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장독성 대장균 eKT - 53 균주의 내열성 장독소 정제
도대홍(Dea-Hong Do),김교창(Kyo-Chang Kim),김도영(Do-Young Kim) 한국식품영양과학회 1992 한국식품영양과학회지 Vol.21 No.1
장독성대장균은 영유아설사 및 여행자설사의 주요한 원인균의 하나로서 이들이 생산하는 내열성장독소는 설사 유발 원인물질로 이들 생산균주는 비병원성 대장균과 비교하여 검정할 수 있다. 본 실험에서는 이러한 내열성장독소를 순수정제하였다. 저자들이 보고한 바 있는 형질전환균주 eKT-53을 사용하여 10L의 succinate salts 배지에 배양한 배양액을 30,000g로 원심분리하여 조 ST 용액을 사용하여 몇 단계의 정제과정을 통하여 정제하였다. 즉 Amberlite XAD-2 chromatography, DEAE-Sephacel anion exchange chromatography, Bio-Gel P-6 gel filtration, Polyacrylamide slab gel 전기영동을 통하여 정제하고 장독소의 정제도 및 장독소의 생물학적 최소단위량을 조사하였다. 최종적으로 정제되어진 ST는 조 ST 용액에 비해 113배 더 정제되었고 회수율은 11%였다. 또한 생물학적 최소단위량이 2.8ng이였고 SDS-polyacrylamide disc gel상에서 단일 band를 나타내어 거의 순수정제된 것으로 보이며 면역을 위한 항원으로 이용할 수 있을 것으로 생각된다. Enterotoxigenic E. coli is one of the major causative agents of the infantile diarrhea and traveler's diarrhea. The heat-stable enterotoxin (ST) is thought to be a virulence factor in the pathogenesis of the diarrhea and to be a maker for identification of the enterotoxigenic E. coli from non pathogenic E. coli. ST producing E. coli KM-7 strain was isolated from the swine and molecular cloning of ST gene of KM-7 strain. Transformant eKT-53 (ST^+, LT^-) was selected by infant mouse assay (IMA). The culture supernatant of eKT-53 strain was performed purification by multipled steps. The culture supernatant (crude ST) was purified by seqaentially applying batch adsorption chromatography on Amberlite XAD.2 resin, ion exchange chromatography on DEAE-Sephacel anion exchanger, gel filtration chromatography on Bio-Gel P-6 and preparative polyacrylamide slab gel electrophoresis. About 113-fold purification was achieved with a yield of about 11% of crude ST and the minimum effective dose(MED) of this purified ST was about 2.8ng in IMA. Homogeneity of purified ST was demonstrated by showing a single band in analytical SDS polyacrylamide disc gel electrophoresis.
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채소연부병균 Erwinia rhapontici에 대한 Pseudomonas sp.의 생물학적 억제
김교창(Kyo-Chang Kim),김도영(Do-Young Kim),도대홍(Dea-Hong Do) 한국식품영양과학회 1994 한국식품영양과학회지 Vol.23 No.1
과채류 등의 부패균이 Erwinia rhapontici의 생육을 억제하는 길항균을 경작지 표토층으로 부터 우수한 억제력을 갖는 S43과 S62 균주를 최종 선발하고 API 20NE kit를 이용하여 Pseudomonas 근연종으로 동정하였다. 523증식용 배지상에서 배양조건에 따른 억제력 변화를 조사한 결과 배양초기 pH를 7.0으로 조정하고 25~30℃에서 3일간 배양했을때 가장 높은 억제력을 나타내었다. 분리한 길항균은 토양에 질소, 인산, 카리성분 비료를 첨가함으로서 병원균에 대한 생육 억제력을 비료를 첨가하지 않은 토양에 비하여 약 40~50% 증가시킬 수 있었다. For selection of powerful antagonistic bacteria for biological control of soil borne Erwinia rhapontici causing rot of the vegetable and fruit, excellent strains(S43, S62) were selected from rhizospere in vegetable root rot suppresive soil. 5elected strains were identified to be Pseudomonas sp. with ApI 20NE kit tests. Optimum culture condition for the maximum production of antagonistic substance was determined, when isolate was cultured in 523 synthetic broth media at pH 7.0 and 30 during 3 days. Antagonistic substance productivity of isolated Pseudomonas sp. (S43, S62) in the fertilizer soil were increased to about 40~50% compared to that in the non fertilizer soil.
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