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돼지 $\beta$-Casein 유전자의 3' 말단 부위의 cis-Acting Element가 유선 상피 세포내의 발현에 미치는 영향
이휘철,김병주,변승준,이승훈,김민지,정희경,이현기,조수진,장원경,박진기,이풍연,Lee, Hwi-Cheul,Kim, Byoung-Ju,Byun, Sung-June,Lee, Seung-Hoon,Kim, Min-Ji,Chung, Hee Kyoung,Lee, Hyun-Gi,Jo, Su-Jin,Chang, Won-Kyong,Park, Jin-Ki,Lee, Poong 한국동물번식학회 2008 Reproductive & developmental biology Vol.32 No.3
Tissue-specific and temporal regulation of milk protein gene expression is advantageous when creating transgenic animal that produces foreign protein into milk. Gene expression, i.e. protein production, is regulated not only by promoter strength but also mRNA stability. Especially, poly A tail length by polyadenylation affects in vivo and in vitro mRNA stability and translation efficiency of the target gene. In the present study, nucleotide sequence of 3'-UTR was analyzed to evaluate the effects of mRNA stability on the target gene expression. Based on the poly A signal of 3' -untranslated region (UTR), nucleotide sequences of putative cytoplasmic polyadenylation elements (CPEs) and downstream elements (DSEs: U-rich, G-rich, GU-rich) were analyzed and used to construct 15 luciferase reporter vectors. Each vector was transfected to HC11 and porcine mammary gland cell (PMGC) and measured for dual luciferase expression levels after 48 hours of incubation. Luciferase expression was significantly higher in construct #6 (with CPE 2, 3 and DSE 1 of exon 9) and #11 (with CPE 2, 3 and DSE 1, 2 and 3 of exon 9) than construct #1 in the PMGC. These results suggest that expression of target genes in PMGC may be effectively expressed by using the construct #6 and #11 on production of transgenic pig. 형질 전환 동물 생산에는 조직 및 시기 특이적 발현 조절이 가능하다는 장점 때문에 유즙 내로 외부 유전자를 발현시키는 시스템이 널리 이용되고 있다. 유전자 발현 즉, 단백질 생산은 프로모터의 강도뿐만 아니라 mRNA의 안정성에 의해서도 조절된다. 특히, polyadenylation에 의한 poly A의 길이는 in vivo와 올 in vitro에서 mRNA 안정성 및 목적 유전자의 번역효율에 영향을 준다. 본 연구에서는 이러한 mRNA 안정성이 목적 유전자의 발현에 미치는 영향을 알아보기 위해 3'-UTR 염기 서열을 분석하였다. 이 3'-untranslated region(UTR) 내의 poly A signal을 기준으로 putative cytoplasmic polyadenylation element(CPE) 부위와 downstream elements(DSE: U-rich, G-rich, GU-rich)의 염기 서열을 분석하고, 각각의 element를 기준으로 15 종의 luciferase reporter vector를 제작하여, 생쥐 유선 세포주(HC11)와 돼지 유선 세포주(PMGC)에 각각 transfection시킨 후 48시간 동안 배양하고 luciferase 발현량을 분석하였다. PMGC의 경우, luciferase의 발현은 exon 9의 CPE 2,3 및 DSE 1을 포함한 #6 construct에서 유의적으로 높은 발현량을 보였으며, exon 9의 CPE 2, 3과 DSE를 모두 포함하고 있는 #11 construct에서도 유의적으로 높은 발현량을 보였다. 이러한 결과는 형질 전환 돼지 생산에 있어 #6 및 11 construct의 사용은 목적의 유전자를 효과적으로 발현시키는데 기여할 것으로 사료된다.
돼지 β-Casein 유전자의 3’ 말단 부위의 cis-Acting Element가 유선 상피 세포내의 발현에 미치는 영향
이휘철,변승준,이승훈,김민지,정희경,이현기,조수진,장원경,박진기,이풍연,김병주 사단법인 한국동물생명공학회 2008 Reproductive & developmental biology Vol.32 No.3
Tissue-specific and temporal regulation of milk protein gene expression is advantageous when creating transgenic animal that produces foreign protein into milk. Gene expression, i.e. protein production, is regulated not only by promoter strength but also mRNA stability. Especially, poly A tail length by polyadenylation affects in vivo and in vitro mRNA stability and translation efficiency of the target gene. In the present study, nucleotide sequence of 3’-UTR was analyzed to evaluate the effects of mRNA stability on the target gene expression. Based on the poly A signal of 3’-untranslated region (UTR), nucleotide sequences of putative cytoplasmic polyadenylation elements (CPEs) and downstream elements (DSEs: U-rich, G-rich, GU-rich) were analyzed and used to construct 15 luciferase reporter vectors. Each vector was transfected to HC11 and porcine mammary gland cell (PMGC) and measured for dual luciferase expression levels after 48 hours of incubation. Luciferase expression was significantly higher in construct #6 (with CPE 2, 3 and DSE 1 of exon 9) and #11 (with CPE 2, 3 and DSE 1, 2 and 3 of exon 9) than construct #1 in the PMGC. These results suggest that expression of target genes in PMGC may be effectively expressed by using the construct #6 and #11 on production of transgenic pig.
조직구성원의 상향영향력과 승진가능성의 관계에서 상사의 리더십, 구성원의 역할 및 직무/조직특성의 조절효과 검증
이휘철,Hwi-Chull Lee 대한리더십학회 2012 리더십연구 Vol.3 No.1
본 연구는 구성원들의 상향 영향력 스타일과 조직유효성의 관계에 있어 상황변 수들의 조절효과를 실증적으로 검증하기 위해서 실시되었다. 구체적으로, 합리적 설득, 환심, 감성적 호소, 정당화 등 구성원들이 사용하는 네 가지 상향영향력 전술이 상사가 평가하는 부하의 승진가능성에 미치는 직접효과를 검증하고, 상사의 리더십 스타일, 역할모호성, 직무 자율성, 조직의 공식화 등의 변수들의 조절효과를 테스트 하였다. 가설검증을 위해서, 124개 조직의 816명을 대상으로 팀장, 팀원 A, 팀원 B 등 세 원천(source of data)을 한 세트로 하여 설문조사를 실시하여 분석한 결과, 부하들의 네 가지 상향 영향력 스타일은 상사가 평가하는 승진가능성에 모두 정(+)의 영향을 미치는 것으로 나타났다. 또한 상사의 지원적 리더십은 환심, 승진 가능성에, 지시적 리더십은 정당화와 승진 가능성에 정(+)의 조절효과가 있는 것으로 밝혀졌다. 합리적 설득과 승진가능성의 관계에서 공식화와 직무의 자율성은 정(+)의 조절효과 를, 역할모호성은 부(-)의 조절효과를 보였다. 아울러 환심과 승진가능성의 관계에서 있어서는, 공식화는 부(-)의 조절효과를, 역할모호성은 정(+)의 조절효과를 나타냈다. 이론적, 실무적 함의와 연구의 한계 및 향후의 연구과제를 논의하였다. The present study was conducted to empirically investigate the moderating effects of various situational variables on the relations between members’ upward influence tacts and influence effectiveness. Specifically, we have chosen four upward influence tactics such as rational persuasion, ingratiation, inspirational appeal, and legitimating, and tested their effects on members’ promotability evaluated by their superiors. In addition, the moderating effects of superiors’ leadership styles, role ambiguity, job autonomy, and organizational formality were tested on the relations between upward influence and promotability. In an effort to overcome common method variance, a survey was performed with 816 respondents from 124 firms in such a manner that team leader, team member A, and member B as a set respond for promotability, upward influence, and moderating variables respectively. The results of the study showed that all four influence tactics have positive effects on superior-rated promotability and that superiors’ supportive leadership moderates the relationship between ingratiation and promotability, directive leadership moderating between legitimating and promotability. It was also found that formalization and autonomy positively moderate the relations between rationality and promotability, role ambiguity negatively moderating between the two variables. In terms of ingratiation-promotability, formalization showed negative moderating effects, while role ambiguity revealing positive effects. Implications of the study results have been discussed along with limitations and future research directions.