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Caffeine과 Acetaminophen으로 인한 간독성과 항산화성 비타민의 효과
옥현이(Hyun-Ee Ok),노숙령(Sook-Nyung Rho),이재관(Jae-Gwan Lee) 한국식품영양과학회 1997 한국식품영양과학회지 Vol.26 No.6
간세포에서 caffeine과 APAP의 독성 효과를 알아보기 위해 in vitro 에서 suspension culture 방법을 이용하였고 간독성의 지표로 glutathione, malondialdehyde를 측정하였다. 또 monolayer culture에서 hepatocyte morphology를 관찰하였으며 위의 두가지 성분과 함께 항산화성 비타민인 α-tocopherol, β-carotene, ascorbic acid를 투여해 본 결과는 다음과 같았다. 체외배양된 hepatocyte에서 caffeine과 APAP를 각각 투여하였을 때 caffeine만으로는 MDA생성과 GSH고갈이 대조군과 비슷하고 APAP는 농도에 따라 세포내 GSH함량을 감소시키나 MDA생성에 있어서는 대조군과 뚜렷한 차이를 보이지 않았다. 그러나 caffeine과 APAP를 함께 투여하면 caffeine과 APAP의 농도가 증가할수록 GSH 함량은 유의적으로 감소하고 MDA생성은 상당히 증가하여 동시 투여가 단독 투여보다 간세포에 더 큰 손상을 끼치는 것으로 여겨진다. Caffeine과 acetaminophen으로 인한 간세포의 손상정도를 광학현미경으로 관찰해 본 결과 acetaminophen의 농도가 증가할수록 미립이 많이 형성되어 세포막의 통합성이 떨어지는 것으로 볼 수 있었고 vit E 5μM을 첨가하였을 때는 이러한 현상이 감소함을 알 수 있었다. 그리고 caffeine과 APAP의 동시 투여로 간독성을 유발할 수 있는 상황에 비타민인 α-tocopherol, β-carotene, ascorbic acid를 첨가하였을 때 이들 모두 항산화제로서 간세포를 보호하였고 α-tocopherol이 더 효율적으로 GSH의 고갈을 억제하였다. Hepatotoxicity of caffeine and acetaminophen was investigated in this study. Special attention was paid to the effect of vitamins on the reduction of hepatotoxicity caused by the chemicals. Rat hepatocytes isolated by two-step perfusion method were cultured in two different methods-suspension, monolayer cultures-, and exposed to caffeine and/or acetaminophen for 24hrs. Caffeine or acetaminophen exhibited no significant hepatotoxicity in terms of intracellular glutathione(GSH) level and lipid peroxidation(MDA), but GSH level was significantly decreased after administrated acetaminophen, and the toxicity caused by the chemicals showed a dose-dependent manner. The synergistic effect of caffeine and acetaminophen was observed when both caffeine and acetaminophen were supplemented to culture medium. At the concentration 1mM, caffeine enhanced the intracellular GSH depletion and MDA formation by 63% and 64%, respectively, compared to single supplementation of 10mM acetaminophen in culture medium. This hepatotoxicity induced membrane integrity loss was observed by lightmicroscope on the simultaneous administration of caffeine and acetaminophen in monolayer cultured hepatocytes. Co-supplementation of vitamins with caffeine/acetaminophen to culture medium results in the protection of hepatocytes from hepatotoxic attach by caffeine/acetaminophen. Especially, vitamin E was superior to vitamin C and β-carotene from the standpoints of GSH depletion and MDA formation. From this results, it has been speculated that vitamin E may play a role of antioxidant scavenging radicals produced from acetaminophen. Taken all together, in vitro culture system like monolayer culture of hepatocytes may be a useful tool for the evaluation of hepatotoxicity or protection ability of food ingredients.
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밀에서 HPLC에 의한 데옥시니발레놀 분석의 측정불확도 산정
옥현이(Hyun Ee Ok),장현주(Hyun-Joo Chang),안장혁(Jang-Hyuk Ahn),조재용(Jae-Young Cho),전향숙(Hyang Sook Chun) 한국식품과학회 2009 한국식품과학회지 Vol.41 No.3
본 연구에서는 밀 시료에서 면역친화컬럼을 이용한 HPLC분석법으로 데옥시니발레놀을 분석함에 있어서 발생될 수 있는 측정 불확도를 GUM 지침에 따라 산정하였다. 분석과정에서의 불확도 요인은 시료량 측정, 최종 시료부피, 보관표준용액, 작업표준용액, 표준용액, 기기, 매질, 검량선 작성으로 구분하였다. 불확도 요인의 구성요인은 저울의 안정성, 분해능, 재현성, 표준물질의 순도, 분자량, 농도, 표준용액 희석, 검량선, 회수율 및 분석기기의 재현성 등이 작용하였다. 공시료에 데옥시니발레놀 300 μg/kg을 첨가하여 분석한 결과 255.29±71.62 μg/kg으로 측정되었다. 확장불확도는 합성표준불확도 35.81 μg/kg에 포함인자(k=2, 신뢰수준 95%)를 곱하여 산출하였다. 밀에서 데옥시니발레놀을 분석함에 있어 불확도에 영향을 주는 주요인자는 시료의 회수율과 검량선 작성인 것으로 파악되었다. 따라서 밀 시료에서 데옥시니발레놀 분석의 정밀성을 높이기 위해서는 회수율과 검량선 작성에 영향을 끼칠 수 있는 면역친화컬럼에 의한 시료의 정제과정과 표준물질의 희석과정에 주의를 기울이고 주기적으로 마이크로피펫을 교정하는 등 세심한 관리가 필요할 것으로 판단된다. The principal objective of this study was to estimate the measurement uncertainty associated with determination of deoxynivalenol (DON), a mycotoxin generated by Fusarium strain, in food. In service of this goal, wheat as a food matrix was analyzed via high performance liquid chromatography-ultraviolet (HPLC-UV) detection using an immunoaffinity column for clean-up. The uncertainty sources in the measurement process were identified by sample weight, final volume, and sample concentration in extraction volume with components including standard stock solution, working standard solution, 5 standard solutions, calibration curve, matrix, and instrument. The expanded uncertainty for DON at a concentration of 300 μg/kg was estimated as 71.62 μg/kg using a coverage factor of two, which provides a confidence level of approximately 95%. The most influential component in the uncertainty sources was the recovery of the wheat matrix, followed by the calibration curve. These results indicate that all efforts may be directed toward reducing the uncertainties of the recovery of the wheat matrix and the calibration curve to obtain a reliable HPLC-UV method for DON analysis in wheat.
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