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- 저자 : 임선희 ( Shon Hee Lim ) (검색결과 5 건)
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옥수수 중의 Zearalenone 분석을 위한 효소면역측정법
손동화,한성민,임선희,이인원,강신영 한국산업미생물학회 1994 한국미생물·생명공학회지 Vol.22 No.4
효소면역측정법(ELISA)에 의한 옥수수중의 zearalenone(ZEA) 정량법을 개발하기 위하여, ZEA-6'-carboxymethyloxime-BSA(ZEA-BSA)을 토끼에 면역하여 생산한 다클론항체를 정제하고 간접법에 의한 분석법(competitive indirect ELISA)을 확립하였다. 이 항체는 ZEA의 유사독소인 α-zearalenol, β-zearalenol, α-zearalanol 및 β-zearalanol에 대하여 9.6∼1.4%의 낮은 교차반응을 보였다. ZEA 표준품에 대하여 작성한 표준곡선으로부터 이 분석법에 의한 ZEA의 검출농도는 0.3∼1,000 ng/㎖ 정도로 나타났다. 분쇄옥수수에 ZEA를 인위적으로 오염하여(10∼1,000 ng/g) ELISA 분석치와 비교하였을 때, 10 ng/g의 저농도에서는 그 회수율이 높게 나타났지만(258%) 30 ng/g 이상 1,000 ng/g의 농도에서는 평균 109%(94∼123%)로 양호하였으며, 오염농도별 각 분석치의 상대적인 분산도(CV)는 평균 18.0%(0.9∼28.3%)였다. 한편 자연오염된 9개의 옥수수시료를 3차례 분석하였을 때, CV가 다소 크게 나타난 경우도 있었으나 평균 27.7%(9.3∼52.4%)로 대체로 근사한 수치를 나타내었다. 따라서 본 효소면역측정법은 30 ng/g 이상의 ZEA이 오염된 옥수수시료의 분석에 활용가능한 것으로 나타났다. In order to develop an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for zearalenone (ZEA) in corn, we produced antisera by immunizing rabbits with ZEA-6'-carboxymethyloxime-BSA, purified polyclonal anti ZEA antibodies, and subsequently established a competitive indirect ELISA. The antibodies showed low cross-reactivity of 9.6∼1.4% against ZEA analogues such as α-zearalenol, β-zearalenol, α-zearalanol, and β-zearalanol. From the standard curve of the ELISA for ZEA in corn, the detection range was found to be 0.3∼1,000 ng/㎖. When artificially contaminated corns were assayed by the ELISA, the average recovery of ZEA spiked to 30∼1,000 ng/g was 109% (96∼123%), although that of ZEA spiked to 10 ng/g was somewhat high (258%). The average coefficient of variation (CV) of the recovery was 18.0% (0.9∼28.3%). When 9 corn samples naturally contaminated were assayed 3 times, the average CV of the determinations was 27.7% (9.3∼52.4%). Therefore, the ELISA was elucidated to be a practical tool for the detection of ZEA of 30 ng/g and more from corn.
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효소면역측정법에 의한 우유중의 Aflatoxin M1 분석
손동화,임선희,이인원 한국미생물생명공학회 ( 구 한국산업미생물학회 ) 1996 한국미생물·생명공학회지 Vol.24 No.5
국내산 우유중 aflatoxin M_1 (AFM_1)의 오염현황을 조사하기 위하여, 효소면역측정법(ELISA)을 개발하고 이를 이용한 독소의 정량을 행하였다. 항체의 생산을 위하여 AFM_1 bovine serum albumin 결합체를 Freund's adjuvant와 함께 토끼에 피하주사하여 면역하였다. 가장 높은 항체역가를 보인 항혈청과 AFB_1-horseradish peroxidase 결합체를 이용하여 직접법에 의한 경합적 효소면역측정법(competitive direct ELISA ; cdELISA)의 조건을 확립하였으며, 그 검출한계는 0.003ppb로 나타났다. 또한 유사독소에 대한 교차반응율은 aflatoxin M_1, M_2, B_1, _2, G_1, G_2, B_2a, and G_2a 에 대하여 각각 100, 29.9, 25.0, 2.7, 13.0, 0.65, 0, 및 0%이었다. 다음으로, AFM_1을 인위적으로 오염시킨 우유를 C_18 cartridge로 세척후 cdELISA로 분석하였을 때, 0.01~1 ppb(10~1,000 ppt)의 범위에서 그 회수율의 평균은 104%(CV의 평균, 6.4%)로 나타났다. 시유 및 목장우유를 대상으로 AFM_1의 오염현황을 cdELISA로 조사하였을 때, 평균 오염도는 80.4±55.0 ppt (n=64; range, 5,6~280 ppt)이었다. For a survey of the occurrence of aflatoxin M_1 (AFM_1) in domestic cow's milk, we developed an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) system, and quantitated the toxin in cow's milk. In order to produce specific antibodies AFM_1 conjugated to bovine serum albumin (AFM_1-BSA) and Freund's adjuvant were immunized subcutaneously to rabbits. By use of the antiserum showing the highest titer and AFB_1-HRP conjugate, we established a competitive direct ELISA (cdELISA) for AFM_1 whose detection limit was 0.003 ppb. The cross-reactivities of the antiserum against aflatoxin M_1, M_2, B_1, _2, G_1, G_2, B_2a, and G_2a were 100, 29.9, 25.0, 2.7, 13.0, 0.65, 0, and 0%, respectively. When the cdELISA was applied to the cow's milk spiked with AFM_1 and followed by cleanup with C_18 cartridge, the mean recovery of the assay was 104% (mean of CV, 6.4%) in the final concentration of 0.01~1 ppb (10~1,000 ppt). When cow's milk samples gathered from markets and farms were assayed by the cdELISA, the mean concentration and SD of AFM_1 was 80.4±55.0 ppt (n=64; range, 5,6~280 ppt).
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효소면역측정법을 이용한 Fumonisin의 검출법 개발
손동화,한성민,임선희,이인원,조선희,강신영,이경애 한국미생물생명공학회 ( 구 한국산업미생물학회 ) 1996 한국미생물·생명공학회지 Vol.24 No.1
Fumonisin에 대한 효소면역측정법(ELISA)을 개발하기 위하여 특이항체를 생산하고, 분석조건을 확립하여, 인위적으로 오염시킨 옥수수 시료의 분석을 행하였다. Fumonisin B_1 (FB_1)을 cholera toxin (CT)에 결합시킨 FB_1-CT conjugate를 면역원으로 하여 Freund's adjuvant와 함께, 또는 단독으로 두 군의 토끼에 면역하고 특이항체를 생산하였다. 항혈청을 ELISA로 분석한 결과 그 adjuvant와 함께 면역한 경우 항체역가(titer)가 높게 나타났다. 가장 높은 항체역가(1 : 16,000)를 나타낸 항혈청 및 그로부터 정제한 항체를 이용하여 간접법 및 직접법에 의한 경합적 ELISA(ciELISA 및 cdELISA)를 각각 확립하였다. 이 항체의 유사독소와의 교차반응을 ciELISA로 조사하였을 때, FB_3에 대한 교차반응율은 2%로 매우 낮았으나, FB_2에 대한 것은 179%로 다소 높았다. FB_1의 검출한계는 ciELISA에서 0.03ppb, cdELISA에서 0.3 ppb로 각각 나타났다. 실제 곡물시료의 분석에 ELISA 활용가능성을 조사하기 위하여 인위적으로 FB_1을 오염시킨 옥수수를 75% methanol로 추출하고 그 회수율을 측정한 결과, 분석이 불안정하여 회수율이 일정하게 나타나지 않았다. 그러나 방해물질의 제거를 위하여 시료추출액을 strong anion exchange(SAX) cartridge를 거쳐 세척한 다음 분석하였을 때, 3~10 ppm 범위의 FB_1 오염 옥수수에서 평균 34%(CV의 평균, 8.2%)의 안정된 회수율을 보였다. In order to develop enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for fumonisins, production of specific antibodies, establishement of ELISA conditions, and quantitation of the toxin from spiked corns by ELISA were performed. Fumonisin B_1 (FB_1) conjugated to cholera toxin (CT) with or without Freund's adjuvant was subcutaneously injected into 2 groups of rabbits. When the titer of the antisera produced by each rabbit tested, higher titer was observed in case of the immunization with the adjuvant. By use of the antiserum showing the highest titer (1 : 16,000) and its purified antibodies, competitive indirect and direct ELISA's (ciELISA and cdELISA) were established, respectively. When the cross-reactivity of the antibody against fumonisin analogs was investigate by the ciELISA is was very low against B_3 (2%) but high against fumonisin B_2 (179%). The sensitivity of the ELISAs was also very high, because the detection limit for FB_1 was 0.03 ppb in ciELISA and 0.3 ppb in cdELISA. When the ELISA's were applied to the spiked corns after extraction with 75% methanol, the assay recovery of FB_1 was too unstable to assay. However, when cleanup by strong anion exchange (SAX) cartridge was introduced to remove interfering materials, the mean ELISA recovery of FB_1 from corns spiked to 3~10 ppm was found to be 34.0% and stable (mean of CV, 8.2%).
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