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생식내분비학 : 생쥐 모델에서 BMP-6가 여성의 나이에 따른 난포발달과 난자질 및 신생혈관생성인자의 발현에 미치는 효과
주보선,박민정,박세희,이수경,염현식,문화숙 대한산부인과학회 2012 대한산부인과학회 학술대회 Vol.98 No.-
여성의 나이 증가가 불임의 중요한 원인이 되고 있는 반면, 고령 여성의 불임치료는 아직 해결되어야 할 난제로 남아 있다. 난소 내신생혈관생성은 난포의 성장, 우성난포로의 선발 등 난포발달 과정에서 매우 중요한 역할을 하며, 최근에는 난포의 노화가 원시난포와 난소 기질 혈관에서의 부적절한 신생혈관생성으로 야기될 수 있는 것으로 보고되고 있다. 그러나 여성의 나이에 따른 신생혈관생성 조절인자에 의한 난포발달 및 난자질에 관한 연구는 매우 제한적이다. BMP-6는 난포발달에 중요한 역할을 한다고 알려진 TGF-β superfamily에 속하며, BMP-6 유전자 결핍생쥐는 과립막세포의 증식 감소, 비정상적인 난자 형성 및 난포발달을 초래한다고 알려져 있다. 그러나 BMP-6가 여성의 나이에 따른 난소 기능 및 난소 내 신생혈관생성에 미치는 효과에 관한 연구는 없다. 따라서 본 연구는 주령(나이)이 많은 자성생쥐를 이용, 과배란유도 시 다양한 농도의 BMP-6를 주사하여, BMP-6가 난포발달, 난자질 개선 및 난소 내 신생혈관생성인자에 관여하는 inhibitors of differentiation/DNA binding proteins-1 (Id-1)과 vascular endothelial growth factor (VEGF)의 발현에 미치는 효과를 조사하였다. 방법: 26-31주령의 C57BL 순종 자성생쥐의 과배란유도 시 다양한 농도의 BMP-6 (0.01, 0.1, 1, 10 ng/ml)를 함유한 5 IU pregnant mare``s serum gonadotropin (PMSG)를 복강 주사하고, 48시간 후 5 IU human chorionic gonadotropin (hCG)를 주사하였다. BMP-6을 투여하지 않고 PMSG만 주사한 26-31주령의 생쥐를 음성대조군으로 이용하였으며, 6-9주령의 어린 생쥐를 과배란 유도와 체외 배양의 양성대조군으로 사용하였다. hCG 주사 후 즉시 동종의 웅성생쥐와 1:1 교배시킨 다음, 16-18시간 후 나팔관 팽대부로부터 접합자를 회수하였다. 회수된 접합자를 8-세포기까지는 P1 (Irvine) 배양액에서, 그 이후 포배아까지는 포배아 배양액 (Irvine)에서 체외배양하면서 난포발달을 관찰하였다. 접합자 회수 직후 채취한 난소조직으로부터 Id-1과 VEGF의 발현을 RT-PCR, western blot 및 면역조직학방법으로 조사하였다. 결과: 0.1 ng/ml BMP-6 투여 시 배란된 난자수 및 포배아 형성율이 대조군에 비해 유의하게 증가하였으며, Id-1과 VEGF 발현 또한 증가하는 양상을 보였다 (p<0.05). 이러한 증가는 양성대조군인 어린 생쥐와 비슷한 수준이었다. 결론: 과배란 유도동안 BMP-6 투여는 난소 내 Id-1과 VEGF의 발현 증가를 유도함으로써 난소 노화로 인해 감소된 난자질 개선에 중요한 역할을 수행할 수 있음을 시사하고 있다.
Nitric Oxide가 인간 정자세포의 기능에 미치는 효과에 대한 연구
주보선,문화숙,박수진,문재연,조재동,김한도,Joo, Bo-Sun,Moon, Hwa-Sook,Park, Sue-Jin,Moon, Jae-Yeoun,Cho, Jae-Dong,Kim, Han-Do 대한생식의학회 1998 Clinical and Experimental Reproductive Medicine Vol.25 No.1
This study was performed to determine the effects of nitric oxide on human sperm cell function. Semen samples were obtained from normal healthy volunteers. Motile spermatozoas collected by swim-up method were incubated up to 24 hours in Ham's F-10 medium supplemented with a various concentration of sodium nitroprusside (nitric oxide releasing agent). Sperm motility, hyperactivation, acrosome reaction rate, and acrosin activity were determined. The results are as follows; 1. 1mM of SNP resulted in a significant decrease in sperm motility ($44.8%{\pm}8.9%:78.1%{\pm}6.3%$, and hyperactivation $(10.4%{\pm}6.4%:47.7%:{\pm}9.5%)$ after incubation for 3 hours compared with the control group (Ham's F-10 alone), but had no effect on acrosome reaction. 2. At $100{\mu}M$ SNP, sperm motility was reduced after incubation for 6 hours $(54.8%{\pm}3.2%)$ compared with that of the control group $(82.7%{\pm}8.9%)$, but hyperactivation and acrosome reaction were not affected. 3. However, a lower concentration (less than $10{\mu}M$) of SNP had no effect on sperm motility and hyperactivation for 8 hours of incubation but significantly decreased them when incubation periods were increased up to 24 hours compared with the control group. On the other hand, $1{\mu}M$ and $10{\mu}M$ SNP significantly increased the acrosome reaction rate in both acrosomal status ($17.3%{\pm}5.2%$, $23.5%{\pm}4.7%$, respectively) and acrosin activity ($34.3{\mu}IU{\pm}10.5{\mu}IU,\;45.6{\mu}IU{\pm}5.6{\mu}IU$, respectively) as compared with the control group $(7.0%{\pm}4.0%,\;9.5{\mu}IU{\pm}3.4{\mu}IU)$. These results indicate that SNP, NO releasing agent, has a dose-dependent effects on the sperm cell function. Therefore it may positively affect the fertilization by promoting acrosomal reaction at a lower concentration (less than $10{\mu}M$).
성선자극호르몬 및 GnRH agonist을 동시에 중단하는 1$\sim$2일 단기 코스팅이 임신율을 포함한 난소과자극증후군 예방에 미치는 효과
이수경,주보선,박세희,이수경,김경서,문성은,문화숙,Lee, Soo-Kyung,Joo, Bo-Sun,Park, Sea-Hee,Lee, Su-Kyung,Kim, Kyung-Seo,Moon, Sung-Eun,Moon, Hwa-Sook 대한생식의학회 2007 Clinical and Experimental Reproductive Medicine Vol.34 No.1
목 적: 성선자극호르몬과 GnRH agonist (GnRH)를 동시에 중단하는 1$\sim$2 일간의 단기 coasting이 임신율을 포함한 난소과자극증후군 예방에 미치는 효과를 조사하고자 한다. 연구방법: 체외수정시술을 위한 과배란유도 시 15 mm 이상의 난포가 20 개 이상이고 혈중 E$_2$ 농도가 4,000 pg/ml 이상일 때 coasting을 시도한 37 명의 여성들을 대상으로 하였다. Coasting은 성선자극호르몬과 GnRH agonist를 동시에 중단하였으며, 초음파상 난포의 상태와 혈중 E$_2$ 농도 에 따라 1일 또는 2일 동안 시행하였다. 혈중 E$_2$ 농도, 채취된 난자 수, 수정율, 임신율 등을 후향적으로 비교 분석하였다. 결 과: 평균 혈중 E$_2$ 농도는 coasting 시작 당일 6,993 pg/ml 에서 hCG 투여일에 3,396 pg/ml로 감소하였다. 평균 채취 난자 수와 수정율은 15.7개와 70%였다. 15명 (40.6%)이 임신을 하였고 착상율은 15.2%였다. 26명 (70.3%)이 1일, 11명 (29.7%)이 2일 동안 coasting 하였다. 평균 혈중 농도의 감소율은 1일 coasting한 군에서 43%, 2일 costing한 군은 15% (첫날)와 81% (둘째날)이었다. 임신율은 두 군간 유사하였고, 중증도 이상의 OHSS는 발생하지 않았으며 3명 (8.1%)에서 경미한 OHSS가 나타났다. 결 론: 성선자극호르몬과 GnRH agonist의 통시 중단에 의한 1$\sim$2 일의 단기 coasting은 체외수정의 결과에 영향을 주지않고 OHSS 를 예방하는데 성공적으로 적용될 수 있을 것으로 사료된다. Objective: To evaluate the effect of short coasting, by withdrawing both gonadotropins and GnRH agonist (GnRHa), on the prevention in severe ovarian hyperstimulation syndrome(OHSS) without compromising pregnancy outcome. Method: Thirty-seven women who had been coasted during COH for IVF were coasted when $\geq$20 follicles > 15 mm with serum E$_2$ level of 4,000 pg/ml were detected. Coasting was initiated for one or two days depending on the status of follicle on ultrasound and serum E$_2$ level. Both gonadotropin and GnRHa were withheld for coasting. Retrospective study was carried and changes of serum E$_2$ levels, number of oocytes retrieved, fertilization rate, pregnancy rate were compared and analyzed. Results: The mean serum E$_2$ level fell from 6,993 pg/ml on the onset of coasting to 3,396 pg/ml on the day of hCG administration. The mean number of oocytes retrieved and fertilization rate were 15.7 and 70.0%, respectively. Fifteen patients were pregnant (40.6%) and implantation rate was 15.2%. Twenty-six (70.3%) patients were coasted for one day and 11 (29.7%) were coasted for two days. The mean decrease rate of serum E$_2$ level was 43% in one day coasting group and 15% (1$^{st}$ day) and 81% (2$^{nd}$ day) in two day coasting group. The pregnancy outcome was similar between the two groups. After coasting, no severe or moderate OHSS occurred in any patients and mild OHSS occurred in 3(8.1%) patients. Conclusions: Coasting for one or two days can be used successfully in the prevention of OHSS without compromising IVF cycle outcome.
Dose-Dependent Inhibitory Effect of Nitric Oxide on Embryo Development
박세희,주보선,문화숙,김윤연,조재동,강호성,김한도,Park, Sea-Hee,Joo, Bo-Sun,Moon, Hwa-Sook,Kim, Yoon-Yeon,Cho, Jae-Dong,Kang, Ho-Sung,Kim, Han-Do The Korean Society for Reproductive Medicine 1999 Clinical and Experimental Reproductive Medicine Vol.26 No.2
목적: 일산화질소 (nitric oxide; NO)는 생식계를 비롯한 여러 생체내 기관에서 다양하고도 중요한 작용을 하는 것으로 알려져 있으며, 복강액은 난관내강과 연결되어 복강액 내의 세포 성분의 변화는 난관의 미세환경을 변화시켜 수정과 초기 배아 발생에 영향을 줄 수 있다. 본 연구는 배아 발생에 있어서 일산화질소의 역할을 이해하고 복강액 내의 NO농도 변화가 배아 발생에 미치는 역할을 조사하기 위해 수행되었다. 방법: 과배란시킨 1세대 잡종 암컷 생쥐 (C57BL${\times}$CBA/Ca)로부터 1세포기 배아를 얻어 10% synthetic serum substitute가 첨가된 modified human tubal fluid 배양액에서 4일 동안 체외배양하였다(대조군). 실험을 위해 이러한 배양조건에 sodium nitroprusside (SNP)를 $0{\sim}1mM$의 다양한 농도로 배양초기부터 첨가하거나, $200{\mu}M$ SNP를 2-, 4-, 8-세포기의 각기 다른 배아시기에 첨가하였으며, 복강경수술을 받는 42명의 여성으로부터 채취한 복강액을 SSS대신 단백질원으로 사용하여 포배아까지의 배아 발달율을 관찰하였으며, 복강액 내의 NO농도를 Griess방법에 의해 측정하였다. 배아의 apoptotic body는 H33342 염색법으로 조사하였으며 배아 발달율은 3회 이상 반복 실험한 결과의 mean${\pm}$SEM으로 나타내었다. 결과: SNP는 농도에 의존적으로 배발생을 억제하였으나 배아 단계에 대한 특이성은 관찰할 수 없었으며, 특히 $100{\mu}M$ 이상의 고농도의 SNP는 2-세포기 단계에서 배아 발생을 정지시켰다. 또한 단백질원으로 복강액 이용시 배 발생율은 복강액 내의 NO 농도에 따라 현저한 차이가 발견되었으며, $2.5{\mu}M$이상의 NO를 함유한 복강액에서 배양한 배아의 발생율은 현저하게 감소하였다. cGMP analogue인 8-bromo-cGMP를 배양액에 첨가시 배아 발생에는 변화가 없었으며, SNP에 의해 배발생이 정지된 2-세포기 배아에서 apoptotic body를 발견할 수 없었다. 결론: 이상의 결과로 보아 NO는 고농도에서 배아 발생을 저해하며, 복강액 내의 NO와 같은 성분의 변화는 배아 발생에 유해한 효과를 유발할 것으로 사료된다. 이러한 NO의 배아 발생 억제효과는 cGMP로 중재되는 경로나 apoptosis유발과는 관계가 없는 것 같다.