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세균속간 시데로포아 생산능의 비교에 Chrome azurol S 한천배지 확산법의 응용
배영훈,박라영,신성희 朝鮮大學校 附設 醫學硏究所 2005 The Medical Journal of Chosun University Vol.30 No.2
연구배경 : 세균이 생산하는 시데로포아를 정량적으로 측정하기 위한 새로운 측정법인 chrome azurol S 한천배지 확산법(CASAD)이 저자들에 의해 개발되었다. 본 연구에서는 이 CASAD 법이 세균속간 시데로포아 생산을 비교하는 데에도 사용될 수 있는지를 알아보고자 하였다. 방법: Staphvlococcus aureus, Staphylococcus eptdermidis, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Vibrio vulnificus 균을 철을 제거한배지에 트렌스페린을 철공급원으로 공급한 배지에서 배양하면서 세균들의 증식은 파장 600 nm에서 흡광도를 측정하여 관찰하고 시데로포아 생산능은 CASAD법을 이용하여 관찰하였다. 트렌스페린으로부터 철을 획득하는 능력을비교하기 위하여 6 M urea를 함유하는 전기영동법을 사용하였다. 결과: 세균속간 시데로포아 생산능에는 큰 차이가 있었다. S. aureus, S. epidermidis, E. coli, P. aeruginosa는 B. cereus, B. subtilis, V. vulnificus체 비해 더 많은 양의 시데로포아를 생산할 수 있었고 트렌스페린으로부터 철을 더 효율적으로 획득할 수 있었으며 트렌스페린이 첨가된 배지에서 더 잘 자랄 수 있었다. 시데로포아 생산능과 트렌스페린으로부터 철을 획득하는 능력에는 밀접한 상관관계가 있었다. 결론: 본 연구를 통해 저자들은 CASAD법이 세균속간 시데로포아 생산능을 비교하는데에도 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있었다. Background: We recently developed a new chrome azurol S agar diffusion (CASAD) assay for the quantitative analysis of siderophore production. This study was designed to evaluate the usefulness of the CASAD assay for the comparison of the ability to produce siderophore among different genera of bacteria. Materials and Methods: Strains of Staphy lococctis aureus, Staphylococcus epidermidis, Bacillus cereus, Bacilhis subtilis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, and Vibrio vulniftctis were used. The bacteria were cultured in deferrated heart infusion broth containing transferrin at 37℃ for 24 hours. During the cultures, Bacterial growth was measured by OD_(600), siderophore production was measured by CASAD assay, and iron-removal from transferrin was measured by 6 M urea-gel electrophoresis. Results: There was a big difference in the ability of the bacteria to produce siderophores. S. aureus, S. epidermidis, E. coli, and P. aeruginosa produced larger amounts of siderophores than B. cereus, B. subtilis, and V. vulnificus. S. aureus. S. epidermidis, E. coli, and P. aeruginosa utilized more efficiently transferrin-bound iron than B. cereus, B. subtilis, and V. vulnificus. The ability of the bacteria to produce siderophores was consistent with the ability of the bacteria to grow on transferrin-bound iron and to uptake iron from human transferrin. Conclusion: Through this study, we found that the CASAD assay is a useful universal method that can be applied for the intergeneric comparison of the ability to produce siderophores.
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