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페놀화합물 처리 Agrobacterium 및 세포벽 약화 들깨새싹을 이용한 형질전환과 재조합 단백질 발현
정일경(Il-Kyung Chung),신동일(Dong-Il Shin),박희성(Hee-Sung Park) 한국생물공학회 2009 KSBB Journal Vol.24 No.6
들깨묘는 재배가 용이하며 건강채소로 애용되고 있다. 본 연구에서는 발아 후 2일째의 들깨묘에 대하여 세포 상해를 일으킬 수 있는 NaOH/SDS 용액을 처리하고 페놀 화합물을 처리한 재조합 Agrobacterium 세포를 이용하여 형질전환을 수행하였다. 형광분석에 의한 GUS 유전자발현 분석에서 50 mM acetosyringone 처리 및 0.5% NaOH /0.01% SDS 처리의 복합처리에 의하여 가장 높은 GUS활성이 나타났으며 상승효과를 제시할 수 있었다. 이러한 결과는 hepatitis B virus antigen (HBsAg) 단백질 발현으로 성공적으로 확인할 수 있었다. Perilla [Perilla frutescens (L.) Britt] seedlings are easy to grow and eaten as the health vegetable sprout. Two day old perilla seedlings since germination were given a mild wounding using cell wall lytic NaOH/SDS solution for infiltration with recombinant Agrobacterium cells treated with phenolic compounds. In the analysis of fluorometric GUS gene expression for the transformed perilla seedlings, GUS enzyme activity was the highest by the combined treatments of 50 mM acetosyringone and 0.5% NaOH solution containing 0.01% SDS implying a synergic effect. This result could be successfully applied for demonstrating hepatitis B virus antigen (HBsAg) protein expression.
손태권,정일경,Son, Tae-Kwon,Chung, Il-Kyung 한국작물학회 2006 한국작물학회지 Vol.51 No.suppl1
사과 재배시 대두되고 있는 수정 불량 및 안정된 수정을 통한 품질 향상을 위한 방안을 모색하고자 자가불화합성 제어제(상품명 : 애플플러스)를 이용한 SSR 유전 분석을 통한 자가수정 향상 정도 및 촉진 효과, 품질 특성에 미치는 영향을 검토하였다. 1. 후지 품종에 있어서 중심화 결실율은 자연방임시 무처리의 경우 2004년 0.5%, 2005년 3.0%인데 비하여 자가불화합성 제어제 처리의 경우 2004년 17.2%, 2005년 44.4%로 높게 나타났다. 2. 망을 씌워 자가불화합성 제어제를 처리한 실험구에서도 무처리구에서는 2004년 0.4%, 2005년 0.7%, 처리구에서는 2004년 3.3%, 2005년 5.2%의 결실율을 보여 처리구가 $7.4{\sim}8.3$배정도 결실율이 높게 나타났다. 3. 망을 씌워 자가불화합성 제어제 처리한 실험구와 무처리구를 비교하면 L/D, 경도에서는 유의성이 인정되지 않았으며, 종자수에서는 무처리구 0.9개, IS-1 처리구 1.2개, IS-2 처리구 1.2개, IS-3 처리구 1.5개, IS-4 처리구 0.7개로 나타나 약제 종류에 따라 효과가 다르게 나타났다. 4. SSR 유전자 분석에 의한 후지 품종 종자의 자가수분 정도는 무처리구에서 0%, IS-1 처리구 100%, IS-2 처리구 73%, IS-3 처리구 88%, IS-4 처리구 62%로 나타나 IS-1의 약제가 가장 높게 나타났다. This study investigated the effect of self-incompatibility control substance 'Apple plus' in improving self-fertilization and quality on apple. Results showed that the rate of fruit setting of disc florets of Fuji apple in the open field increased from 17.2% in 2004 to 44.4% in 2005 for the treated plots and from 0.5% in 2004 to 3.0% in 2005 for the control. In the case of using net covering, the rate of fruit setting increased from 3.3% in 2004 to 5.2% in 2005 for the treated plots and from 0.4% in 2004 to 0.1% in 2005 for the control. For the quality of apple fruits, results showed that there was no significant difference on the fruit L/D and firmness for both control and treated plots. However, the number of seeds was affected by the different substances which produced the following average number of seeds: control, 0.9; IS-1, 1.2; IS-2, 1.2; IS-3, 1.5 and IS-4, 0.7. The SSR genetic analysis showed that the rate of self-fertilization was highest for IS-1 (100%), followed by IS-2 (73%), IS-3 (68%), IS-4 (62%) and control (0%).
담배 형질전환 식물체를 이용한 γ-Benzenehexachloride의 분해
이정경,박순기,정일경,Lee, Jeong-Kyung,Park, Soon-Ki,Chung, Il-Kyung 한국식물생명공학회 2003 식물생명공학회지 Vol.30 No.1
LinA gene involving in the ${\gamma}$-benzenehexachloride degradation have been cloned from Sphingmonas paucimobilis UT26. This linA gene which catalyzes the first dechlorination step of ${\gamma}$-benzenehexachloride is known to play a key role in the ${\gamma}$-benzenehexachloride degradation pathway in UT26. In this study, the linA gene was designed to clean-up the ${\gamma}$-benzenehexachloride and its derivatives contaminated in soil, water and air using transgenic tobacco plants. The linA transgene was introduced into the chromosome of tobacco using leaf-disk transformation approach as revealed by Southern blot analysis. In addition, mRNA and protein produced by linA gene was expressed at a high level in the leaf tissue as demonstrated by both northern blot analysis and Western bolt analysis with polyclonal antibody against S. paucimobilis UT26. in vitro analysis using GC-MS showed that transgenic tobacco plant produced the linA protein which effectively degraded ${\gamma}$-benzenehexachloride into ${\gamma}$- pentachlorocyclohexene and 1,2,4-trichlobenzene compounds which are less toxic. 본 연구는 난분해성 농약의 자연분해를 유도하기 위하여 ${\gamma}$-BHC를 탄소원으로 이용하여 호기적으로 자화하는 미생물 (Sphingomonas paucimobilis)에서 분리된 탈염소화효소 중 ${\gamma}$-BHC분해의 첫단계에 관여하는 linA유전자를 담배에 도입하여 BHC에 활성을 나타내는 형질전환 시물체를 만들었다. LinA 유전자를 함유한 pJK 108 백터를 제작하여. Agrobacterium를 이용한 leaf disk transformation 방법으로 담배에 형질전환시켰으며, northern분석 및 Southern분석을 통해 형질전환 개체에서 linA유전자의 도입과 linA유전자 유래의 mRNA가 전사됨을 확인하였다. Western 분석에서 linA단백질의 발현을 확인하였고, gas chromatography를 이용하여 담배 형질전환 개체에서 BHC가 ${\gamma}$-PCCH와 1,2.4-TCB로 분해되는 것을 확인하였다.