Helicobacter pylori 감염 AGS 세포에서의 NF-κB 활성화와 세포고사

추상희 연세대학교 대학원 2003 국내박사

Helicobacter pylori (H. pylori) causes gastric epithelial cell damage. But thorough investigations into H. pylori-induced apoptosis and subsequent molecular mechanisms are rare. The present study examined the role of NF-κB in H. pylori-induced apoptosis in human gastric epithelial cells. To investigate the relationship between NF-κB and apoptosis, human gastric epithelial cells (AGS) were treated with antisense ODN for NF-κB p50 (AS ODN) subunit or were transfected with a mutated IκB-a gene (MAD-3 mutant). AGS cells were stimulated with H. pylori (NCTC11637) in antibiotic-free culture medium for 24 hr (bacterium:cell, 300:1). Apoptosis was determined by cell counting, quantification of DNA fragmentation, and Hoechst staining. As apoptotic indices, expression of p53, bax and bcl-2 were examined using Western blotting and RT-PCR analysis. As a result, H. pylori induced apoptosis, accompanied with the increase of p53 and bax and decrease of bcl-2. H. pylori-induced apoptosis was inhibited in the cells treated with AS ODN or transfected with a mutated IκB-a gene, while apoptosis was shown in the cells treated with sense ODN of NF-κB p50 subunit (S ODN) or transfected with a control vector (pcDNA-3), by H. pylori. H. pylori-induced alterations of p53, bax and bcl-2 were inhibited in the cells treated with AS ODN or transfected with a mutated IκB-a gene. Moreover, overexpression of bcl-2 attenuated H. pylori-induced apoptosis. These results suggest that H. pylori induces apoptosis in gastric epithelial cells through activation of NF-κB, mediating regulation of p53, bax and bcl-2. Helicobacter pylori (H. pylori)는 비침습성, 그람 음성, 미호기성(microaerophilic) 세균으로, 위염, 소화성 궤양, 위 림프종, 위암의 중요한 원인균으로 여겨지고 있다. 그러나 H. pylori의 질병유발기전에서 위 상피 세포와 상호작용을 통한 위 상피 세포고사와 그에 따른 분자생물학적인 기전에 대해서는 아직 명확하게 밝혀져 있지 않다. 본 연구에서는 H. pylori 에 의한 위 상피 세포고사에서 중요한 역할을 하는 것으로 추정되는 NF-κB의 역할을 밝히고자 하였다. 실험 재료로는 인간 위상피 세포주인 AGS를 사용하였으며, NF-κB와 세포고사의 관계를 규명하기 위해 AGS 세포에 NF-κB 아형인 p50에 대한 안티센스 (antisense)를 처리하거나, 돌연변이 IκB-a 유전자를 도입하였다. AGS 세포를 항생제가 없는 배양액에서 H. pylori (NCTC11637, 세균:세포, 300:1)와 24시간 동안 배양한 후, 세포 수 측정, DNA 분절 정량화, Hoechst 염색법으로 세포고사를 측정하였다. 또 다른 지표로 p53, bax, bcl-2의 발현을 역전사중합연쇄법 (RT-PCR)과 웨스턴 블럿법 (Western blotting)으로 측정하였다. 그 결과 H. pylori는 p53과 bax의 증가, bcl-2의 감소를 동반하여 세포고사를 유도함을 관찰할 수 있었다. H. pylori로 유도된 세포고사는 안티센스를 처리하거나, 또는 돌연변이 IκB-a유전자를 도입한 경우 억제된 반면, 센스를 처리하거나, 또는 대조 유전자를 도입한 경우 세포고사가 유도되었다. H. pylori에 의한 p53, bax, bcl-2의 변동도 안티센스를 처리하거나, 또는 돌연변이 IκB-a 유전자 도입으로 억제되었다. 더 나아가 bcl-2 유전자를 과발현 시킴으로 H. pylori로 유도된 세포고사가 감소됨을 확인할 수 있었다. 이상의 결과들을 종합하여 보면 H. pylori는 위 상피

Effect of glycochenodeoxycholic acid on cell death in primary cultured rat hepatocytes : role of oxygen free radical = 일차배양 흰쥐 간세포의 세포사멸에 미치는 Glycochenodeoxycholic acid의 효과 : 산소유리기의 역할

추상희 이화여자대학교 대학원 1999 국내박사

연구배경 및 목적: 담즙정체는 많은 간질환에서 나타나는 공통적인 특징이다. 간세포내 담즙의 정체는 담즙정체성 간질환의 병인과 많은 관련이 있을 것으로 여겨진다. 담즙정체성 간질환이 진행되는 것을 막는 새로운 치료법을 개발하기 위해서는 담즙정체가 간손상을 일으키는 세부기전을 면밀히 이해하는 것이 필요하다. 따라서 본 연구에서는 담즙산으로 유도된 일차배양 흰쥐 간세포의 세포사멸에 있어서 산소유리기의 역할을 조사하고자 하였다. 연구방법: 소수성 담즙산인Glycocheno-deoxycholic acid (GCDC)를 사용하여 세포사멸을 유도하였다. 담즙산으로 유도된 세포사멸 양상을 조사하기 위해서는 acridineorange/ethidium bromide염색, 전자현미경 관찰을 실시하여 형태학적인 변화를 평가하였다. 산소유리기의 생성은 dichlorofluorescin (DCF)을 사용하여 측정하였고, 산소유리기의 역할은 지질의 과산화 정도, 세포내 GSH 농도, NF- _k B의 활성을 측정하여 평가하였다. 결과: GCDC는 농도의존적으로 세포고사를 유도하였는데 이는 acridine orange/ethidiumbromide의 차등적인 흡수와 형태학적인 특징으로 알 수 있었다. 그러나 고농도에서는 GCDC가 세포괴사를 주로 유발하였다. GCDC로 유도된 세포사멸에서 산소유리기는 농도의존적으로 증가하였다. 그리고 이러한 산소유리기의 생성은 지질과산화의 증가, 세포내 GSH 농도 감소와 함께 농도의존적으로 일어났다. 또한 NF-_K B의 활성이 관찰되었다. 결론: GCDC로 유도된 세포사멸은 세포괴사 뿐만 아니라 세포고사에 의해서도 일어날 수 있다. 또한 간세포에서 GCDC로 유도된 세포사멸에는 NF-_K B 경로 활성을 통해 산소유리기가 중요한 역할을 할 것으로 여겨진다. 그리고 이러한 연구결과들은 담즙정체성 간질환에서 사용되는 항산화제의 치료적인 가치를 평가하는데 중요한 열쇠가 될 것으로 사료된다. BACKGROUND & AMS: Cholestasis, the impairment of bile flow, is the common feature of many liver diseases. Intracellular accumulation of bile acids in the hepatocytes during cholestasis is thought to be pathogenic in cholestatic liver diseases. For development of new treatments to retard the progress of cholestasis, a thorough understanding of the underlying mechanisms by which cholestasis leads to liver injury is necessary. Thus the objective of this study was to determine the role of oxygen free radical in bile acid-induced cell death using primary cultured rat hepatocytes. METHODS: Glycochenodeoxycholic acid (GCDC), a hydrophobic bile acid, was used to induce cell death. To study bile acid-induced cell death, morphological alterations were evaluated by acridine orange/ethidium bromide staining and by an electronmicroscope. The generation of oxygen free radical was measured using dichlorofluorescin (DCF). The role of oxygen free radical was evaluated by measurement of lipid peroxidation, determination of intracellular glutathione (GSH) concentration and activation of nuclear factor kappa B (NF-κB). RESULTS : GCDC induced-apoptosis, as indicated by differential uptake of acridine orange/ethidium bromide and by morphologic features increased with concentration. However at the highest concentration, GCDC induced necrosis dominantly. Oxygen free radical increased dose-dependently in GCDC-induced cell death. And this generation of oxygen free radical were also accompanied by increased lipid peroxidation and decreased GSH in a dose-dependent manner. And the activation of NF-κB was observed. CONCLUSIONS: GCDC-induced cell death in heaptocytes may occur by apoptosis as well as necrosis. And oxygen free radical may play a pivotal role in GCDC-induced cell death in hepatocytes through NF-κB pathway. And these results may be a key to evaluate the therapeutic values of antioxidants in cholestatic liver diseases.

윤이상의 ‘Garak für Flöte und Klavier(1963)' 분석연구

추상희 중앙대학교 대학원 2010 국내석사

본 논문은 ‘한국이 낳은 세계적인 작곡가’ 윤이상의 작품 중 ‘Garak für Flöte und Klavier(1963)’의 분석 연구를 통해 윤이상의 독자적인 음악어법과 전통음악에 현대적 작곡 기법을 융합시킨 작품을 통하여 그가 형상화하고자 했던 음악적 세계관에 대해 고찰하고자 한다. 윤이상은 특히 플루트라는 악기가 자신의 음악에 빛을 더해주기에 더할 나위 없이 적합한 악기라고 말할정도로 플루트 곡에 많은 애착을 가지고 있었다. 특히 ‘Garak für Flöte und Klavier(1963)’는 그의 제 2창작기인 1963년에 쓰여진 작품으로 그만의 작곡기법인 ‘주요음(Hauptton)’이 작품에서 직접적으로 한국적 색채를 표현하는데 중요한 요소로 작용하였으며, 현대적 작곡기법을 통한 전통음악의 표현에 윤이상의 동아시아적인 세계관이 그의 음악 안에서 자연스럽게 흡수되어 전체적인 하나의 큰 흐름을 만들어 나가는 것을 보여주고 있다. 본 논문에서는 윤이상의 생애와 작품세계를 살펴본 후, 작품의 전반적인 이해를 돕기 위해 그만의 독창적인 주요작곡기법과 작품에 나타난 음악적 요소와 특징을 알아보고, 작품에 사용된 현대적 연주 기법과 작품 ‘Garak für Flöte und Klavier(1963)’을 연구 하였다. 본 연구는 윤이상 플루트 작품 속에 나타난 음악적 세계관과 작품에 대한 이해를 돕고, 더욱 나아가 플루트 연주자들이 윤이상의 작품 연주에 도움이 되고자 하는 바이다. This research plans to examine the musical world view which I-Sang Yun, ‘a Korean-born world-class composer’, intended to express through his unique musical idioms and his works that combined modern compositional techniques with traditional music by analyzing one of his pieces: ‘Garak für Flöte und Klavier(1963)’. Especially, I-Sang Yun had great affection on flute pieces so he said that flute was the most proper instrument to enhance the brilliance to his pieces. Particulary, for ‘Garak für Flöte und Klavier(1963)’, written in his 2nd production period, shows how Hauptton functioned as a core element to describe Korean color. ‘Garak für Flöte und Klavier(1963)’, written in his 2nd production period, Hauptton expresses traditional Korean atmosphere, particulary. Modern composition technique(Hauptton) of his modern composition technique and the recreation traditional music and East Asian world view rveal a gigantic flow of his unique music. This research contains the study of his life and music world. Also, it explores his compositional techniques and musical character in ‘Garak für Flöte und Klavier(1963)’. Finally, it researches contemporary performance techniques in the work. This research intends to help flutists perform works of I-Sang Yun through understanding his philosophy and musical idioms in his works.

관현악 전공생들의 전공선택요인·진로준비행동·진로결정수준 분석

추상희 중앙대학교 대학원 2020 국내박사

본 연구의 목적은 관현악 전공생들을 대상(n=514)으로 자신들이 음악대학에서 관현악을 전공으로 선택한 요인과 졸업 후 진로를 위한 준비행동, 그리고 진로결정수준을 측정하여 관현악 전공생들에게 졸업 후 진로지도에 유용한 정보를 제공하는 것이다. 본 연구의 결과는 다음과 같다. 첫째, 관현악 전공생들의 전공선택에 가장 큰 요인으로 흥미와 재미, 연주하는 것이 좋아서와 같은 요인은 관현악 전공선택에 있어 개인의 내적 요인들이 크게 작용하는 것으로 나타난 반면, 전공의 발전가능성(수입, 취업, 진로의 보장), 언론매체(인터넷, 신문, 잡지)의 영향 등이 하위요인으로 나타나 관현악 전공생들이 전공을 선택할 때, 실제 진로와 연관되는 현실적인 요인들은 크게 고려하지 않는 것으로 나타났다. 둘째, 관현악 전공생들의 진로준비행동의 가장 큰 요인으로는 친구들과 대화와 부모님과 상담이 높은 요인으로 나타난 반면 전문가와 상담 또는 직업관련 적성검사와 같은 요인은 진로준비행동의 하위요인으로 나타나 관현악 전공생들의 전문적인 진로 지도가 시급한 것을 보여주고 있다. 셋째, 관현악 전공생들의 진로결정수준을 측정한 결과 고등학생과 대학생 1학년이 가장 높게 나타났으며, 졸업생, 4학년, 3학년, 2학년의 순으로 나타났다. 이러한 결과는 고등학생과 대학생 1학년은 진로에 대한 어려움을 인식하지 못하는 시기로 점차 학년이 올라감에 있어 현실을 파악하고 진로에 대해 어려움을 인식하는 것으로 사료된다. 넷째, 관현악 전공생들 중 진로결정 여부와 진로준비행동, 진로결정수준, 연주경험, 악기시작나이, 그리고 전공만족도는 유의수준 .05에서 통계상 유의미한 차이가 있는 것으로 나타났다. 이러한 사실을 통해 알 수 있는 것은 관현악 전공생이 진로결정을 일찍 할 수 있도록 교사나 부모 그리고 학교의 진로전문가들이 도와주는 시스템이 필요하다는 것이다. 다섯째, 관현악 전공학생들의 진로변경여부에 따른 전공만족도의 차이에 대하여 두 독립표본 t 검정을 실시한 결과, 유의수준 .05에서 전공을 변경하지 않은 관현악 전공생들의 전공만족도가 변경한 전공생들의 전공만족도 보다 통계상 유의미하게 높은 것으로 나타났다. 여섯째, 관현악 전공생들의 진로에 대한 전반적인 인식을 알아보기 위해 몇 가지 개방형 질문을 던진 결과, 관현악 전공생들은 전공을 변경하는 중요한 이유로 현실에 부딪힌 목표, 연주자 자리의 포화상태, 연주실력 부족, 직업의 불안정성 등을 언급해 학생들은 보다 현실적이고 실현 가능한 방면으로 진로 목표를 변경하고 있는 것으로 나타났으며, 진로준비행동을 하고 있지 않은 이유도 미래에 대한 두려움(진로에 대한 불확신), 무엇을 할지 결정하지 못함, 자신감 부족 등의 요인들을 들어 진로변경과 같이 진로에 대한 현실적 어려움에 기인하고 있는 것으로 나타났다. 일곱째, 본 연구에서는 위에 언급한 양적 연구결과 외에, 관현악 전공생들 중 고등학생, 대학생, 그리고 졸업생 중 소수의 인원을 대상으로 전공선택요인, 진로준비행동, 그리고 진로결정수준에 대한 인터뷰를 시행하였는데, 전반적인 내용은 양적 연구결과와 크게 다르지 않았다. 여덟째, 관현악 전공생들의 진로결정수준과 관련한 인터뷰 결과, 관현악 전공생들은 연주자로 성공하기 어려운 현실과 직업의 불안정성으로 진로를 결정하지 못하거나 진로를 포기하는 경우가 많았으며, 오케스트라에 단원으로 활동하거나 유학 후 대학에서 강의를 하는 경우도 진로에 대한 고민을 심각하게 하는 것으로 나타났다. 본 연구결과가 관현악 전공생들의 진로문제를 해결하는데 도움이 되길 바란다. The purpose of this study was to analyze the factors that influenced the career choice, career preparation behavior, and career decision level of instrumental majors(n=514) in Korea. The participants were 514 instrumental majors who enrolled in 2 art high schools, 21 colleges of music, and 9 orchestras in nation-wide throughout Seoul and Jeju. The results of this study were as following. First, the reason to choose an instrumental major was to enjoy playing instruments which means it was from their intrinsic choice instead of practical factors such as job security. Second, in terms of career preparation behavior, majority of participants focused on conversation with friends or patents instead of consulting an expert on their career preparation. Third, there was no difference between high schoolers and freshmen of college on the level of career decision for the musical instrumentalists, but that of the career decision tended to reduce as years go by. The implication of this result was that high schoolers and freshmen did not notice the difficulties of getting secure job while the higher graders recognized the crisis of job security gradually. Fourth, there was a statisticall significance on career decision-making, career preparation behavior, career decision-making level, playing experience, the age to start musical instrument, and the satisfaction level of their major among the instrumental majors. The implication of these results indicated that it is necessary for instrumental major to build a system with teachers, parents, and career professionals to make career decisions early. Fifth, there was a statisticall significance on the satisfaction level of instrumental major depends on their career changes. Sixth, the results of open-ended questions indicated that instrumental majors were changing their career goals in a more realistic and feasible way because they realized difficulties to be professional musicians and unstable for job security. Seventh, the results of interview indicated that there was no difference on the quantitative results about career choices, career preparation behaviors, and career decision-making levels. Eighth, the qualitative data indicated that the musical instrumentalists, even successful musicians, tended to be undecidable or to gave up their goals as musical instrumentalists because of the limitation of job opportunities as musicians.

Helicobacter pylori induces apoptosis via NF-κB activation in human gastric AGS cells : Helicobacter pylori 감염 AGS 세포에서의 NF-κB 활성화와 세포고사

추상희 Graduate School, Yonsei University 2003 국내박사

Helicobacter pylori (H. pylori)는 비침습성, 그람 음성, 미호기성(microaerophilic) 세균으로, 위염, 소화성 궤양, 위 림프종, 위암의 중요한 원인균으로 여겨지고 있다. 그러나 H. pylori의 질병유발기전에서 위 상피 세포와 상호작용을 통한 위 상피 세포고사와 그에 따른 분자생물학적인 기전에 대해서는 아직 명확하게 밝혀져 있지 않다. 본 연구에서는 H. pylori 에 의한 위 상피 세포고사에서 중요한 역할을 하는 것으로 추정되는 NF-κ B의 역할을 밝히고자 하였다. 실험 재료로는 인간 위상피 세포주인 AGS를 사용하였으며, NF-κ B와 세포고사의 관계를 규명하기 위해 AGS 세포에 NF-κ B 아형인 p50에 대한 안티센스 (antisense)를 처리하거나, 돌연변이 IκBα 유전자를 도입하였다. AGS 세포를 항생제가 없는 배양액에서 H. pylori (NCTC11637, 세균:세포, 300:1)와 24시간 동안 배양한 후, 세포 수 측정, DNA 분절 정량화, Hoechst 염색법으로 세포고사를 측정하였다. 또 다른 지표로 p53, bax, bcl-2의 발현을 역전사중합연쇄법 (RT-PCR)과 웨스턴 블럿법 (Western blotting)으로 측정하였다. 그 결과 H. pylori는 p53과 bax의 증가, bcl-2의 감소를 동반하여 세포고사를 유도함을 관찰할 수 있었다. H. pylori로 유도된 세포고사는 안티센스를 처리하거나, 또는 돌연변이 IκBα 유전자를 도입한 경우 억제된 반면, 센스를 처리하거나, 또는 대조 유전자를 도입한 경우 세포고사가 유도되었다. H. pylori에 의한 p53, bax, bcl-2의 변동도 안티센스를 처리하거나, 또는 돌연변이 Iκ B-α 유전자 도입으로 억제되었다. 더 나아가 bcl-2 유전자를 과발현 시킴으로 H. pylori로 유도된 세포고사가 감소됨을 확인할 수 있었다. 이상의 결과들을 종합하여 보면 H. pylori는 위 상피 세포에서 NF-κ B를 활성화시키고, p53, bax, bcl-2의 조절을 매개하여 세포고사를 유도한다고 생각한다. Helicobacter pylori (H. pylori) causes gastric epithelial cell damage. But thorough investigations into H. pylori-induced apoptosis and subsequent molecular mechanisms are rare. The present study examined the role of NF-κB in H. pylori-induced apoptosis in human gastric epithelial cells. To investigate the relationship between NF-κB and apoptosis, human gastric epithelial cells (AGS) were treated with antisense ODN for NF-κB p50 (AS ODN) subunit or were transfected with a mutated IκBα gene (MAD-3 mutant). AGS cells were stimulated with H. pylori (NCTC11637) in antibiotic-free culture medium for 24 hr (bacterium:cell, 300:1). Apoptosis was determined by cell counting, quantification of DNA fragmentation, and Hoechst staining. As apoptotic indices, expression of p53, bax and bcl-2 were examined using Western blotting and RT-PCR analysis. As a result, H. pylori induced apoptosis, accompanied with the increase of p53 and bax and decrease of bcl-2. H. pylori-induced apoptosis was inhibited in the cells treated with AS ODN or transfected with a mutated IκBα gene, while apoptosis was shown in the cells treated with sense ODN of NF-κB p50 subunit (S ODN) or transfected with a control vector (pcDNA-3), by H. pylori. H. pylori-induced alterations of p53, bax and bcl-2 were inhibited in the cells treated with AS ODN or transfected with a mutated IκBα gene. Moreover, overexpression of bcl-2 attenuated H. pylori-induced apoptosis. These results suggest that H. pylori induces apoptosis in gastric epithelial cells through activation of NF-κB, mediating regulation of p53, bax and bcl-2.