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이온교환 칼럼 크로마토그래피를 이용한 난백에서 Lysozyme의 연속추출
박성준,김현석,김현위,안태회,박기문,최춘언,Park, Seong-Joon,Kim, Hyeon-Seok,Kim, Hyean-Wee,Ahn, Tae-Hoe,Park, Ki-Moon,Choi, Chun-Un 한국식품과학회 1990 한국식품과학회지 Vol.22 No.6
식품 및 의약품 원료로 이용되고 있는 Iysozyme을 난백으로부터 이온교환 크로마토그래프를 이용하여 연속추출하였다. 사용된 수지는 지금까지 수율, 순도, 작동용이성에서 가장 효과적이라고 밝혀져 있는 Duolite C-464 양이온교환수지를 선택하여 $Na^+$형으로 $pH\;7.9{\pm}0.1$로 평형화하여 사용하였다. 조제용 자동 Liquid Chromatography(LC) system(column size ; i.d. 50 mm, bed volumn ; 1020 ml)에서 수지 평형화, 난백접촉, rinse, lysozyme용출 순으로 cycle을 연속적으로 반복하면서 시행하고 그 재현성을 관찰하기 위해 각 cycle별 rinse끝점과 용출끝점의 UV level을 비교하였다. 그 결과 rinse끝점은 19 cycle까지 30% 이하를 유지하였다. 용출 끝점은 17 cycle까지는 30% 이하에서 비교적 안정하였으나 18 cycle 이후 부터는 50% 이상으로 용출능력이 현저하게 감소하였다. 또한, 회수율 비교에서 17cycle까지는 90% 이상을 유지하다가 18cycle에서는 72%, 19 cycle에서는 65%로 격감하였다. 본 추출 정제 lysozyme은 전기영동상 단일 band로 나타났고, densitometer로 측정한 순도는 99% 이상이었다. Continuous column chromatographic separation of lysozyme from egg white was investigated. A weak acid type cation exchange resin, Duolite C-464, was used because of high lysozyme recovery and ease of column operation in this experiment. The resin was equilibrated at $pH\;7.9{\pm}0.1$ in Na+form. Continuous lysozyme separation was processed by repeating cycles(one cycle : resin equilibration, flow egg white, rinse, lysozyme elution) in automated preparative Liquid Chromatography(LC) system(column size ; i.d. 50 mm, resin bed volumn ; 1020 ml). At comparison of UV levels in rinse end point and elution end point of every cycle, the UV levels of rinse end point are maintained below 30% for 19 cycles and that of elution end point are also maintained below 30% for 17 cycles, stably, but was increased above 50% after 18 cycle. That indicated the eluting ability of lysozyme was reduced conspicuously after 18 cycle in continuous cycling process. The recovery of lysozyme was maintained above 90% from one to 17 cycle, but was decreased to 72% and 65% in 18 cycle and 19 cycle, respectively.
Bacillus subtilis LY - 353이 생산하는 Protease의 정제 및 특성
이병우(Byung-Woo Lee),유영선(Young-Sun You),임근형(Geun-Hyung Im),최춘언(Chun-Un Choi) 한국식품영양과학회 1991 한국식품영양과학회지 Vol.20 No.1
젓갈에서 protease 생성균주 Bacillus subtilis LY-353균주를 분리, 동정하였다. LY-353균주의 효소생산에 대한 최적 배양 조건은 온도 35℃, pH 7.5, salt 농도 1.0%였으며, 산업용 배지를 사용하여 50ℓ 발효조에서 7시간 배양하였을때 최고의 활성을 나타내었다. 정제과정으로 7.33배 정제되었으며 수율은 6.55%이었다. 정제된 효소액은 전기영동으로 단일 band를 확인할 수 있었으며, 효소활성에 필요한 온도와 pH는 각각 55℃와 7.5이었다. The Bacillus subtilis LY-353, which secretes the protease isolated from seafoods. The optimum culture condition for production of protease from B. subtilis LY-353 was as follows; temperature 35℃, pH 7.5, salt concentration 1.0%. The purification steps involved ammonium sulfate fractionation, DEAE-Sephadex A-50 column chromatography, and Sephadex G-100 gel filtration. A 7.33 fold purification and 6.55 yield of protease was obtained from culture broth. The optimum pH and temperature for the enzyme action were pH 7.5 and 55℃ respectively.