植物抽出物을 利用한 Listeria monocytogenes의 增殖抑制 硏究

한지숙 全北大學校 1995 국내석사

Ethanol extract of barks, roots, stems, leaves and seeds of 126 species of plants were examined their growth inhibition by disc method on Listeria monocytogenes ATCC 19111, ATCC 19112, ATCC 19113, ATCC 19114 and ATCC 15313. The extracts exhibited comparatively strong growth inhibition were compared their activity by brath culture containing different concentration of the extracts. Five strains of L. monocytogenes were inhibited by Glycyrrhiza glabra L. var. glandulifera Regel et· Zucc., Sophora flavescens AITON, Prunella vulgaris var lilacina Nakai, Aralia cordata THUNB, Vitex rotundifolia L., Inula helenuim L., Paeonia suffruticosa Andr., Sinomenium acutum (Thunb.) Rehd. et wils, Paeonia japonica Miyabe et Takeda var. pilosa Nakai, Areca catechu L.(Seeds), Morus alba Linne, Evodia officinalis Dode, Corydalis turtschaninowii Bess. and Coptis japonica Makino, Especially Glycyrrhiza glabra L. var. glandulifera Regel et Zucc., Inula helenuim L., Paeonia suffruticosa Andr., Morus alba Linne extract showed comparatively goad inhibition effect for 5 strains of L monocytogenes. L. monocytogenes ATCC 19111 was strongly inhibited by Siegesbeckia pubescens Makino and Psoralea corylifolia L. extracts. L. monocytogenes ATCC 19113 was inhibited by Sophora flavescens AITON, Ephedra sinica Stapf, Vitex rotundifolia L. and Plantago asiatica L. extracts. L. monocytogenes ATCC 15313 was inhibited by Prunella vulgaris var lilacina Nakai, Scutellaria baicalensis Georg. and Foeniculum vulgare Gaertner. extracts. L. monocytogenes ATCC 19111 and L. monocytogenes ATCC 19l14 were inhibited by Sinomenium acutum (Thunb.) Rehd. et wils extracts. Morus alba Linne extract showed comparatively goad inhibition effect for 5 strains of L. monoytogenes and 500ppm of Morus alba Linne extract almost inhibited the growth of all L. monocytogenes tested. The Glycyrrhiza glabru L.var. glandulifera Regel et Zucc. extract also stopped the growth totally of all strains in 500ppm addition level and even 100ppm of the extract in he broth inhibited the growth of all test strains of L. monocytogenes far 12 to 48 hours, L. monocytogenes ATCC 19113 was more sensitive than other strains. Ethanol extracts of Morus alba Linne and Glycyrrhiza glabra L.var. glandulifera Regel et Zucc. were fractionated by chloroform(CHCl₃), ethyl acetate(EtOAc), butanal(BuOH) and water. Each fraction was added to tryptic soy broth varying in levels and test L monocytogenes were inoculated in the broth for comparing growth inhibition at 32%. The CHC1₃and EtOAc fraction of Morus alba Linne were superior in growth inhibition of 5 strains but only CHCl₃fraction of Glycyrrhiza glabra L. var. glandulifera Regel et Zucc. showed comparatively higher inhibition to all test L. monocytogenes. L. monocytogenes ATCC 19111 and 19113 were totally inhibited by 500ppm of EtOAc fraction and L. monocytogenes ATCC 19112, 19114 and 15313 were also absoluteiy inhibited by 1000ppm of CHC1₃fraction of 75% ethanol extract from Morus alba Linne. L monocytogenes ATCC 19111 and 15313 were inhibited by 1000ppm of CHCl₃ fraction pf 75% ethanol extract from Glycyrrhiza glabm L,var. glandulifera Regel et Zucc. L monocytogenes ATCC 19112 and 19114 were inhibited by 500ppm af CHC1p fraction and L monocytogenes ATCC 19113 inhibited by 100ppm of CHCl₃fraction of 75% ethanol extract from Glycyrrhiza glabra L. var. glandulifera Regel et Zucc. but CHC1₃fraction of Glycyrrhiza glabru L. var. glandulifera Regel et Zucc. Some preservatives, potassium sorbate and sodium benzoate were no effect on growth inhibition even 2000ppm and 500ppm respectively. Morus alba Linne extract was added in the paste of Theragra chalcogramma(Alaska pallack) and 2000ppm addition level inhibited the growth of all test strains of L monocytogenes for 24 hours. The growth inhibition effect was reduced in the paste of Therogra chalcogramma(Alaska pollack) comparing with the broth.

연교추출물의 항산화활성및 화장품의 소재로서의 연구

양서진 건국대학교 대학원 2012 국내박사

적양자 추출물의 항산화 및 항염 효능

YANG YANG 서경대학교 일반대학원 2020 국내석사

This study was conducted to examine the potential use of natural cosmetics materials for preventing aging and improving skin problems for ethanol extracts and hydrothermal extracts from pyracantha angustifolia. To this end, the crushed pyracantha angustifolia were measured in cytotoxicity assessment, antioxidant and anti-inflammatory activity through ethanol and hydrothermal extraction, and the results were compared and analyzed to obtain the following conclusions. First, to measure antioxidant activity of the pyracantha angustifolia extract, a comparative experiment was performed on the DPPH radical elimination ability, FRAP measurement, and total polyphenol content thorugh ethanol and hydrothermal extraction. The result of the DPPH radical elimination ability test showed that when the concentration of ascorbic acid that was used as a positive control material was 7.5 µg/ml, the radical elimination ability was 94.69±0.05%. When each extract materials were processed at a concentration of 0.0625 mg/ml, 0.0312 mg/ml, 0.0156 mg/ml, and 0.0078 mg/ml, the DPPH radical elimination ability dependently increased by 86.01±1.00%, 91.55±0.50%, 92.87±0.01%, and 77.30±1.05% of ethanol extract and by 93.13±0.50%, 79.15±1.00%, 45.64±2.50%, 24.27±1.00% of hydrothermal extract. The ABTS radical elimination ability result showed that when the concentration of ascorbic acid that was used as a positive control material was 7.5 µg/ml, the radical elimination ability was 11.48±0.01%. When processing each extract materials at a concentration of 0.0625 mg/ml, 0.0312 mg/ml, 0.0156 mg/ml, and 0.0078 mg/ml, ABTS radical elimination activity increased dependently to the extract concentration by 6.79±0.30%, 3.62±0.30%, 1.81±0.10%, and 1.28±0.25% for pyracantha angustifolia ethanol extract and by2.79±0.15%, 2.11±0.10%, 1.51±0.00%, and 0.98±0.15% for hydrothermal extract. FRAP measurement showed that when processing each extracts at a concentration of 1 mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.25 mg/ml, 0.125 mg/ml, and 0.0625 mg/ml, everything increased in antioxidation abilitdepending on concentration as depicted by 188.78±2.33 μM, 108.58±1.16 μM, 53.06±20.20 μM, and 24.90±1.16 μM, 11.00±4.27 μM for pyracantha angustifolia ethanol extract and 68.89±10.10 μM, 35.31±0.77 μM, 17.57±1.55 μM, 8.17±0.77 μM, and 3.09±0.38 μM for hydrothermal extract. The measurement of total polyphenol content, which is seen as an antioxidant efficacy indicator, showed that ethanol extract was 37.118±0.015 mgGAE/g and the hydrotherma lextract was 11.461±0.014 mgGAE/g, and both pyracantha angustifolia extract and hydrothermal extract were found to be antioxidant capable. Second, the MTT assay measurement using mouse macrophage RAW264.7 cells to compare and assess the safety of cell toxicity of the rethanol extract and hydrothermal extract showed that the cell survival rate after processing LPS (200 ng/ml) was 100.45±2.47%. When processing each extracted materials at concentration of 1 mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.25 mg/ml, 0.125 mg/ml,and 0.0625 mg/ml, pyracantha angustifolia ethanol extract showed 102.11±0.84%, 101.53±2.12%, 102.26±0.00%, 101.99±0.28%, and 100.04±4.66% of cell survival rates, and hydrothermal extract showed 101.47±0.35%, 100.32±1.20%, 101.36±0.42%, 100.57±2.61%, and 99.79±3.88% of cell survival rates. It was found that there was no cytotoxicity at all concentrations of the two extracts (0.0625-1 mg/ml). Third, after checking the degree of production of nitric oxide (NO) in RAW264.7 cells stimulated by the inflammatory stimulant LPS, it was very low at 1.04M0.33MM in the cell-only control group, and increased its NO biosynthesis to 20.1711.5MM in the LPS (200 ng/ml). When processing each extract at concentration of 1 mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.25 mg/ml, 0.125 mg/ml, and 0.0625 mg/ml, pyracantha angustifolia ethanol extract was shown at 3.16±0.13 μM, 5.71±1.49 μM, 8.07±0.50 μM, 11.17±1.09 μM, and 13.00±0.66 μM, and hydrothermal extract was shown at 9.57±1.25 μM, 10.34±2.02 μM, 10.85±0.41 μM, 13.27±1.71 μM, and 13.70±2.31 μM to confirm that the concentration-dependent NO formation is inhibited. According to the results of an investigation of iNOS protein expression in cells using the Western block analysis method, the level of expression increased rapidly by 2.2 times in the processing of LPS (200 ng/ml) based on the degree of iNOS protein expression in the control group that is cultured only RAW264.7 cells. However, when treated with 2.5 mg/ml, 1.25 mg/ml, 0.625 mg/m and 0.3125 mg/ml, pyracantha angustifolia ethanol extract was 0.1 times, 0.1 times, 1.45 times, 1.50 times, and hydrothermal extracts were found to be 0.1 times, 0.1 times, 1.45 times, and 1.50 times. Therefore, iNOS protein expression was confirmed to be inhibited dependent on the concentration of the pyracantha angustifolia extract. Meanwhile, the TNF-α concentration in the cell-only control group was 0.64 ± 0.00 ng/ml and the LPS (200 ng/ml) alone, showing a 4.09± 0.01 ng/ml increase in TNF-α was confirmed. When each extract was treated with concentration of 1 mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.25 mg/ml, 0.125 mg/ml, and 0.0625 mg/ml, it was shown to be 2.76±0.00 ng/ml, 3.14±0.01 ng/ml, 4.03±0.01 ng/ml, 4.06±0.43 ng/ml, and 4.13±0.03 ng/ml for firethorn ethanol extract, and 3.62±0.30 ng/ml, 3.78±0.06 ng/ml, 4.02±0.11 ng/ml, 4.12±0.01 ng/ml, and 4.23±0.02 ng/ml for hydrothermal extract, confirming the concentration-dependent reduction of TNF-α secretion due to NO generation inhibition. When examining the level of change in mRNA expression in order to investigate the level of gene expression of the inflammatory catalysts TNF-α and iNOS, the level of expression rapidly increased by 520 times during LPS (200 ng/ml) treatment when iNOS mRNA expression level of the cell-only control group was based on 1. When treating each extract with 1 mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.25 mg/ml, 0.125 mg/ml, 0.0625 mg/ml the ethanol extract was 50.52, 66.42, 301.85, 343.06, and 373.53 times, and the hydrothermal extract was shown to be 240.87, 357.26, 436.38, 509.26, and 516.83 times. When the TNF-R mRNA expression level was viewed as 1, the level of expression increased sixfold during LPS (200 ng/ml) treatment, 1.38 times that of ethanol extract, 1.55 times, 1.93 times, 2.07 times, 3.10 times, and hydrothermal extract 2.4 times, 2.64 times, 2.80 times, 3.71 times, 5.65 times. In summing up the above results, it was confirmed that both the pyracantha angustifolia ethanol extract and the hydrothermal extract showed concentration-dependent increases in antioxidant activity, cell survival rate, and anti-inflammatory efficacy. It was also found that the pyracantha angustifolia ethanol extract was superior in antioxidant activity, cytotoxicity and anti-inflammatory effects compared to hydrothermal extracts. Therefore, it is highly likely that pyracantha angustifolia extract will be used as a cosmetic material derived from natural substances to improve various skin problems, such as skin aging and dermatitis. 본 연구는 적양자 에탄올추출물과 열수추출물에 대한 노화방지 및 피부문제 개선을 위한 천연화장품 소재로서 활용 가능성을 살펴보고자 실시하였다. 이를 위해 분쇄된 적양자를 에탄올 및 열수추출법을 통하여 세포독성평가, 항산화 및 항염 활성을 측정 후, 그 결과를 비교분석하고 다음과 같은 결론을 얻었다. 첫째, 적양자 추출물의 항산화 활성을 측정하기 위해 DPPH 라디컬 소거능, ABTS 라디컬 소거능, FRAP 측정, 총폴리페놀 함량에 대해 에탄올 및 열수추출법을 통해 비교실험 하였다. DPPH 라디컬 소거능 측정 결과, 양성 대조 물질로 사용한 ascorbic acid 농도가 7.5 µg/ml일 때, 라디컬 소거능은 94.69±0.05%로 나타났으며, 각 추출물을 0.0625 mg/ml, 0.0312 mg/ml, 0.0156 mg/ml, 0.0078 mg/ml 농도로 처리하였을 때, 에탄올추출물 86.01±1.00%, 91.55±0.50%, 92.87±0.01%, 77.30±1.05%, 열수추출물 93.13±0.50%, 79.15±1.00%, 45.64±2.50%, 24.27±1.00%로 추출물 농도 의존적으로 DPPH 라디칼 소거능이 증가함을 확인하였다. ABTS 라디컬 소거능 측정 결과, 양성 대조 물질로 사용한 ascorbic acid 농도가 7.5 µg/ml일 때, 라디컬 소거능은 11.48±0.01%로 나타났다. 각 추출물을 0.0625 mg/ml, 0.0312 mg/ml, 0.0156 mg/ml, 0.0078 mg/ml 농도로 처리하였을 때, 적양자 에탄올추출물 6.79±0.30%, 3.62±0.30%, 1.81±0.10%, 1.28±0.25%, 열수추출물 2.79±0.15%, 2.11±0.10%, 1.51±0.00%, 0.98±0.15%로 ABTS 라디컬 소거능 활성이 추출물 농도 의존적으로 높아지는 것으로 나타났다. FRAP 측정 결과, 각 추출물을 1 mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.25 mg/ml, 0.125 mg/ml, 0.0625 mg/ml 농도로 처리 하였을 때, 적양자 에탄올추출물 188.78±2.33 μM, 108.58±1.16 μM, 53.06±20.20 μM, 24.90±1.16 μM, 11.00±4.27 μM, 열수추출물 68.89±10.10 μM, 35.31±0.77 μM, 17.57±1.55 μM, 8.17±0.77 μM, 3.09±0.38 μM로 나타나 농도에 따라 모두 항산화 능력이 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 항산화 효능 지표라 할 수 있는 총폴리페놀 함량 측정 결과, 에탄올추출물이 37.118±0.015 mgGAE/g, 열수 추출물이 11.461±0.014 mgGAE/g로 나타나 적양자 에탄올추출물과 열수 추출물 모두 항산화 능력이 있는 것으로 확인되었다. 둘째, 적양자 에탄올추출물과 열수추출물의 세포독성에 대한 안전성을 비교 평가하기 위해 마우스 대식세포 RAW264.7 cell을 이용하여 MTT assay 측정 결과, LPS(200 ng/ml) 처리 후 세포생존율은 100.45±2.47%로 나타났다. 각 추출물을 1 mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.25 mg/ml, 0.125 mg/ml,0.0625 mg/ml 농도로 처리하였을 때, 적양자 에탄올추출물 102.11±0.84%, 101.53±2.12%, 102.26±0.00%, 101.99±0.28%, 100.04±4.66%, 열수추출물 101.47±0.35%, 100.32±1.20%, 101.36±0.42%, 100.57±2.61%, 99.79±3.88%의 세포생존율을 나타내었다. 두 가지 추출물의 모든 농도(0.0625-1 mg/ml)에서 세포독성이 없음을 확인하였다. 셋째, 염증자극물질 LPS로 자극한 RAW264.7 cell에서 NO(nitric oxide)의 생성정도를 확인한 결과, 세포만 배양한 대조군에서 1.04±0.33 μM로 매우 낮았으며, LPS (200 ng/ml) 단독 처리 시 20.17±1.55 μM로 NO 생성이 현저하게 증가하였다. 각 추출물을 1 mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.25 mg/ml, 0.125 mg/ml, 0.0625 mg/ml 농도로 처리 시, 적양자 에탄올추출물의 경우 3.16±0.13 μM, 5.71±1.49 μM, 8.07±0.50 μM, 11.17±1.09 μM, 13.00±0.66 μM로 나타나고 열수추출물을 9.57±1.25 μM, 10.34±2.02 μM, 10.85±0.41 μM, 13.27±1.71 μM, 13.70±2.31 μM로 나타나 농도 의존적으로 NO 생성이 억제되는 것을 확인 하였다. Western blot 분석법을 이용한 세포 내 iNOS 단백질 발현 양상을 조사한 결과, RAW264.7 cell만 배양한 대조군의 iNOS 단백질 발현정도를 1로 기준하였을 때, LPS (200 ng/ml) 처리 시 2.2 배로 발현 수준이 급격히 증가하였다. 그러나 각 추출물을 2.5 mg/ml, 1.25 mg/ml, 0.625 mg/m, 0.3125 mg/ml로 처리 시, 적양자 에탄올추출물 0.1배, 0.1배, 1.45배, 1.50배로 나타났으며 열수추출물 0.1배, 0.1배, 1.45배, 1.50배로 나타났다. 따라서 적양자 추출물 농도 의존적으로 iNOS 단백질 발현이 억제되는 것을 확인하였다. 한편, 세포만 배양한 대조군에서 TNF-α 농도는 0.64±0.00 ng/ml, LPS (200 ng/ml) 단독 처리 시, 4.09±0.01 ng/ml로 나타나 TNF-α가 현저하게 증가함을 확인하였다. 각 추출물을 1 mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.25 mg/ml, 0.125 mg/ml, 0.0625 mg/ml로 처리 시, 적양자 에탄올추출물을 2.76±0.00 ng/ml, 3.14±0.01 ng/ml, 4.03±0.01 ng/ml, 4.06±0.43 ng/ml, 4.13±0.03 ng/ml로 나타났고, 열수추출물을 3.62±0.30 ng/ml, 3.78±0.06 ng/ml, 4.02±0.11 ng/ml, 4.12±0.01 ng/ml, 4.23±0.02 ng/ml로 나타나 농도 의존적으로 NO 생성억제에 따른 TNF-α 분비 감소를 확인하였다. 염증매개물질인 TNF-α와 iNOS의 유전자 발현 수준을 조사하기 위해 세포 내 mRNA 발현 수준 변화를 확인한 결과, 세포만 배양한 대조군의 iNOS mRNA 발현정도를 1로 기준 하였을 때, LPS (200 ng/ml) 처리 시 520 배로 발현 수준이 급격히 증가하였다. 각 추출물을 1 mg/ml, 0.5 mg/ml, 0.25 mg/ml, 0.125 mg/ml, 0.0625 mg/ml 처리 시, 에탄올 추출물 50.52배, 66.42배, 301.85배, 343.06배, 373.53배로 나타났고, 열수추출물 240.87배, 357.26배, 436.38배, 509.26배, 516.83배로 나타났다. TNF-α mRNA 발현 수준을 1로 보았을 때, LPS(200 ng/ml) 처리 시 6배로 발현 수준이 증가하였으며, 에탄올추출물 1.38배, 1.55배, 1.93배, 2.07배, 3.10배로 나타났고, 열수추출물 2.40배, 2.64배, 2.80배, 3.71배, 5.65배로 나타났다. 적양자 추출물 농도 의존적으로 TNF-α와 iNOS의 mRNA 발현 수준이 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 이상의 결과를 종합해 볼 때, 적양자 에탄올추출물 및 열수추출물 모두 농도 의존적으로 항산화 활성, 세포생존율 및 항염 효능이 증가되는 것을 확인하였다. 또한 적양자 에탄올추출물이 열수추출물에 비해 항산화 활성, 세포독성 및 항염 효과에 있어 더 우수하다는 것이 확인 되었다. 따라서 적양자 추출물이 피부노화 및 피부염증 등 다양한 피부문제 개선을 위한 천연물 유래의 화장품 소재로서 활용 가능성이 높을 것으로 판단된다.

석류씨 에탄올 추출물의 항산화효과 및 식물성에스트로겐 활성

유혜경 中央大學校 2006 국내박사

본 연구는 석류씨의 기능성식품 소재화나 가공시 활용될 수 있는 기초 자료를 제공하고자 석류씨의 성분 분석 및 그의 효능들을 밝혀냄으로써, 석류씨의 이용도를 증진하고 기능성 식품으로서의 응용가능성을 모색하고자 석류씨 에탄올 추출물의 항산화효과 및 식물성에스트로겐 활성들을 구명하였다. 1. 석류씨 및 석류농축액의 성분분석 석류씨의 수분함량은 6.6%이었고, 조단백질, 조지방, 조회분 및 탄수화물의 함량은 각각12.2, 8.2, 1.7, 및 71.3%이었다. 또한 석류 농축액의 수분, 조단백질, 조지방, 조회분 및 탄수화물의 함량은 각각 39.3, 0.9 0.4, 1.4 및 58.0%이었다. 석류씨의 주요 아미노산은 glycine과 arginine이었고, lysine의 함량이 가장 적었으며, 석류 농축액의 주요 아미노산은 glutamic acid와 aspartic acids이었고, cystein은 소량 검출되었다. 석류씨의 주요 무기질 조성은 K, Na 및 Ca등 이었고 석류 농축액의 주요 무기질은 K, P 및 Ca등 이었다. 석류씨의 비타민 C의 함량은 0.23 mg/100 g이었으며, 비타민 B그룹과 지용성 비타민은 검출되지 않았다. 반면 석류농축액에는 5가지의 수용성 vitamin이 함유되어 있었으며 지용성 vitamin은 검출되지 않았다. 석류씨 및 석류농축액의 주요 지방산은 linolenic acid와 linoleic acid이었고 석류씨와 농축액의 주요 유리당은 fructose와 glucose이었다. 석류씨의 주요 유기산은 malic acid이었고 석류농축액의 주요 유기산은 malic acid, citric acid이었다. 석류씨의 주요 phytoestrogen은 quercetin으로 29.54 ppm이었고 daidzein 24.20ppm, catechin 3.10 ppm 및 genistein 2.65 ppm이었다. 반면 석류농축액은 daidzein과 quercetin 이 각각 23.72, 9.75 ppm이었다. 2. 석류씨 에탄올 추출물의 추출 추출 용매에 따른 석류씨 추출물의 총 고형분 함량은 methanol 7.3%, ethanol 8.3%, chloroform 9.1%, ethylacetate 11.9%, hexane 7.5% 및 acetonitrile 10.9%로 ethylacetate와 acetonitrile이 10%이상의 고형분으로 유의적으로 가장 높게 나타났고(p<0.05) 식품인 점을 고려할 때 80% ethanol을 이용하여 추출물을 제조하는 것이 최적의 추출용매조건이었다. 또한 70%, 80%, 90% 및 100% 석류씨 에탄올 추출의 고형분 함량은 각각 9.0, 10.2, 8.9 및 8.3%이었다. 이상의 결과 석류씨를 기능성식품으로 이용시 80% 에탄올을 이용하여 추출물을 제조하는 것이 가장 적당한 것으로 판단되었다. 3. 석류씨 에탄올 추출물의 항산화효과 및 식물성에스트로겐 활성 석류씨 추출물에 함유된 페놀성 화합물 및 flavonoid류들은 DPPH 소거효과와 SOD 유사활성을 나타냈으며 DPPH radical 소거능은 α-tocopherol > BHT > 석류씨 80% 에탄올 추출물순으로 나타났다. SOD 유사활성은 rutin > 석류씨 80% 에탄올 추출물 > catechin 순으로 나타나 석류씨 80% 에탄올 추출물이 SOD 유사활성이 나타남을 알 수 있었다. 리놀레인산 기질 및 리놀레인산 에멀젼 기질 모두에서의 항산화효과는 BHT > 석류씨 80% 에탄올 추출물 > α-tocopherol의 순으로 나타났다. 반면 가열산화에서의 항산화 효과는 석류씨 80% 에탄올 추출물 > α-tocopherol > BHT 순으로 나타나 석류씨 80% 에탄올 추출물에 함유된 페놀성 화합물들은 열에 매우 안정한 것으로 나타났다. 아질산염 소거능에서는 석류씨 추출물의 농도가 증가할수록 그 효능 또한 유의적으로 증가하는 경향을 보였다(p<0.05). 안면홍조 현상을 겪고 있는 여성의 경우 석류씨에서 추출한 phytoestrogen의 섭취로 인해 폐경으로 인한 안면홍조 현상의 치료 및 예방에 탁월한 효과가 있음을 확인할 수 있었고 석류씨 추출물 및 대두 제니스테인은 골아세포 증식능 및 분화 촉진효과를 보였다. 또한 석류씨 추출물은 난소 제거 후 생기는 골다공증의 골밀도를 효과적으로 높여주는 것으로 나타나 석류씨 추출물을 건강기능성 식품으로 섭취시 골다공증의 진행을 유의적으로 억제할 수 있었다. 결론적으로 석류씨 추출물에 함유된 페놀성 화합물 즉, phytoestrogen들은 여러가지 항산화효과 및 phytoestrogenic activities를 가지며 이를 이용한 건강기능성 식품제조시 80% 에탄올 추출물을 제조하여 이용하는 것이 바람직하였다.

향장 제형들로부터의 더덕 추출물의 방출 특성 연구

정소영 중앙대학교 의약식품대학원 2008 국내석사

Codonopsis lanceolata is well known for excellent therapeutic action in Korean traditional medicine. Among the active ingredients saponins have been considered to be the major therapeutic ingredient. It has pharmaceutical action as surfactant such as emulsification, cleansing, foaming and ability to remove the horny layer of the skin. So it would show great cosmetic character for rough surface of the skin. Therefore, Codonopsis lanceolata containing saponins would probably to influence on topical disorders such as allergic dermatitis or atopic dermatitis. To utilize this effect the active ingredients should be released from the topical dosage forms. The objective of this study was to characterize several topical formulation for enhanced release of Codonopsis lanceolata extract. The experiment was evaluated by producing dosage forms of creams and pack which contained three percent of Codonopsis lanceolata water soluble extract by using immersion method to measure the amount of the extract released utilizing UV/vis spectrometer. The measuring results of each type of four dosage form creams, releasing amounts, were 14%, 44%, 24%, and 18% in order of hydrophilic cream, O/W cream, W/O cream and lipophilic cream. Releasing amount of W/O cream was about half compare to O/W cream. The result of hydrophilic cream generally showed fast release as time increases. So it is possibly assumed after four hours the releasing would keep go on continuously. Lipophilic cream well be in need of oil phase pass process in order to release Codonopsis lanceolata extract from based materials and differences in formulations of oil phase operates on diffuse layer so that would have the function of releasing inhibition. Result of pack's releasing amount was 69% and that was slightly less than hydrophilic cream which showed utmost extraction in cream formulations. Among cream formulations with Codonopsis lanceolata extract the cream formulation which has domain that can include water solution of Codonopsis lanceolata extract. As the characteristics of formulation, pack shows fast releasing within time because its formulation is water soluble. Hence, Codonopsis lanceolata extract which separated in water layer is highly hydrophilic substance so it surely shows that it gets great influence of releasing feature in formulation's hydrophile property and solvent availability. According to this experiment great expectations rely on increasing absorption of hydrophilic cream in case of developing cosmetics which including Codonopsis lanceolata extract and there need to be constant research and development. 더덕은 예부터 한방적으로 약리작용이 탁월하다고 알려져 사용해 오고 있다. 주요 구성 성분인 사포닌 성분은 계면활성제로 유화작용, 세정 작용 및 기포 작용 등과 다양한 작용 외에 피부의 각질층을 깨끗하게 하므로 표면조직이 거친 피부에 좋은 향장학적 특성을 보인다. 그러므로 더덕을 이용한 항알러지 항아토피 기능성 향장품에 사용되는 분획은 주로 사포닌을 함유한 층으로 예상되고, 알러지나 아토피 생성에 대한 억제 효과도 매우 클 것으로 기대한다. 또한 화장품 제제로부터 추출물 방출은 효능에 매우 큰 요인이 되고 제형, 용해도, 유제의 입자 크기 물의 함량 등 많은 요인에 의해 영향을 받는다. 본 연구는 더덕추출물을 이용하여 아토피 화장품으로써의 여러 제형을 설계하고 이에 따른 방출 특성을 연구 하였다. 실험은 3%의 더덕추출물을 함유하는 크림제형과 팩제형을 제조하여 Immersion법을 이용하여 자외가시부흡광도계를 이용하여 방출량을 측정하였다. 각 4가지 제형 크림의 방출량을 측정한 결과, 친수성크림, O/W 크림, W/O 크림, 친유성 크림의 순서로 74%, 44%, 24% 18%의 방출량을 나타내었다. W/O 크림의 방출량은 O/W 크림에 비하여 약 절반의 방출량을 나타내었으며 친수성 크림의 방출 양상의 결과, 대체적으로 시간이 지날수록 증가되는 다소 빠른 방출을 보였으며 4시간 이후로 지속적인 방출이 일어날 것으로 추측해본다. 친유성 크림은 더덕추출물이 기제로부터 방출을 하기 위하여 유상을 통과하는 과정이 필요하게 되는데 제형의 차이에 따라 유상이 확산층으로 작용하여 방출을 억제하는 기능을 하였다. 팩제의 방출량 결과, 69%로 크림제형에서 가장 높은 방출량을 보인 친수성 크림보다 조금 낮은 수치를 나타내었다. 더덕추출물이 함유된 크림제제 중에서 더덕 추출물의 수용성을 포함할 수 있는 영역을 가진 크림제제가 방출에 유리하였다. 제형의 특징으로 볼 때 팩제는 기제가 수용성이므로 빠른 시간에 빠른 방출 양상을 보이는 것을 알 수 있었다. 따라서 수층에서 분리한 더덕추출물은 매우 친수성 물질이기 때문에 제형의 친수성 영역 및 용매 이용률에 방출특성이 크게 영향을 받음을 확인하였고 본 실험을 통해 더덕추출물을 함유하는 향장품으로 개발할 경우, 친수성 크림이 흡수가 증대될 것으로 예상하며 꾸준한 연구 개발이 필요하다고 본다.

방사선 유도 면역억제반응에서 버섯추출물의 방호기작

박지혜 전남대학교 2017 국내석사

Gamma (γ)-irradiation에 노출되면 생체구성 조직에 이온화를 일으켜 염증반응, DNA 손상, ROS 과생산 등을 일으켜 세포사멸 및 세포괴사와 같은 세포 손상을 초래한다고 알려져 있다. 높은 강도의 방사선에 노출이 되면 면역세포의 증식과 항원 제시세포인 T cell에 이상이 생겨 자가 면역 질환을 초래한다. 버섯은 현재까지 많은 연구에서 항암, 항바이러스 및 항염증 등 다양한 효과를 지녔다고 알려져 있으나 방사선 방호효과에 대해서는 효과와 기작에 대해서는 보고된 바가 없다. 따라서 본 논문에서는 버섯의 방사선 방호효과에 대해 규명하였다. 본 연구에서는 버섯 추출물이 γ-irradiation의 노출에 의해 생성되는 활성산소를 감소시키는 효과를 지니고 있는지 확인하기 위해, RAW264.7 세포에서 버섯 추출물을 처리한 후 LPS로 유도된 활성산소인 ROS와 NO의 생성량을 측정하였다. 그 결과, 버섯 추출물을 처리한 세포에서 ROS와 NO의 생성량이 감소되었음을 확인할 수 있었다. 생체 내에서의 버섯의 방사선 방호효과에 대해 연구하기 위해 γ-irradiation 마우스 모델을 제작하였다. 먼저 3주간 버섯 추출물을 전 처리한 후 γ-irradiation에 노출시켰다. 그 후 1주간 버섯 추출물을 경구 투여하여 회복기간을 주었다. 총 4주간 버섯 추출물을 경구 투여한 마우스 모델을 희생하고 면역 기관들에서 각 세포들을 분리하여 버섯 추출물의 효과를 조사하였다. 그 결과 γ-irradiation으로 감소되었던 immunoglobulin과 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, B 세포, 자연살해세포 및 대식세포와 같은 다양한 면역 세포들의 population이 대조군과 비교하여 증가되었음을 확인하였다. 또한 비장의 세포에서 세포주기와 세포사멸을 확인한 결과, γ-irradiation에 의해 감소된 세포주기와 증가된 세포사멸이 대조군과 비교하여 정상수준 또는 비슷한 수준으로 회복되었음을 확인할 수 있었다. 그리고 비장 세포에서 cDNA를 합성하여 각 그룹간의 염증 cytokine들의 유전자 발현을 확인한 결과, γ-irradiation으로 인해 증가된 염증 cytokine들이 버섯 추출물에 의해 감소된 것을 확인하였고, γ-irradiation으로 인해 손상된 장 조직 또한 회복된 것을 확인하였다. 이 결과들을 종합하여, 현재까지 규명되지 않은 버섯 추출물의 방사선 방호 및 회복효과를 다양한 면역세포 및 조직에서 입증하였다. 이로써 버섯 추출물이 방사선에 대한 예방물질로 활용될 수 있음을 확인하였다.

황금추출물의 벤조피렌에 의한 지성피부 개선 효과

공규빈 한성대학교 대학원 2022 국내박사

황금추출물에 의한 지성피부 억제효과를 검증하고자 본 연구에서는 ASC(지방유래 줄기세포, Adipose derived Stem Cell)에 황금추출물을 적용한 상태에 벤조피렌으로 유도된 환경에서 지방유래 줄기세포(ASC)에 대한 세포독성도, 황금추출물의 지방유래 줄기세포(ASC)의 세포사멸 실험에 의한 효과, 지성피부 억제효과를 보기위한 황금 추출물에 의한 지방유래 줄기세포(ASC)의 지방분해산물 분석, 황금추출물에 의한 지방합성조절유전자 mRNA발현 등을 측정하였다. 지방유래 줄기세포(ASC)를 대상으로 한 여러 가지 실험에 세포독성평가에서 벤조피렌의 적용량이 25um/ml, 50um/ml로 CC(Cytotoxic Concentration)50이 동일한 값을 나타냈고, 황금추출물 (SBE)은 200ul/ml, 400ul/ml로 CC50에서 동일한 수치를 보였다. 이 후의 지방유래 줄기세포(ASC) 실험에서 벤조피렌의 영향아래서도 황금추출물은 세포사멸 보호효과, 지방분해산물 생성 증가효과, 지방합성조절유전자 mRNA 발현 억제 효과 등을 나타냈다. 인체 피부를 대상으로 10% 황금추출물 에센스를 만들어 피 실험자 20명을 대상으로 피부적용테스트를 진행하여 염증반응개선, 피지완화, 피부만족도, 피부유분의 양을 측정하였다. 자가 설문평가와 이미지 촬영을 통한 평가에서 염증반응 80% 감소, 피지개선 79.4%, 피부만족도 59%정도 증가하고 피부유분의 양이 8.23% 감소되는 좋은 결과를 얻어냈다. 결론적으로 미세먼지, 환경오염 등에 의한, 특히 환경, 식품을 통하여 인체에 영향을 주는 벤조피렌에 의한 지성 피부로 악화 되는 것을 황금추출물을 도포함으로 염증완화, 피지완화, 피부만족도, 피부유분의 양에도 현저한 효과가 있는 것으로 나타났다.

반추위추출물을 이용한 습식발효 완전혼합사료(TMR)가 한우의 생산성에 미치는 영향

김범태 건국대학교 대학원 2013 국내석사

도축장에서 수거되는 도축부산물 중 반추위 미분해 내용물은 대부분 폐기되고 있으나 이러한 도축부산물 중 반추위추출물은 축우의 사료로 이용이 가능하며 일부는 사용되고 있다. 반추위추출물은 하나의 대체 사료자원으로 활용이 가능하며 이는 사료산업과 환경을 보존하는데 도움이 될 수 있다. 이 연구는 반추위추출물을 이용한 습식발효 완전혼합 사료인 TMR이 한우의 생산성에 미치는 영향에 대한 연구이며, 반추위추출물을 한우의 습식발효 TMR 사료 원료로 이용한 사양 실험에서는 사료섭취량, 체중, 일당증체량 그리고 사료전환효율을 알아보았다(개시 체중; 325 ± 50 kg). 44두의 한우를 3개의 실험구로 배치하여 매일 오전 05:30분 그리고 오후 18:30분에 사료를 급여하였으며, 실험구의 구성은 대조구 (반추위추출물 0%), TMR 5 % (반추위추출물 원료 5%) 그리고 TMR 10 % (반추위추출물 원료 10%)로 구성하였고, 실험구마다 각각 14kg의 사료를 배정하여 급여하였다. 실험기간은 151일 (5개월) 동안 진행되었으며 물은 자유급여 시켰다. 실험 결과에 따르면 사료섭취량, 개시, 중간 그리고 최종체중, 일당증체량 및 사료전환효율에서 대조구와 처리구간의 통계상 유의적인 차이는 보이지 않았다. 반추위추출물을 10% 까지 대체하여도 사료섭취량, 일당증체량 그리고 사료전환효율에 부정적인 영향을 미치지 않았으며, 경제성 분석 결과 대조구(기존사료)에 반추위추출물을 원료 10% 대체 시 사료비가 두당 10원/kg 절감하는 것으로 나타났다. 종합해 볼 때 반추위 추출물은 TMR 원료로 이용 가능한 가치 있는 사료자원이며, 이는 환경보전에 기여하고 반추동물의 생산성 향상을 위한 저렴한 대체 사료자원이다. The rumen undigested by-product from the slaughterhouse is almost discarded while it can be used to feed the cattle. The use of rumen extracts as one of the alternative feed help to provide in the feed industry and conserve the environment. This study was conducted to investigate the effects of rumen extracts for fermented TMR (Total Mixed Ration) ingredients on performance of Hanwoo steers. In the experiment (in vivo), effects of fermented TMR 5, 10 % (contained rumen extracts culture medium 5, 10 %) on feed intake, live weight (initial, medium and final), average daily gain (ADG) and feed conversion ratio (FCR) of Hanwoo steers (initial weight; 325 ± 50 kg). Forty four Hanwoo steers divided into three dietary groups with diets were fed at 05:30 and 18:30 daily. Weight of 14kg were assigned into three dietary treatments consisted of control (no rumen extracts), TMR 5 % (5 % of rumen extracts culture medium) and TMR 10 % (10 % of rumen extracts culture medium). Experimental period lasted for 151 days (5months) and the drink was given ad libitum. Summary of results were as follows; feed intake, the initial, medium and final live weight, ADG and FCR did not showed any statistical differences between control and treatments. Rumen extracts addition of up to 10 % did not showed any negative effects on the feed intake, ADG and FCR. In addition, TMR 10 % was exhibited 10won/kg reduction in feeding cost than control group. Thus, rumen extracts can be utilized as valuable TMR ingredients and this method means preserving the environment and extending the feed supplies for ruminant production.

Genotoxicity Test of Indigo Pulverata Levis (Persicaria tinctoria H. Gross) aqueous extracts : 쪽 (청대, Persicaria tinctoria H. Gross) 물 추출물의 유전독성 평가

이원호 대구한의대학교 일반대학원 2015 국내박사

BACKGROUND: Persicariae Rhizoma (PR) is dried stem parts of Persicaria tinctoria H. Gross (Polygonaceae), and has been traditionally used as antiinflammatory and detoxify agent. It is generally known that PR contains two biologically active anti-inflammatory dyes, purple indirubin and blue indigo. Despite extensive work on PR extract bioactivities and it has been revealed that some colorants may be mutagenic and carcinogenic potentials including synthetic indigo, detailed studies on the genotoxicity of PR extract have not been conducted. As part of a safety evaluation, the potential genotoxicity of PR aqueous extract PR extract (yield = 12.0%) contains indigo (0.043%) and indirubin (0.009%) was evaluated using a standard battery of tests (bacterial reverse mutation assay, chromosomal aberrations assay, and mouse micronucleus assay). METHODS: The potential genotoxicity of PR extracts were evaluated using a standard battery of tests according the Guidelines of Korea Food and Drug Administration [Notification No. 2013-121, 2013] including bacterial reverse mutation assay, chromosomal aberrations assay, and mouse micronucleus assay. The potential of PR extract to induce reverse mutations in four histidine auxotroph strains of Salmonella typhimurium and one tryptophan auxotroph strain of Escherichia coli were examined as bacterial reverse mutation assay. The numbers of viable cell counts in overnight cultures, estimated by optical density, were 1.0–1.5 × 109/ml (S. typhimurium strains) and 11.8 × 109/ml (E. coli strain). In addition, PR extract mutagenicity was determined with the chromosome aberration method using cultured Chinese hamster lung cells in the presence and absence of the metabolic activation system, and a micronucleus test was performed to evaluate the mutagenic potential of PR extract using male ICR mice. RESULTS: The PR extract was not genotoxic under the conditions of the reverse mutation assay, chromosomal aberrations assay, or mouse micronucleus assay in this experiment. In a reverse mutation assay using four S. typhimurium strains and one E. coli, PR extract did not increase the number of revertant colonies in any tester strain regardless of metabolic activation by S9 mix, and did not cause chromosomal aberration in short tests with the S9 mix or in the continuous (24 hr) test. Although slight diarrhea signs were restrictedly and transiently detected in three (3/10; 30%) mice treated with PR extract 2,000 mg/kg after first administration, a bone marrow micronucleus test in ICR mice dosed by oral gavage at doses up to 2,000 mg/kg body weight/day showed no significant or dose-dependent increases in the frequency of MNPCEs. CONCLUSION: Taken together, the overall results suggest that the use of PR extract is presently expected to be safe, as anticipated intake is small compared to the doses administered in the genotoxicity assays and may prove to be a useful bioactive agent after further toxicity research. 실험배경 및 목적: 쪽은 마디풀과에 속하는 일년생 초본으로, 주로 푸른색 계열의 식물성 염료인 청대를 추출하기 위해 사용되어 왔으나, 한의학에서는 항염 및 해독의 목적으로도 사용되어 왔다. 쪽에는 항염 및 항산화 효과를 나타내는 식물성 푸른색 계열의 염료인 indigo 와 적자색 계열의 염료인 indirubin 을 함유하고 있다. 현재까지 쪽 추출물의 다양한 생리활성에 대한 연구가 활발하게 진행되어 왔으며, 함성 indigo 가 돌연변이원성 및 발암성과 같은 유전독성을 유발하는 것으로 알려져 있으나, 쪽 추출물 자체의 유전독성에 대한 연구는 진행된 바 없다. 따라서 본 연구에서는 안전성 평가의 일환으로 쪽 물 추출물의 유전독성을 평가하고자 하였다. 실험방법: 본 연구에서는 0.043%의 indigo 와 0.009%의 indirubin 을 함유한 쪽 물 추출물의 유전독성을 식품의약품안전청 고시 제 2013-121 호 “의약품등의 독성시험기준”에 명시되어 있는 세균을 이용한 복귀돌연변이시험, Chinese hamster lung cell (CHL)을 이용한 염색체이상시험 및 마우스 골수세포를 이용한 소핵시험을 통해 평가하고자 하였다. 즉, Salmonella typhimurium 의 히스티딘 요구성 균주인 TA100, TA1535, TA98 및 TA1537 의 4 개 균주와 Escherichia coli 의 트립토판 요구성 균주인 WP2 uvrA 균주를 이용해 대사활성효소계 미적용 및 적용하에 쪽 추출물의 복귀돌연변이 실험을 실시하였으며, CHL 을 이용하여 대사활성계 (S-9 mix) 적용 및 미적용 하에 염색체이상시험을 수행하였고, 수컷 마우스 골수세포에서 소핵 다염적혈구의 출현빈도를 기준으로 한 쪽 추출물의 소핵 유발 가능성을 평가하였다. 결과: 쪽 추출물은 모든 균주에서 대사활성효소계 미적용/적용시 시험물질을 처리한 어떤 농도군에서도 유의성 있는 복귀돌연변이 집락 수의 증가를 유발하지 않았으며, 모든 쪽 추출물 투여군에서 매체 대조군에 비해 유의성 있는 CHL 의 염색체 이상 빈도의 증가가 대사활성계 적용 및 미적용 하에 인정되지 않았다. 한편, 2,000 mg/kg 의 쪽 추출물 초회 투여일에 국한된 경미한 설사 소견이 인정되었으나, 쪽 추출물을 투여한 모든 군에서 매체 대조군에 비해 유의성 있는 소핵 다염적혈구의 빈도 및 PCE/(PCE + NCE)의 비율 변화가 인정되지 않았다. 결론: 이상의 결과에서, 0.043%의 indigo 와 0.009%의 indirubin 을 함유한 쪽 물 추출물은 고용량 처리군에서 경미한 소화관 자극성이 유발되었으나, 복귀돌연변이 시험, 염색체이상시험 및 마우스 골수세포를 이용한 소핵시험에서 유전독성은 유발하지 않는 것으로 관찰되어, 임상적으로 비교적 안전한 물질로 판단된다.

식물추출물과 보조제에 의한 벼와 감나무 주요 병해충에 대한 방제 효과

장세지 순천대학교 대학원 2013 국내석사

1. Effect of plant extracts and emulsifiers on control of rice blast (Pyricularia oryzae) and anthracnose (Colletotrichum coccodes) Currently, agricultural organic materials for controlling diseases and insects in organically produced crops have not been as effective as conventional methods (pesticides) and a number of the agricultural organic materials used are still needed to determine controlling effects on crop diseases and insects. The objective of this research was to determine controlling effects on rice blast (Pyricularia oryzae) and brown plant hopper (Nilaparvata lugens) in rice plants and anthracnose (Colletotrichum coccodes) and two-spotted spider mite (Tetranychus urticae) in persimmon trees by using plant extracts from different extraction methods (water, boiling water, fermentation, and ethanol) from various plant parts (leaves, stems, fruits, and roots) in 48 species from 28 families. The plant species used in this study were selected after considering potential controlling effects on crop diseases and insects by a literature investigation (http://www.rioa.or.kr/rioa/, http://www.hansalim.or.kr/, www.heuk.or.kr, http://www.iloveapple.co.kr/, http://www.organic.or.kr/, http://www.nasaa.com.au/, http://www.gov.pe.ca/agriculture/, http://extension.agron.iastate.edu/organicag/rr.html) and a question investigation of the farm. Controlling effects on the above diseases and insects were also determined by using various emulsifiers. Rice blast was completely suppressed by 3% boiling extracts in Rheum palmatum roots, Camellia spp stems, Pittosporum tobira leaves, and Styrax japonica leaves among 20 plant species from 11 families in the laboratory test. Additionally, in a seedling test rice injury against rice blast was reduced 77%, 62%, and 69% by 3% boiling extracts in Camellia spp stems, Pittosporum tobira leaves, and Styrax japonica leaves, respectively, compared with non-treated controls. Rice blast was 100% suppressed by 5% loess sulfur or 5% Natural emulsifier-B in a laboratory test. The order of effects on suppression of rice blast is loess sulfur > natural emulsifier-B > powder soap > natural emulsifier-A > brown rice vinegar. Rice leaf injury against rice blast in the rice seedling test was reduced 38∼66%, 51∼66%, 66∼75%, and 43∼63% by natural emulsifier-A (1, 5, 10%), loess sulfur (0.5, 1, 3%), brown rice vinegar (0.5, 3, 5%), and natural emulsifier-B (0.5, 1, 3%), respectively, compared with non-treated controls. Synergistic effects on suppression rates of rice blast by combination applications of plant extracts and emulsifiers in a laboratory test occurred in treatments of loess sulfur (0.05%) + Rheum palmatum (0.5%), loess sulfur (0.05%) + Pittosporum tobira leaves (0.1%), loess sulfur (0.05%) +Camellia spp stems (0.75%), and natural emulsifier-B (0.1%) +Rheum palmatum (0.05%), but other treatments did not show any synergistic effects. Rice leaf injury against rice blast was reduced by 67% by combination treatments of extracts of Camellia spp stems + loess sulfur (0.01%) compared with non-treated controls in an organically produced rice field. Rice growth was not reduced by 0.5-3% Rheum palmatum, Camellia spp, Pittosporum tobira, and Styrax japonica extracts and 0.5-10% natural emulsifier-A, loess sulfur, brown rice vinegar, and natural emulsifier-B. Fermentation extracts of Torilis japonica roots and Portulaca oleracea above ground parts, ethanol extracts of Rheum palmatum roots, and Cinnamomum cassia barks among 47 plant species from 27 families were more effective on suppression rate of anthracnose, and anthracnose was over 83% suppressed by 10% of the plant extracts in the laboratory test. Anthracnose was 100% suppressed by 3% brown rice vinegar, 3% powder soap, 5% loess sulfur, and 5% natural emulsifier-B in a laboratory test. The order of effects on suppression of anthracnose is natural emulsifier-B > loess sulfur > powder soap > brown rice vinegar > natural emulsifier-A. Synergistic effects on suppression rate of anthracnose by combination applications of plant extracts and emulsifiers occurred in treatments of natural emulsifier-A (1%) + Torilis japonica (1%), loess sulfur (0.1%) +Torilis japonica (1%), brown rice vinegar (0.1%) +Torilis japonica (1%), brown rice vinegar (0.1%) +Rheum palmatum (1%), powder soap (0.1%) +Portulaca oleracea (1%), brown rice vinegar (0.1%) +Cinnamomum cassia (1%), and powder soap (0.1%) +Cinnamomum cassia (1%), but other treatments did not show any synergistic effects. In the treatment of plant extracts alone, anthracnose was 63% and 51% reduced by 5% fermentation extract of Torilis japonica and 5% ethanol extract of Rheum palmatum, respectively, in an organically produced persimmon tree field. However, in combination treatments of plant extracts and emulsifiers, anthracnose was 79.2%, 67.3%, 62.7% and 55.7% reduced by 5% fermentation extract of Torilis japonica + natural emulsifier-B (1%), 5% fermentation extract of Torilis japonica +loess sulfur (1%), 5% ethanol extract of Rheum palmatum +natural emulsifier-B (1%), and 5% ethanol extract of Rheum palmatum +loess sulfur (1%) compared with non-treated control, respectively, in an organically produced persimmon tree field. Persimmon leaf injuries did not show by treatments of 10% fermentation extract of Torilis japonica, 10% ethanol extract of Rheum palmatum, 5% natural emulsifier-B and 5% loess sulfur. Thus, the plant extracts and emulsifiers may be used for controlling rice blast and anthracnose in organically produced crop fields. 2. Effect of plant extracts and emulsifiers on control of brown plant hopper (Nilaparvata lugens) and two-spotted spider mite (Tetranychus urticae). Brown plant hopper was over 47% controlled by boiling water or fermentation extracts of Polymnia sonchifolia leaves, boiling water extracts of Chrysanthemum zawadskii above ground parts, Angelica gigas roots, and Pittosporum tobira leaves among 26 plant species from 15 families in a green house test. Brown plant hopper was 61% controlled by extract (1%) of Pittosporum tobira leaves + loess sulfur (0.05%) in an organically produced rice field. Boiling water extracts of Chrysanthemum zawadskii, Mentha arvensis, Rehmannia glutinosa, and Coptis japonica among 47 plant species from 28 families were more effective on acaricidal activity oft wo-spotted spider mite, and two-spotted spider mite was 57-75% controlled by 10% of the plant extracts in a laboratory test. Two-spotted spider mite was 100% controlled by 5% power soap and was over 88% controlled by 5% loess sulfur or 5% natural emulsifier-B. The order of effects on acaricidal activity of two-spotted spider mite is powder soap > natural emulsifier-B > loess sulfur > natural emulsifier-A > brown rice vinegar. In combination treatments of plant extracts and emulsifiers, acaricidal activity of two-spotted spider mite was higher in combination application of 5% plant extracts (Chrysanthemum zawadskii, Mentha arvensis, Rehmannia glutinosa, and Coptis japonica) and 1 % emulsifiers (natural emulsifier-B, loess sulfur, powder soap) than plant extract applications alone in a laboratory test. In treatment of plant extracts alone, two-spotted spider mite was 60.4% and 44.0% controlled by 5% extracts of Chrysanthemum zawadskii and Rehmannia glutinosa), respectively, in an organically produced persimmon tree fields. However, in the combination treatments of plant extracts and emulsifiers, two-spotted spider mite was 55.5-77.9% controlled by Chrysanthemum zawadskii extract (5%) +naturalemulsifier-B (1%), Rehmannia glutinosa extract (5%) +natural emulsifier-B (1%), Chrysanthemum zawadskii extract (5%) +powde rsoap(1%), and Rehmannia glutinosa extract (5%) +powder soap (1%) compared with non-treated controls. Persimmon leaf injuries did not show by treatments of 10% ethanol extracts of Chrysanthemum zawadskii and Rehmannia glutinosa, and 5% natural emulsifier-B and powder soap. Thus, the plant extracts and emulsifiers may be used for controlling brown plant hopper and two-spotted spider mite in organically produced crop fields.