http://chineseinput.net/에서 pinyin(병음)방식으로 중국어를 변환할 수 있습니다.
변환된 중국어를 복사하여 사용하시면 됩니다.
Southern Hybridization에 의한 Biphenyl 및 4-Chlorobiphenyl 분해유전자들의 상동성 분석
남정현,김치경,이재구,이길재 한국산업미생물학회 1994 한국미생물·생명공학회지 Vol.22 No.1
Biphenyl 및 4-chlorobiphenyl을 분해하는 자연계 분리균주인 Pseudomonas sp. DJ-12, P08, P27, P1242외에 P. pseudoalcaligenes KF707과 P. putida OU83 균주들에 대하여 분해유전자들 사이의 상동성은 DNA hybridization 방법으로 조사하였다. pcbABCD를 DNA probe로 하여 각 균주의 genomic DNA에 대한 hybridization 결과, Pseudomonas sp. DJ-12, P08, P27의 균주군과 P20, P1242의 균주군으로 구분되었으며, KF707 균주는 DJ-12 균주군과 hybridization은 일어났으나 제한효소 인식부위가 상이하였다. Psedomonas sp. DJ-12에서 cloning된 pCU1의 pcbAB 유전자는 P. pseudoalcaligenes KF707에서 cloning된 pKTF20의 bphAB와 상동성이 높게 나타났으나, C 유전자 사이에는 상동성이 없었다. 그리고 pKTF20의 bphABC와 P. putida OU83에서 cloning된 pAW6194의 cbpACB 사이에는 상동성이 높게 나타났으나, pCU1의 pcbABCD와 pAW6194의 cbpADCB 사이에는 상동성이 없었다. The homology among the genes coding for degradation of biphenyl(BP) and 4-chlorobiphenyl(4CB) was comparatively analyzed by Southern hybridization in several BP/4CB degrading bacterial strains. As the hybridization results of their genomic DNAs with pcbABCD as the DNA probe, the group of Pseudomonas sp. DJ-12, P08 and P27 strain was separated by the group of P20 and P1242 strains. The P. pseudoalcaligenes KF707 showed the hybridization signal which was homologous to the group of DJ-12, but they had different restriction endonuclease sites. The pcbAB genes in pCU1 recombinant plasmid from Pseudomonas sp. DJ-12 appeared to be homologous to bphAB genes in pKTF20 cloned from P. pseudoalcaligenes KF707, but the C genes in both strains were not homologous. The bphABC in pKTF20 showed the signals homologous to the cbpACB in pAW6194 cloned from P. putida OU83, but homologous signal was not found between the pchABCD genes in pCU1 and the cbpADCB genes in pAW6194 recombinant plasmid.
4-Chlorobiphenyl을 분해하는 Pseudomonas sp. P20의 pcb 유전자군의 클로닝
남정현,김치경 한국산업미생물학회 1994 한국미생물·생명공학회지 Vol.22 No.4
Pseudomonas sp. P2O은 난분해성 방향족 탄화수소중의 한가지인 4-chlorobiphenyl(4CB)을 meta-cleavage를 거쳐 4-chlorobenzoic acid로 분해하는 세균이다. 이 세균의 chromosomal DNA로부터 14 kb의 EcoRI 절편을 pBluescript SK(+) vector를 이용하여 E. coli XL1-Blue에 클로닝하여 4CB 분해유전자를 포함하는 재조합 plasmid인 pCK1과 재조합균주인 E. coli CK1을 얻었다. E. coli CK1은 pcbAB 산물에 의하여 4CB를 분해하고 또 pcbCD 산물에 의하여 2,3-dihydroxybiphenyl(2,3-DHBP)을 분해하여 meta-clevage compound(MCP)와 benzoate를 생성하는 것을 resting cell assay에 의하여 확인하였다. pcbC의 발현은 Pseudomonas sp. P20과 재조합균주인 E. coli CK1에서 모두 지수말기에 가장 잘 되었으며, E. coli CK1에서 pcbC 유전자의 산물인 2,3-DHBP dioxygenase 활성은 Pseudomonas sp. P20에 비하여 2배 이상 높았다. 또 2,3-DHBP dioxygenase는 catechol과 3-methylcatechol을 기질로 했을 때 2,3-DHBP에 비하여 26∼31%의 활성을 나타내었으며, 4-methylcatechol과 4-chlorocatechol에 대해서는 활성이 없었다. Pseudomonas sp. P2O was a bacterial isolate which has the ability to degrade 4-chlorobiphenyl(4CB) to 4-chlorobenzoic acid via the process of meta-cleavage. The recombinant plasmid pCK1 was constructed by inserting the 14-kb EcoRI fragment of the chromosomal DNA containing the 4CB-degrading genes into the vector pBluescript SK(+). Subsequently, E. coli XL1-Blue was transformed with the hybrid plasmid producing the recombinant E. coli CK1. The recombinant cells degraded 4CB and 2,3-dihydroxybiphenyl(2,3-DHBP) by the pcbAB and pcbCD gene products, respectively. The pcbC gene was expressed most abundantly at the late exponential phase in E. coli CK1 as well as in Pseudomonas sp. P2O, and the level of the pcbC gene product, 2,3-DHBP dioxygenase, expressed in E. coli CK1 was about two-times higher than in Pseudomonas sp. P2O. The activities of 2,3-DHBP dioxygenase on catechol and 3-methylcatechol were about 26 to 31% of its activity on 2,3-DHBP, but the enzyme did not reveal any activities on 4-methylcatechol and 4-chlorocatechol.