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Detection of Bifidobacteria by α - galactosidase activity
민해기,이시경,강국희 한국농화학회 1993 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.36 No.3
This method using the synthesis substrate of 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-α-galactoside (X-α-Gal) was examined for the differential enumeration of Bifidobacteria and lactic acid-producing bacteria. Bifidobacteria possess a high level of α-galactosidase activity. Biffdobacterium longum KCTC 3215 exhibited the highest α-galactosidase specific activity (8.57 units/㎎ protein). Determination of α-galactosidase activity using the PNPG procedure showed that Lactobacillus, Streptococcus, Pediococcus, and Leuconostoc strain had lower α-galactosidase activity as compared to Bifidobacteria. The X-α-Gal based medium is useful to identify Bifidobacteria among lactic acid-producing bacteria since the enzyme action of α-glactosidase spilts X-α-Gal substrate and releases indol which impacts a blue color to Bifidobacterial colonies on agar plates. All strains of Bifidobacteria appeared as blue colonies on MRS agar medium supplemented with 100 μM X-α-Gal while colonies of other lactic acid-producing bacteria appeared white or light blue.
Streptococcus thermophilus SKD 1006의 β-Galactosidase 유전자 구조
민해기,강국희,성문희 成均館大學校 科學技術硏究所 1992 論文集 Vol.43 No.2
The results can be concluded that the pSK 001 contains a gene for β-gal from Str. thermophilus SKD 1006, and expressed in E. coli JM 109. A 4.2 Kb of Hpa II-Hpa II fragment(lac Z of SKD 1006) of pSK 001 was subcloned into the corresponding site of pUC 19, and named pSK 002. A 1.2 Kb of Bgl II -Bgl II fragment of pSK 002 was ligated into the corresponding site of pUC 19, and named pSK 003. The nucleotide sequences of two portions(222bp close to 5' , 143 by close to 3' end) of Bgl II -Bgl II fragment of pSK 003 were determined by Sanger, Chen and Seeburg methods. The nucleotide sequences are identical to those of the gene for β-gal of Str. thermophilus A 054.
제한효소 처리된 Genomic DNA에 의한 Polymerase Chain Reaction 증폭 효율에 관한 연구
민해기,장영효,Min Hae-Ki,Chang Young-Hyo 한국미생물학회 2004 미생물학회지 Vol.40 No.3
Polymerase chain reaction (PCR) is a powerful tool for precisely amplifying selected DNA sequences that have had a broad impact on genomic studies. When examining human $\alpha$- and $\beta$- tryptase genes which have 95% DNA homology, inconsistent PCR amplification of genomic sequences hampered our progress. This study suggests that long PCR technique on the original DNA digested with restriction enzymes improves both efficiency and sensitivity of PCR. These improved results seem to derived from the effective denaturation of the original genomic DNA template or reduction of formation of secondary structures that block either primer annealing or extension in PCR. Elimination of homo- or hetero-duplex products derived from highly homologous genes provides an additional advantage in this study. This communication describes how the use of restriction enzymes improved these efficiencies, and also facilitated studies of highly homologous genes including tryptase genes.
젖산생성균의 .betha.-galactosidase의 생화학 및 분자생물학적 특성
민해기 한국미생물학회 1993 微生物과 産業 Vol.19 No.1
젖산생성균의 .betha.-gal의 생성과 Bif. longum KCTC 3215에 의한 .betha.-gal 생산, 정제 및 특성에 관한 연구와 젖산생성균의 .betha.-gal 유전자의 클로닝 및 대장균에의 발현과 Str.thermophilus SKD 1006의 Lac Z 유전자를 비교 분석하였다.
복압성요실금의 정량적 평가를 위한 진단 알고리즘에 관한 연구
민해기,노시철,최흥호,Min, Hae-Ki,Noh, Si-Cheol,Choi, Heung-Ho 한국전기전자학회 2008 전기전자학회논문지 Vol.12 No.2
골반저근은 골반기관을 지지하여 요자제를 유지하는 여성의 주요 하부조직으로 수축압력을 평가함으로써 복압성 요실금의 정도를 진단할 수 있다. 본 연구에서는 생체신호 측정 시스템을 개발하여 골반저근의 수축압력을 측정하였으며, 데이터 분석을 통하여 진단 파라메터를 추출하였다. 진단 파라메터의 통계적 분석을 수행하여 특성이 유사한 피험자를 다섯 개의 군집으로 분류하였으며, 군집으로 분류된 데이터가 중첩되지 않도록 복압성요실금 진단 알고리즘을 구현하였다. 임상시험 결과 진단 알고리즘의 정확성이 약 78.9%로 나타났으며 그 유용성이 확인되었다. Pelvic floor muscle is the main subsystem that maintains urinary continence. It is possible to diagnose the degree of the stress urinary incontinence(SUI) by evaluating the contraction pressure of the pelvic floor muscle. Bio-signal measurement system was developed to measure the contraction pressure. Diagnostic parameters were drawn out by analyzing the measured data. Statistical evaluations were done to classify the all subjects with five groups each has similar characteristics. SUI diagnostic algorithm was implemented to each group separately. The accuracy of the algorithm was about 78.9% and utility was confirmed by clinical trial.
The Study of a Diagnostic Algorithm for the Quantitative Evaluation of Stress Urinary Incontinence
민해기,김주영,노시철,최흥호,Min, Hae Ki,Kim, Ju Young,Noh, Si Cheol,Choi, Heung Ho The Korean Society of Radiology 2018 한국방사선학회 논문지 Vol.12 No.2
골반저근은 골반기관을 지지하는 기능을 가지고 있으며 요자제를 유지하는 여성의 주요 하부조직이다. 골반저근의 약화는 복압성 요실금의 원인이 되는데, 이러한 골반저근의 기능 정도는 복압성 요실금의 병증정도를 평가하는 지표로 사용될 수 있다. 이에 본 연구에서는 골반저근의 수축 압력을 측정하여 복압성 요실금의 병적 진행정도를 정량적으로 진단할 수 있는 요실금 진단 알고리즘을 제안하였다. 이를 위하여 골반저근의 수축압력 정보를 측정할 수 있는 시스템을 제작하였으며, 측정된 데이터의 특징 분석을 위한 측정 프로토콜을 제안하였다. 복압성 요실금 환자로부터 획득한 데이터를 이용하여 5개의 진단 파라미터를 추출하였으며, 이를 이용한 진단 알고리즘을 구현하였다. 임상시험을 통하여 진단 알고리즘의 정확성을 평가한 결과 80%의 정확성을 보였으며, 20%의 위양성 진단 결과를 보였다. 반면에 위음성 진단 결과는 확인되지 않았다. 본 연구에서 제안한 요실금 진단 알고리즘은 복압성 요실금의 병적 진행 정도를 정량적으로 진단할 수 있으며, 요실금 진단 시스템 개발에 활용될 수 있을 것으로 판단된다. Pelvic floor muscle is the main sub-system that maintains urinary continence. The weakness of pelvic floor muscles causes the stress urinary incontinence, and therefore the degree of functioning of pelvic floor muscles could be used as an index to assess the degree of stress urinary incontinence. In this study, the quantitative diagnosis algorithm was proposed to estimate the degree of stress urinary incontinence (SUI) by measuring the contraction pressure of pelvic floor muscle. For these reason, the contraction pressure measurement system from pelvic floor muscle was developed, and the measuring protocol was suggested to analysis the obtained data. As the results of clinical test, the proposed diagnosis algorithm shows the 80% of accuracy, and 20% of false positive diagnosis. On the other hand, false negative results were not confirmed. Consequentially, we thought that the proposed urinary incontinence diagnosis algorithm can quantitatively diagnose the progression of the stress urinary incontinence and it can be used for the development of the incontinence diagnosis system.
Pediococcus halophilus로부터 생성한 α-Glucosidase의 정제 및 특성
민해기,이호근,문지웅,강국희 한국산업미생물학회 1992 한국미생물·생명공학회지 Vol.20 No.2
호화전분이 포함된 김치로부터 유산을 생성하는 6균주를 분리하였으며, 분리된 균주는 soluble starch가 포함된 APT 액체배지에서 분리균의 생육과 α-glucosidase 활력이 우수한 No.2 균주를 선별하였다. 이 분리균은 Pediococcus halophilus 또는 그 유연균으로 동정되었다. 효소의 정제는 protamine sulfate에 의한 핵산의 제거, ammonium sulfate 분획, gel filtration 및 ion exchange 등의 4단계 정제과정을 거친 결과 20.17배 정제되어 단일 band 효소로 분리되었다. 정제효소의 최적 활성온도는 37℃, 최적 pH는 6.0이었고 금속이온과 저해제에 대한 효소의 활성은 Mg^2+에 의해 촉진되는 반면. 10mM mercaptoehanol과 EDTA 등에 의해 저해되었다. 합성기질인 PNPG에 대한 K_m은 0.52 mM/27.5 ㎍ protein, V_max=0.021 mM/min 27.5㎍ protein이었으며, 효소의 분자량은 약 37,000이었다. A bacterial strain No.2, which highly produced β-glucosidase, was isolated from Kimchi and identified to be a similar species of Pediococcus halophilus. This enzyme was purified by protamine sulfate, ammonium sulfate fractionation, ion exchange and gel filtration. The maximal α-glucosidase activity was observed at pH 6.0 and this enzyme was stable at pH 6.O∼7.5. The optimum temperature of this enzyme activity was 37℃, but enzyme activity was gradually lost above 37℃. This enzyme was activated by 10 mM MgCl_2 and inhibited by 10 mM mercaptoethanol. The kinetics of PNPG(p-Nitrophenyl-α-D-glucopyranoside) and maltose were K_m=0.52 mM/27.5 ㎎ Protein, V_max=0.021 mM/min 27.5 ㎍ protein and K_m=0.32 mM/27.5 ㎍ protein, V_max=0.025 mM/min 27.5 ㎍ protein, respectively. The molecular weight of α-glucosidase was about 37,000.