within each serotype. Characteristic lesion of FMD is the formation of vesicles in the mucosal membranes of mouth, muzzle, foot, and teats. Nowadays, many developed countries have maintained FMD-free as a result of eradication efforts. However, outbreaks of FMD have occurred in several countries,even in Europe, and it is still endemic in Africa, the Middle East, Asia, and South America. Last year, three outbreaks of FMD occurred in our country. Last outbreak reported in November, 2010 induced the enormous social and economical impacts. Culling of infected animals, movement control, and vaccination are the major control measures of FMD. To control the disease, each country has their own strategies based on the current situation of FMD in their country. Therefore, I would like to discuss the causative agent, epidemiological properties and control measures of FMD in this paper.
Expression of Recombinant Porcine Interleukin-2 and Application ofIts Antibody to Immunoassays
유한상,In-Soo Chol 대한수의학회 2002 Journal of Veterinary Science Vol.3 No.3
Interleukin-2 plays an important role in Tlymphocyte proliferation and imune response regul-ations. In this tudy, porcine IL-2 cDNA was clonedfrom peripheral blood mononuclear cells, and recom-binant porcine IL-2 (rpIL-2) was expresed in Escherichiacoli . The size of rpIL-2 without signal peptides wasabout 15 kDa when determined by SDS-PAGE andproduced from ice imunized with the purifiedrpIL-2, and its pecificity was examined by Westernblotting and ELISA. In the Western blotting asay,anti-rpIL-2 and anti-recombinant human IL-2 (rhIL-2)antibodies pecifically recognized rpIL-2 and rhIL-2,respectively. However, anti-rpIL-2 antibody did notrecognize rhIL-2, and anti-rhIL-2 antibody also didnot react with rpIL-2 in the same asay. In ELISA,anti-rpIL-2 antibody strongly interacted with bothrpIL-2 and rhIL-2, and anti-rhIL-2 antibody also efici-specificity of anti-rpIL-2 antibody for pIL-2 wasdemonstrated by Western blotting and ELISA. It wasalso shown that ELISA is more efficient han Westernblotting in determing the species cros-reactivity ofanti-rpIL-2 antibody.
가축질병 예방대책 - 구제역(口蹄疫)의 원인과 예방대책
유한상,Yu, Han-Sang 한국사료협회 2010 飼料 Vol.43 No.-
구제역(Foot and Mouth Disease)은 우제류(偶蹄類; 발굽이 둘로 갈라 진 동물)에 구제역 바이러스가 감염되어 발생하는 급성, 열성의 전염병이다. 감염 시입과 제부(발굽)의 점막 및 피부에 수포를 형성하는 것이 특정이다. 이 질병은 소, 돼지, 염소, 산양, 사슴, 산돼지, 코끼리, 기린 등 70 여종이상의 동물에 감염되어 발육, 비유, 운동, 번식 등의 장애를 유발한다. 이 질병은 감수성동물이 많고, 전염력이 강하며, 바이러스형이 다양하여 방역에 극히 어려움을 나타내는 질병이다. 현재 세계동물위생기구(World Organization for Animal Health, OIE, 국제수역사무국)에서 발생시 보고하도록 규정하고 있는 질병으로, 국내에서도 제1종 가축 전염병으로 규정하여 국가에서 관리하는 질병이다. 구제역 비발생국에서는 발생국으로 부터의 가축, 축산물들의 수입금지나, 엄격한 검역조치를 취할 수 있어 국제교역에 많은 지장을 주는 질병이다. 이에 본고에서는 이러한 구제역에 대하여 자세히 알아보고, 이에 대한 효율적인 방역 대책이 무엇인가를 생각해보고자 한다.