Roles of Src-family kinase isoforms, Lyn, Fyn, Fgr, and c-Src on degranulation in RBL-2H3 mast cells

이준호,문세환,고나영,김지완,김도균,김주동,허억,최완수,Lee, Jun-Ho,Mun, Se-Hwan,Ko, Na-Young,Kim, Jie-Wan,Kim, Do-Kyun,Kim, Joo-Dong,Her, Erk,Choi, Wahn-Soo Korean Society of Life Science 2007 생명과학회지 Vol.17 No.3

흰쥐유래의 비만세포인 RBL-2H3 세포는 다양한 Src-family kinase를 발현한다. 현재까지의 연구결과에 의하면 비만세포의 초기 활성화에 Lyn kinase가 중요한 역할을 한다고 알려져 왔다. 그러나 그 세포에서 발현되는 다양한 다른 Src-family kinase의 역할은 불분명하다. 본 연구에서는 비만세포에서 다양한 Src-family kinase가 세포내 다른 곳에서 다양하게 발현되고 있다는 사실을 RT-PCR, immunoblotting 그리고 confocal microscopy 기법을 이용하여 증명하였다. 그 결과 Lyn 및 Fgr kinase는 세포막에 위치하고 c-Src 및 Yes kinase는 세포 내 과립에 존재하는 것을 알 수 있었다. 모든 Src-family kinase를 클로닝하고 과발현하여 탈과립 대한 영향을 평가하였다. 그 결과 fyn과 Fgr kinase는 비만세포에서 항원 유도의 탈과립을 증가시켰으며 반면 Lyn kinsae는 탈과립을 억제시키는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 비만세포 초기 신호전달계에서 Fgr가 중요한 역할을 할 가능성을 제시한다. The rat RBL-2H3 mast cells contain various Src-family kinases. Previous reports with this cell line indicated that Lyn activation is an important initial signaling for the activation of the cells. However, the role and location of other Src-family kinase isoforms which are expressed in the cells are not clear. In this study, we now show that isoforms of Src-family kinases, Lyn, fyn, Fgr, c-Src, and Yes are differentially expressed and located differently in the cells as indicated by RT-PCR, immunoblotting analysis, and confocal microscopy. Lyn and Fgr were located on plasma membrane but on the other hand c-Src and Yes were located on intracellular organelle. All of Src-family kinases were cloned and overexpressed for investigating the roles of the isoforms. Overexpression of Fyn and Fgr, not Lyn and c-Src, stimulated Ag-induced degranulation in the cells. Our findings strongly suggest for the first time that each of Src-family kinase isoform can regulate differentially $Fc{\varepsilon}RI$-mediated signaling in RBL-2H3 mast cells.

Roles of Steroid Receptor Coactivator-3 and TTF-1 in Lung Development and Lung Cancer

Inseok Kwak(곽인석) 한국생명과학회 2015 생명과학회지 Vol.25 No.12

Steroid Receptor Coactivator (SRC)는 스테로이드 수용체 전사 활성화 단백질로, 이중에서 SRC-3는 많은 종류의 종양과 관련하여 연구되었다. 그러나 현재 배아에서의 폐의 분화와 폐암 진행과정에서 SRC-3의 기능적 역할에 대한 연구는 제한적이다. 본 연구는 SRC-3가 생쥐 배아의 폐 분화과정에서 기관지와 폐포의 분화에 중요한 역할을 함을 보여준다. 높은 레벨의 SRC-3 유전자 발현이 클라라 세포와 type II 세포에서 배아발달 말기 시기인 E17.5- E18.5에서 관찰되었으며, 성체 생쥐의 폐에서도 클라라 세포와 type II 세포에서 SRC-3 유전자 발현이 관찰되었다. SRC-3의 폐암에서의 역할을 연구하기 위하여 클라라 세포 특이적 폐암 생쥐 모델을 이용하여 관찰한 결과, SRC-3 잡종 생쥐의 폐와 클라라 세포 특이적 종양 생쥐의 폐에서 TTF-1 유전자와 SRC-3 유전자는 공동 발현되었다. 위 모델에서 TTF-1 유전자 발현은 클라라 세포 유래 종양부위와 다발성 선암 영역에서 선명하게 관찰되었지만, SRC-3 유전자 발현은 다발성 선암 부위에서는 관찰되지 않았다. 이 결과로 SRC-3가 폐암 진행과정 중 침윤성에는 중요한 역할을 수행하지 않음을 확인하였다. SRC-3와 TTF-1의 폐암에서 역할을 클라라 세포 특이적 암 세포주인 mtCC 세포를 사용하여 transient transfection 분석한 결과, TTF-1는 클라라 세포 특이적 단백질인 CCSP 유전자 발현을 현저하게 활성화하였으나, SRC-3는 CCSP 유전자 발현의 활성화에 중요하게 관여하지 않음을 확인하였다. 이 결과는 SRC-3가 폐암 진행에 필수적인 역할을 수행하는 단백질이 아님을 제시한다. 결론적으로, SRC-3는 생쥐 배아와 성체 생쥐에서 기관지와 폐포의 분화에 중요한 역할을 수행하지만, 클라라 세포 유래의 폐암 진행과정에서는 SRC-3는 중요한 역할을 수행하지 않는다. Steroid receptor coactivators (SRC) are transcriptional coactivators. Among SRCs, SRC-3 is the most studied in relation to different types of tumors. However, the role of SRC-3 in early lung development and lung cancer has not been well studied. The expression profiles of SRC-3 showed that SRC-3 contributed to bronchial and alveolar development in embryonic lung development. SRC-3 was strongly expressed in Clara cells and type II alveolar cells during fetal lung development (E17.5- E18.5), and SRC-3 was expressed in both cell types in the adult lung. TTF-1 was expressed in the lungs of heterozygote SRC-3 mice and Clara cell-specific-CCSP-TAg tumor mice, along with SRC-3 expression. The expression of TTF-1 was localized at transformed Clara cells and multifocal adenocarcinomas in lung cancer mice. However, SRC-3 was not expressed in the multifocal adenocarcinomas, suggesting that SRC-3 might not be involved in the invasiveness of lung cancer. Cotransfection of TTF-1 in Clara cell-specific mtCC cell lines resulted in significant activation of CCSP expression. However, cotransfection of SRC-3 had no significant effects on transient transfection. These in vivo and in vitro results suggest that SRC-3 does not play a significant role in lung tumor progression. In conclusion, SRC-3 is involved in bronchial and alveolar development in fetal and adult lungs, but it does not play an important role in the progression of Clara cell-derived lung cancer.

Focal adhesion kinase and src expression in premalignant and malignant skin lesions

( Ju Yeon Choi ),( Jae Yun Lim ),( Han Saem Kim ),( Jung Min ),( Jung In Kim ),( Hyun Min Seo ),( Sang Hyeon Hwang ),( Chong Won Choi ),( Yoon Hwan Kim ),( Jin Hee Sohn ),( Hyunjoo Lee ),( Won Serk Ki 대한피부과학회 2015 대한피부과학회 학술발표대회집 Vol.67 No.2

Background: Focal adhesion kinase (FAK) and Src are non-receptor tyrosine kinases. FAK and Src play a critical role in inducing malignant transformation in tumor cells. Objectives: We performed immunohistochemical staining for total and phosphorylated forms of FAK and Src, to evaluate the role of FAK and Src in the development of premalignant and malignant skin lesions. Methods: A total of 59 facial skin samples (30 actinic keratoses, 10 Bowen``s diseases, 13 squamous cell carcinomas and six perilesional skins) were immunohistochemically stained for Ki-67, total (t) and phosphorylated (p) form of FAK and Src. Methods: A total of 59 facial skin samples (30 actinic keratoses, 10 Bowen``s diseases, 13 squamous cell carcinomas and six perilesional skins) were immunohistochemically stained for Ki-67, total (t) and phosphorylated (p) form of FAK and Src. Results: Cells positive for t-Src, p-Src-y530, t-FAK and pFAK-s722 were detected in premalignant intra-epithelial lesions (PELs) and squamous cell carcinomas (SCCs), but not in the perilesional skin. There was a tendency towards high correlation between Ki-67 and t-FAK or pFAK-s722, suggestive of the active role of FAK in cell proliferation. Conclusion: Our findings of higher t-Src and p-Src-y530 positive cells in PELs, as compared to SCCs (with higher Ki-67 level), are suggestive of the other role of Src in tumor formation and progression, which requires further investigation.

Steroid Receptor Coactivator-3 Promotes Bladder Cancer Through Upregulation of CXCR4

Zhang, Yu,Wang, Ji-Hong,Liu, Bin,Qu, Ping-Bao Asian Pacific Journal of Cancer Prevention 2013 Asian Pacific journal of cancer prevention Vol.14 No.6

The three homologous members of the p160 SRC family (SRC-1, SRC-2 and SRC-3) mediate the transcriptional functions of nuclear receptors and other transcription factors, and are the most studied of all the transcriptional co-activators. Recent work has indicated that the SRC-3 gene is subject to amplification and overexpression in various human cancers. Some of the molecular mechanisms responsible for SRC overexpression, along with the mechanisms by which SRC-3 promotes breast and prostate cancer cell proliferation and survival, have been identified. However, the function of SRC-3 in bladder cancer remains poorly understood. In the present study, our results indicate that overexpression of SRC-3 promotes bladder cancer cell proliferation whereas knockdown of SRC-3 results in inhibition. At the molecular level, we further established that CXCR4 is a transcriptional target of SRC-3. Therefore, our study first identified that SRC-3 plays a critical role in the bladder cancer, which may be a target beneficial for its prevention and treatment.

해성점토층에서 SRC 지반보강에 관한 현장적용성 평가

이승준(Seungjun Lee),이석영(Seogyoung Lee),천병식(Byungsik Chun) 한국지반환경공학회 2013 한국지반환경공학회논문집 Vol.14 No.1

현재 서해안 지역에는 대규모의 항만공사 및 간척사업 등 대규모의 투자와 개발이 집중되고 있는 실정에 있어 연약지반 처리라는 문제점이 큰 이슈가 되고 있다. 그리고 연약지반 보강 시 지반보강을 위한 공법은 사용목적과 지반조건 및 시공여건, 공사비 등을 고려하여 주입공법을 선정해야 하며, 고압분사주입공법 중 SRC공법은 강제 압송 충전시키는 방법으로서 지반의 특성과 무관하게 균질한 강도를 가지는 개량체 조성이 가능하며, Slime 발생량이 적어 환경에 대한 영향을 적게 받는 이점을 가진다. 이에 본 연구에서는 경기도 화성시 전곡리 주변 조석 차가 비교적 큰 서해안 지역의 해성점토층 지반을 대상으로 하여 SRC공법을 시공하여 지반보강 및 현장적용성에 대해 평가하고자 한다. SRC공법 현장적용 결과, 시추작업에 의해 측정된 일축압축강도시험 결과 재령 28일 강도 값이 14,700~31,800kN/m2으로 5,333kN/m2 이상의 설계기준을 모두 만족하였다. 따라서 서해안 해성점토층 지반에 SRC공법을 시공하여 지반보강에 관한 현장적용성의 평가 결과 우수한 강도 값을 나타내었으며, 이는 곧 내구성 또한 뛰어난 것으로 입증된다고 사료된다. Currently, the west coast has focused on large-scale investment and development, such as harbor construction work and land reclamation projects, with soft ground grouting issues being the major concern. In addition, grouting for soft ground reinforcement is definitely considered that construction purpose, soil condition, construction situation, and construction costs. The SRC method, which is a high pressure injection method, can easily produce well-distributed strength regardless of soil characteristics and is environmentally friendly. Therefore in this study, the SRC method was applied to marine clay on the west coast where located Jeongok-ri, Seosin-myeon, Hwaseong-si, Gyeonggi-do, Korea as well as estimated of the ground reinforcement and the application on the site. The results of the application on the site by SRC method indicated age 28 day strength is 14,700~31,800kN/m2 which is satisfied the criterion of unconfined compressive strength that more than 5,333kN/m2. Therefore the result that the SRC method constructed marine clay on the west coast indicated the outstanding strength as well as excellent durability.

고층건물 SRC기둥의 확률론적 기둥축소량 해석 및 보정법

송화철,김형태 대한건축학회지회연합회 2018 대한건축학회연합논문집 Vol.20 No.2

고층건물의 기둥축소량해석을 하는 주된 목적은 시공중 수직부재간 부등축소량을 보정하는 것이다. 특히 SRC기둥의 길이 조정에 의한 보정시 공장에서 선작업을 하기 때문에 일정범위를 초과하는 과대 또는 과소 보정을 하지 않기 위한 조치를 해야 한다. 이 논문에서는 37층 고층건물을 대상으로 하여 SRC기둥의 축소량에 대한 보정 및 재보정 사례를 소개하고 확률론적으로 해석한 결과를 계측 결과와 비교․분석한다. 이를 통하여, 신뢰성기법을 활용한 합성부재인 SRC기둥에 대한 보정법을 제시하고자 한다. 본 연구에서 제시한 SRC기둥의 확률해석법을 이용하여 축소량의 신뢰구간별 상하한치를 제시할 수 있으며 초기 및 시공단계별 보정값을 제시할 때 과대 및 과소 보정을 방지하는데 활용할 수 있다. The main purpose in calculating predicted column shortening of high-rise buildings is to compensate for the differential length changes during construction. In this paper, the compensation and re-compensation method of column shortening is introduced for SRC columns in 37-story high-rise building. The probabilistic column shortenings are compared with the actual shortenings by field measurement and the compensation method of SRC columns using reliability analysis is suggested. In the probabilistic analysis of SRC columns, the shortenings can be presented with the upper and lower values of confidence level. The suggested method can be applied for preventing from overestimating and underestimating of compensation values of initial and under construction stage.

유전적으로 암호화된 FRET 바이오센서를 통한 세포막 하위 도메인의 Src 활성 비교 분석

최규호,장윤관,서정수,김헌수,안상현,김태진 한국생명과학회 2023 생명과학회지 Vol.33 No.2

세포막의 국소 접착부 복합체에 있는 한 구성원으로써 Src은 비수용체 타이로신 인산화효소 중 하나로 세포부착과 세포 이동성을 조절한다. 그러나 extracellular matrix (ECM)의 구성에 따라 세포막 미세영역에서 어떻게 Src 활성이 조절되는지는 여전히 잘 알려져 있지 않다. 본 연구는 유전적으로 암호화된 FRET 기반 세포막 하위 도메인 표적 Src 바이오센서를 이용해서 3개의 각기 다른 대표적 ECM 단백질인 제1형 콜라겐, 피브로넥틴, 라미닌에 따른 Src의 활성도를 비교 및 조사하였다. FRET 기반 바이오센서는 살아있는 세포에서 단백질의 활성을 시공간적 고해상력을 토대로 실시간으로 분석할 수 있게 해준다. 결과적으로 모든 ECM 조건에서 지질유동섬(Lipid raft)에서 높은 Src 활성을 보였고 ECM 조건에 따라 큰 차이를 보이지 않았다. 반면에 비-지질유동섬(non-Lipid raft)에선 낮은 Src 활성을 보였다. 게다가 같은 ECM 조건일 때 지질유동섬에서 비-지질유동섬보다 높은 Src 활성을 보였다. 따라서 본 연구는 Src 활성이 지질유동섬과 비-지질유동섬에 따라 다르게 조절된다는 것을 보여주었다.

Erybraedin A is a potential Src inhibitor that blocks the adhesion and viability of non-small-cell lung cancer cells

Min, Hye-Young,Jung, Yujin,Park, Kwan Hee,Oh, Won Keun,Lee, Ho-Young Elsevier 2018 Biochemical and biophysical research communication Vol.502 No.1

<P><B>Abstract</B></P> <P>The adhesion of cancer cells to the extracellular matrix (ECM) is crucial for cell proliferation, survival, and metastasis. Thus, it is necessary to inhibit cell-ECM adhesion by blocking the activation of the associated signaling to control cancer. Here, we identify erybraedin A (EBA) as a potential Src inhibitor that blocks cell adhesion and viability in non-small-cell lung cancer (NSCLC). EBA significantly inhibited the adhesion of NSCLC cells to fibronectin. EBA also markedly inhibited the activation of Src and its downstream targets, including FAK and Akt. The interaction between integrin β1 or integrin β3 and Src was inhibited by EBA treatment. A docking study revealed the bindings of EBA to the ATP-binding pocket and the allosteric regulatory site of the Src kinase. Additionally, EBA markedly inhibited the viability and the colony formation of NSCLC cells and induced apoptotic cell death. These results describe novel biological properties of EBA, which can block the Src-mediated adhesion and survival of NSCLC cells, suggesting the potential of EBA as an anticancer Src inhibitor that warrants further development in advanced preclinical and clinical settings.</P> <P><B>Highlights</B></P> <P> <UL> <LI> Erybraedin A inhibited the adhesion of lung cancer cells to fibronectin. </LI> <LI> Erybraedin A suppressed the activation of Src and its downstream targets. </LI> <LI> Erybraedin A inhibited the interaction between integrin β1 or integrin β3 and Src. </LI> <LI> Erybraedin A interacted with the ATP-binding pocket and the regulatory site of Src. </LI> <LI> Erybraedin A inhibited the viability of lung cancer cells by inducing apoptosis. </LI> </UL> </P>

Src Redox Regulation: There Is More Than Meets the Eye

Paola Chiarugi 한국분자세포생물학회 2008 Molecules and cells Vol.26 No.4

Src-family kinases are critically involved in the control of cytoskeleton organization and in the generation of integrin-dependent signaling responses, inducing tyrosine phosphorylation of many signaling and cytoskeletal proteins. Activity of the Src family of tyrosine kinases is tightly controlled by inhibitory phosphorylation of a carboxy-terminal tyrosine residue, inducing an inactive conformation through binding with its SH2 domain. Dephosphorylation of C-ter tyrosine, as well as its deletion of substitution with phenylalanine in oncogenic Src kinases, leads to autophosphorylation at a tyrosine in the activation loop, thereby leading to enhanced Src activity. Beside this phophorylation/dephosphorylation circuitry, cysteine oxidation has been recently reported as a further mechanism of enzyme activation. Mounting evidence describes Src activation via its redox regulation as a key outcome in several circumstances, including growth factor and cytokines signaling, integrin-mediated cell adhesion and motility, membrane receptor cross-talk as well in cell transformation and tumor progression. Among the plethora of data involving Src kinase in physiological and pathophysiological processes, this review will give emphasis to the redox component of the regulation of this master kinase.

고온에서 메가 SRC 기둥의 온도특성

황선웅(Sun-Woong Hwang),최병정(Byong-Jeong Choi) 한국산학기술학회 2021 한국산학기술학회논문지 Vol.22 No.12

화재로 인한 초고층건물의 큰 피해를 예방하기 위해 적절한 내화설계를 수행하기 위해서는 선행적으로 온도분포를 정확하게 예측하는 것이 매우 중요하다. 하지만, 초고층건물에서 많이 사용되는 단면크기 1,000 mm × 1,000 mm 이상의 메가(mega) SRC(steel reinforced concrete)기둥의 온도분포에 대한 연구는 진행되고 있지 않다. 따라서 본 연구는 비재하 가열실험을 통해 실제 사용되고 있는 단면크기 1,219 mm × 1,219 mm의 메가 SRC 기둥에 대한 깊이별 온도분포 특성을 도출하였다. 화재실험은 메가 SRC 기둥을 화재시간 1, 2, 3시간에 따라 비재하 가열실험을 수행하여 기둥 중앙 높이에서 최대 깊이 432 mm까지 온도분포를 도출하였다. 또한, 화재실험 실험값은 온도 예측식(Wickström, Kodur), 기준 온도프로파일(Eurocode2, ACI216), 유한요소해석 온도 값과 비교하여 온도특성을 검증하였다. 실험 결과, 깊이 150 mm 이하 구간에서 온도는 급격하게 감소하였으며, 깊이 150 mm 초과구간에서는 열이 균일하게 분포되는 것을 확인할 수 있다. 또한 본 연구를 통해 온도 예측식(Wickström, Kodur)과 기준 온도프로파일(Eurocode2, ACI216)로 도출한 온도 값보다 유한요소해석으로 도출한 온도 값이 실험결과와 가장 유사한 것을 확인하였다. Appropriate fire design is necessary to prevent damage to high-rise buildings due to fire. In addition, it is very important to accurately predict the temperature distribution to carry out fire design accurately. However, studies on the temperature distribution of mega SRC columns with a cross-section of 1,000 mm×1,000 mm or more are not actively conducted. Therefore, through a fire test, this study derived the temperature distribution characteristics by depth for mega SRC columns with a cross-section of 1,219 mm×1,219 mm. As part of the fire test, the temperature distribution was derived from the central height of the column to the maximum depth of 432 mm by heating the mega SRC column according to fire times of 1, 2, and 3 hours, respectively. Also, the temperature characteristics from the fire test were verified by comparing them with the temperature equation, the code temperature profile, and the finite element analysis temperature. The result of the test suggests that the temperature rapidly decreased below a depth of 150 mm, and heat was uniformly distributed at depths more than 150 mm. In addition, it was confirmed that the temperature derived from the finite element analysis was more similar to the test than the temperature derived from the temperature equation and the design temperature profile.