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      • Antioxidant Treatment during Somatic Cell Nuclear Transfer Procedures and Subsequent Embryonic Development and DNA Methylation Status of Cloned Bovine Embryos

        이성영 강원대학교 대학원 2013 국내석사

        RANK : 247631

        The present study was conducted to investigate the effect of antioxidant treatment during the somatic cell nuclear transfer (SCNT) procedures on the in vitro development and DNA methylation status of bovine SCNT embryos. Bovine in vitro matured (IVM) oocytes were enucleated and electrofused with a donor cell, then activated by a combination of Ca-ionophore and 6-dimethylaminopurine (6-DMAP) culture for 3 h. The recipient oocytes or reconstituted oocytes were treated with antioxidants of 25 μM β-mercaptoethanol (β-ME), 50 μM L-ascorbic acid (Vit. C) or 50 μM L-glutathione (GSH) during these SCNT procedures from enucleation to activation treatment. In vitro fertilization (IVF) was performed for external control. The SCNT and IVF embryos were cultured in CR1aa containing 3 mg/ml BSA for 2 days and then cultured in CR1aa containing 10% FBS for 5 days at 39℃, 5% CO2 in air to evaluate the in vitro development, apoptosis and DNA methylation in blastocysts. The apoptosis was measured by TUNEL assay and caspase-3 activity assay. Methylated DNA of SCNT embryos and IVF embryos at the blastocyst stage was detected using a 5-methylcytidine (5-MeC) antibody. There were no significant differences between control (74.9±2.7%) and antioxidant treatment groups, and among treatment groups in the cleavage rate (71.9±3.5 to 72.8±4.5%). However, developmental rate to the blastocyst stage was significantly higher (P<0.05) in antioxidant treatment groups (30.5±2.5 to 32.5±1.2%) than that of control (23.0±1.9%). TUNEL assay revealed that the numbers of apoptotic cell in Vit. C and GSH treatment groups (2.4±0.4% and 2.3±0.4%, respectively) were significantly lower (P<0.05) than that of control (3.7±0.5%). Caspase-3 activity was significantly lower (P<0.05) in Vit. C treatment group (0.67±0.08, x-fold) than control. DNA methylation status of blastocysts in antioxidant treatment groups (12.2±0.6 to 13.0±0.6, pixels/embryo) was significantly lower (P<0.05) than that of control (16.9±0.7, pixels/embryo) and similar with that of IVF embryos (12.4±0.4, pixels/embryo). These results suggest that antioxidant treatment during SCNT procedures can improve the embryonic development and reduce the apoptosis and DNA methylation level of bovine SCNT embryos, which may enhance the nuclear reprogramming of bovine SCNT embryos. 본 연구는 소 체세포 핵이식과정 중 항산화제의 처리가 체세포 복제란의 체외발육과 DNA 메틸화 양상에 미치는 영향을 검토하였다. 탈핵한 소 체외 성숙란은 체세포와 전기융합 후 Ca-ionophore와 6-dimethyl-aminopurine (6-DMAP)의 복합처리로 활성화를 유기하였다. 체세포 핵이식과정 중에 미세조작 배양액, 전기융합액 및 활성화액 내에 각각 25 μM β-mercaptoethanol (β-ME), 50 μM L-ascorbic acid (Vit. C) 또는 50 μM L-glutathione (GSH)을 첨가하여 핵이식을 실시하였다. 한편, 메틸화 양상을 비교하기 위하여 체외수정란을 대조구로 사용하였다. 핵이식란은 3 mg/ml BSA 를 함유한 CR1aa 액 내에서 2일간 배양하고, 10% FBS를 함유한 CR1aa 배양액에서 5일간 추가 배양하여 배반포 발육율을 확인하였다. 핵이식란의 배반포내 apoptosis는 TUNEL 및 caspase-3 활성분석을 통해 실시하였고, 배반포기 핵이식란 및 체외수정란의 DNA 메틸화 양상은 5-methylcytidine (5-MeC) antibody를 사용하여 형광 강도를 측정하는 방법으로 분석하였다. 소 체세포 복제란의 분할율은 대조구(74.9±2.7%)와 항산화제 처리 그룹 (71.9±3.5~72.8±4.5%) 간에 차이가 없었으나 배반포 발육율은 항산화제 처리구(30.5±2.5~32.5±1.2%)가 대조구(23.0±1.9%)보다 유의적으로 높았다 (P<0.05). TUNEL 분석 결과는 대조구(3.7±0.5%)에 비하여 Vit. C와 GSH구에서 유의적으로 낮은 사멸세포(각각 2.4±0.4% 와 2.3±0.4%)가 관찰되었고(P<0.05), caspase-3 활성은 Vit. C 구(0.67±0.08, x-fold)에서 대조구에 비하여 유의적으로 낮게 나타났다 (P<0.05). DNA 메틸화 양상은 항산화제 처리구(12.2±0.6~13.0±0.6, pixels/embryo) 가 대조구(16.9±0.7, pixels/embryo)에 비하여 유의적으로 낮았고 (P<0.05), 체외 수정란(12.4±0.4, pixels/embryo)과 유사한 양상을 보였다. 본 연구의 결과는 체세포 핵이식과정 중에 항산화제 처리가 소 체세포 복제란의 배 발달을 증진시키고, 배반포의 apoptosis와 DNA 메틸화를 감소시켜, 결과적으로 소 체세포 복제란의 reprogramming을 증진시킬 수 있음을 보여준다.

      • KHIMA 싱크로트론의 이중 하모닉 고주파 가속 방법 연구

        이성영 동아대학교 대학원 2017 국내석사

        RANK : 247631

        싱크로트론 가속기는 입자가 같은 경로를 반복하면서 RF 공동(Cavity)에서 에너지를 얻음으로써 가속이 되는 가속기이다. RF 공동에 어떠한 성질의 주파수를 넣어주느냐에 따라 입자의 운동을 조정할 수 있다. 주파수를 몇 개를 동시에 구동하는지도 중요한 요소인데 실제로 가속기들의 가속 방식을 단일 주파수 가속 방식이 아닌 이중 주파수 가속 방식으로 하는 곳들도 있고, 비슷하게는 RF 공동 두 개로 단일 주파수를 하나씩 넣어주면서 이중 주파수 구동으로 비슷하게 가속하는 연구들도 있다. 본 논문은 KHIMA (Korea Heavy Ion Medical Accelerator) 가속기의 RF 공동에서 단일 주파수로 구동하는 가속 방법을 이해하고 이것을 이중 주파수 구동 방법으로 가속 시뮬레이션을 하는 것에 대하여 서술하였다. 시뮬레이션 프로그램은 ESME를 사용하였고 이중 주파수로 가속하기 위한 최적의 조건을 찾아 시뮬레이션 후 기존의 KHIMA 가속기의 가속 방식과도 비교를 해보았다. 시뮬레이션 구동은 첫 번째 하모닉 RF 전압을 기존 방식인 33 V 부터 330 V 까지 캡쳐링, 2700 V 까지 가속을 사용 하였고 두 번째 하모닉 RF 전압을 33 V 부터 250 V 까지 캡쳐링, 1500 V 까지 가속을 입력해 구동하였다. 시뮬레이션 결과를 기존의 단일 주파수 가속 방식과 비교했을 때 진행방향에 있어서 입자들이 100°에서 139.8°로 좀 더 넓은 분포를 가짐으로 입자들의 단위 면적당 밀도가 낮아짐을 알 수 있다. 그리고 입자들의 에너지 분포 최댓값이 7.8 MeV 에서 5.4 MeV 로 줄어들었고 가속이 끝났을 때 입자의 생존율이 94.7%에서 99.8 % 로 늘어났다. 이는 싱크로트론 링에서 입자들이 인출을 하여 빔 이용을 할 때 까지 입자 손실을 줄일 수 있는 계기가 된다. KHIMA 가속기는 치료용 가속기로써 입자 치료 시 사용하는 Intensity를 늘릴 수 있고, 치료 시간을 줄임으로 더 나아가 수익 증대의 효과도 볼 수 있다 예상된다.

      • 자기이방성센서를 이용한 강지보재 계측 연구

        이성영 경일대학교 대학원 2012 국내석사

        RANK : 247631

        새로운 소재의 개발이 활발하게 진행되고 있는 오늘날에도 구조용 재료와 기계부품의 대부분은 철강 제품이 차지하고 있다. 철강 제품은 재료의 특성상 제조공정 또는 부품의 조립시 응력이 발생하게 되며 발생된 응력은 잔류응력으로 남아 재료의 파괴강도에 영향을 미치게 된다. 강재의 응력 및 잔류응력을 측정하는 방법은 여러 가지가 있지만 두 가지로 대별하면 스트레인게이지(strain gauge)로 응력의 변화를 측정하는 방법과 X-선, 초음파, 자기변형효과(magnetostriction effect) 등을 이용한 비파괴 응력 측정방법으로 나눌 수 있다. 전자는 정밀도가 높은 측정이 가능하기 때문에 널리 사용되고 있는 방법이지만 외력에 의한 응력이나 잔류응력이 없는 상태에 미리 스트레인게이지를 부착하여 응력을 측정해야 하는 어려움이 있다. 반면 후자는 오래 전에 축조된 구조물이라도 응력측정이 가능할 뿐만 아니라 잔류응력의 측정에도 매우 유용하다. 비파괴 응력 측정 기법인 X-선을 이용한 장치는 대형으로 손쉽게 운반이 어려우며 구조물의 임의 지점에서의 응력측정에는 부적합하다. 또한 초음파와 자기변형효과를 이용한 방법은 아직 실용화하기에는 어려움이 있으나 이를 위한 연구가 계속 진행되고 있다. 본 연구에서는 강구조물에 대한 비파괴 응력 계측에 대한 연구를 수행하기 위하여 자기변형효과를 이용한 자기이방성센서를 제작하였으며, 스트레인 게이지와 제작된 자기이방성센서를 이용하여 일반구조용 압연강재인 SS400과 용접구조용 압연강재인 SM490에 대한 강판 휨시험을 수행하여 하중단계별 출력전압과 응력 분포를 분석하였다. 그리고 출력전압과 응력값을 회귀 분석하여 상관관계를 도출하였다. 강판 휨실험 결과로부터 도출된 상관관계식을 이용하여 H형강 휨실험을 수행하여 자기이방성센서로 측정된 응력과 스트레인게이지로 측정된 응력을 비교하였다. 강판 휨실험 결과, 열처리 가공 전과 후의 실험 결과를 비교하여 보면 열처리 가공 전의 시험편은 3차 다항식의 관계를 보이고 있으며, 열처리 가공 후의 시험편은 선형적인 관계를 나타내는 것으로 나타났다. 이것은 열처리 가공으로 인하여 강재 내부에 존재하고 있던 잔류응력이 소산되어 곡선구간이 선형으로 나타나는 것으로 판단된다. 자기이방성센서를 이용하여 H형강 휨실험시 초기 무하중 상태에서 측정된 상부 플랜지 중앙부와 좌우측의 응력차이는 약 80~100MPa 정도로 나타나고 있으며, 하부 플랜지 역시 유사한 경향을 나타내고 있음을 알 수 있다. 또한 좌측과 우측 웹부분 역시 -80~-100MPa 정도로 나타나고 있다. 이는 H형강의 이론적인 잔류응력 분포와 동일한 것으로 판단된다. 또한 강판의 휨 실험 결과를 토대로 분석기법을 달리하여 하중단계에 따른 스트레인 게이지의 응력 변화량과 자기이방성센서의 출력전압의 변화량을 비교․분석한 결과, 무하중시 자기이방성센서에서 측정된 출력전압을 초기값으로 두고 하중단계에 따른 출력전압의 변화량과 스트레인 게이지로 측정된 응력 변화량은 선형적인 관계를 가지고 있는 것으로 나타났으며, 잔류응력 제거를 위해 열처리를 한 경우가 그렇지 않은 경우보다 더 높은 상관관계를 나타내고 있음을 알 수 있었다. 그리고 H-형강의 휨 실험 결과를 동일한 방법으로 분석한 결과, 하중단계에 따른 스트레인 게이지의 응력 변화량과 자기이방성센서로 측정된 응력 변화량을 유사한 경향을 나타내고 있으며, 최대 20MPa 정도의 차이를 나타내고 있음을 알 수 있다. Even today when the development of new materials is being progressed lively, steel manufactures are accounted for the most of the structural materials and mechanical parts. About the steel manufactures, the stress may occur for the manufacturing process or assembly of parts by the nature of the material, and the occurred stress has the effects on the breaking strength of materials by being remained as the residual stress. There are many methods to measure the stress and residual stress of the structural steel, but 의 stress and residual stress, it can be divided broadly into two methods such as measuring the change of stress by the strain gauge and the stress measurement testing using X ray, ultrasonic waves, magnetostriction effect etc. The former is the method which is used widely for possibility of measuring high degree of precision, but there is difficulty to measure the stress by attaching the strain gauge in the state without stress or residual stress by external force. On the other hand, the latter is the measuring stress possible to the structures which is constructed a long time ago, and it is also very useful for measuring the residual stress. The device using X ray as the stress measurement testing is difficult to be transported easy due to large size, and it is invalid for measuring stress in the random point of structures. In addition, the method using the ultrasonic waves and magnetostriction effect is still difficult to be commercialized, but the study is progressing continually. This study produced the magnetic-anisotropy sensor using magnetostriction effect in order to carry out the study on the stress measurement testing about steel components, and analyzed the output voltage by loading steps and stress distribution by carrying out the steel plate bending test about SS400 as structural rolled steel and SM490 as rolled steel for welding structure using the strain gauge and produced magnetic-anisotropy sensor. In addition, the correlation was drawn by regression analysis of output voltage and stress value. The stress which was measured by magnetic-anisotropy sensor and the stress which was measured by strain gauge were compared by the H-shape bending test using correlation formula drawn from the steel plate bending the result of an experiment. Comparing the results of an experiment before and after the steel plate bending the result of an experiment and stress relief heat treatment, the test specimen before the stress relief heat treatment showed the relation of the cubic polynomial, and the test specimen after the stress relief heat treatment showed the linear relationship. It is judged that the curve section is appeared as linear by the residual stress in the structural steel produced by the stress relief heat treatment. The difference of the stress of the center of top flange and left and right parts which was measured in the initial condition of no load of H-shape bending test by using magnetic-anisotropy sensor was shown as about 80~100MPa, and the flange of the bottom parts also showed a similar trend. And the left and right web parts also were shown as about –80~-100MPa. It is judged as same with H-shape theoretical residual stress distribution. In addition, as results of comparing and analyzing variations of the stress variation of strain gauge and output voltage of the magnetic-anisotropy sensor depending on the loading steps by each different analysis technique based on the result of an experiment about bending of steel plate, the variation of output voltage depending on loading steps and the stress variation measured by the strain gauge have the linear relationship by the output voltage measured in the magnetic-anisotropy sensor as the initial value for no load, and it can be seen that the case of the stress relief heat treatment for removing the residual stress has higher correlation than the opposite case. In addition, as results of analysis of the H-shape bending the result of an experiment in the same way, the stress variation of strain gauge depending on the loading steps and the stress variation measured by the magnetic-anisotropy sensor appeared a similar trend, and it showed difference of maximum 20MPa.

      • Different AP-1 partners have different roles in Xenopus Embryogenesis

        李性英 翰林大學校 2004 국내박사

        RANK : 247631

        Xenopus 초기 배 발생동안 가장 중요한 시기로 알려져 있는 gastrula stage는 외배엽, 중배엽, 내배엽의 분리를 통한 세포 운명의 결정과 등-배, 좌-우, 앞-뒤의 비대칭적인 축을 형성하는 시기이다. 이렇게 형성된 각각의 세포들은 결정된 운명으로 분화를 함으로써 각각의 조직을 형성하게 된다. 이러한 초기 발생 과정에 관여하는 대표적인 신호 전달 물질로는 배쪽 중배엽, 표피 형성, hematopoiesis에 관여한다고 알려져 있는 BMP-4 와 organizer 를 유도함으로써 여러 종류의 등쪽 중배엽을 포함한 신경조직 형성에 관여한다는 Activin 이 알려져 있다. 이 논문에서는, 이러한 두가지의 중요한 신호 전달 물질의 초기 배 발생동안 그 역할 수행에 있어서, 세포증식에 관여한다고 알려져 있는 AP-1이라는 oncogenic 단백질이 매우 중요한 역할을 수행한다는 사실을 증명하였다. AP-1 (activator protein-1) 단백질은 Jun (c-Jun, c-Fos, JunD, JunB) 과 Fos (c-Fos, FosB, Fra-1, Fra-2) family protein 의 dimeric 복합체 (Jun-Jun homodimer 또는 Jun-Fos heterodimer) 로 이루어져 있으며 다양한 종류의 신호에 의해 활성화될 수 있는 transcriptional activator 이다. 그러나, 척추동물의 초기 배 발생 과정에서 이러한 다양한 AP-1 단백질의 역할에 대한 연구는 거의 알려져 있지 않다. 본 논문에서는, 초기 배 발생 과정 동안의 AP-1 단백질의 역할을 규명하는 과정에서 서로다른 AP-1 partner들이 BMP-4와 activin 신호에 의해 생성되는 서로 상반된 역할을 수행한다는 사실을 확인하였다. c-Jun 과 c-Fos 의 heterodimeric AP-1 은 초기 발생 과정동안 Activin에 의해서만 유도되어지는 organizer 유전자를 유도함으로써 등쪽 중배엽 형성과 신경조직 형성에 관여한다는 것을 확인하였다. 이 역할을 수행함에 있어서 AP-1은 Activin receptor의 하류에서, 그리고 Activin 신호전달 매개체인 Smad3 를 통하여 이루어짐을 확인하였다. 이와 반대로 JunD 와 c-Fos 로 이루어진 heterodimeric AP-1 은 BMP-4 와 유사하게 배쪽 중배엽 형성과 Blood 형성에 관여함을 밝혔다. 또한 이러한 역할수행에 JunD 와 c-Fos로 이루어진 heterodimeric AP-1과 BMP-4가 서로 상호작용을 한다는 사실과 함께 AP-1에 의해 일어나는 형성에 BMP-4가 필수적이라는 사실 또한 확인하였다. 다음으로, Activin 신호전달에 의한 AP-1 단백질의 활성조절 기작에 대해 의문을 가지고 실험을 한 결과 Activin에 의해서 mitogen-activated protein kinase (ERK1/2)가 인산화 되는 사실을 밝혔으며 Activin에 의한 ERK1/2의 인산화는 FGF3와 FGF8의 유도를 통한 간접적인 경로가 포함 되어진다는 것을 밝혀내었다. Activin에 의한 AP-1 활성조절에 대한 정확한 기작에 대한 연구는 좀 더 수행되어져야 하겠지만 Activin과 Activin에 의해 활성화된 AP-1이 FGF3와 FGF8의 유도를 통해 ERK1/2를 인산화를 조절하고 이러한 일련의 과정이 autocatalytic loop를 통해 일어날것으로 사료된다. 이는 곧 등쪽 배엽과 신경조직형성에 관여될 것이라고 사료된다. 본 연구를 통해 세포 증식 인자로써 알려져 있는 AP-1이 세포 분화라는 측면에서 Xenopus laevis의 초기 배 발생에 중요한 역할을 수행할 수 있음을 밝혔을 뿐만 아니라 서로 다른 partner로 이루어진 AP-1 인자들이 척추동물의 초기 배 발생 과정에서 BMP-4와 activin 신호에 의해 야기되는 서로 상반되는 세포 운명 결정 과정를 매개하는 중요한 인자임을 최초로 규명하였다.

      • 헤밍웨이 문체의 연구

        이성영 又石大學校 大學院 2003 국내박사

        RANK : 247631

        The purpose of this study is to verify the true features that arise from Hemingway's Iceberg Theory and its techniques in his works. In surveying these, we can see the author's true intentions by understanding what allows the reader to see the actual characteristics of his novels. Hemingway revealed the themes of his novels, not through story-telling or detailed representation, but through his style. This method is called structural theme treatment. A novel written by utilizing structural theme treatment has a complex multi-faceted meaning. This is due to the fact that the written word alone may not reveal the real intention directly, however that meaning can be discovered through images or blank words within the sentences. Images and blank words do not present themes through description. Instead, the themes can be demonstrated through pictorial effects and musical rhythm which overcome the limitations of the written language. The pictorial effects here are based on the effects stemming from the Iceberg Theory, a discipline Hemingway learned through the painting techniques of C′ezanne who often omitted the description of the surroundings to enhancing the main subject of his art. After studying this effect, Hemingway was able to input it into his works. Hemingway tried to minimize the explanations and descriptions about the main theme as C′ezanne did, and to transmit the themes through clear and concrete nouns. But while this method can have simple structure and excellent visual effects, it can also cause overly simple and awkward sentences. To solve this problem, Hemingway used staccato sequence, the sequence of motion and facts, and repetition technique to achieve rhythmic style which successfully reduced the stiffness of his sentences. Hemingway's novels can be characterized as stories that can be transmitted visibly and audibly. This originated from his belief that prose can have the same effects as painting and music. Hemingway focused on this concept and tried to reproduce the effects in his novels. He also included his concept of time and, with this, could produce a novel demonstrating the meaning of the fourth and fifth dimensions. Hemingway's concept of time represents the conscious stream of his mind. The stopped 'Now' time intimates the concept of the fourth dimension. The effects are well represented in For Whom the Bell Tolls and The Old Man and the Sea. The deaths in these novels are not stopped as would be a natural death, but are extended to the different objects eternally and from this point, the notion of the mysterious fifth dimension springs forth. As Hemingway tried to write his novels by using the Iceberg Theory, readers also need to consider the theory to understand what he says in his novels. When Hemingway tried to write his works without considering the effects of the Iceberg Theory, he failed to create a critically successful work. When Hemingway wrote For Whom the Bell Tolls, Across the River and Into the Trees and To Have and Have Not, these were not considered to be successful from a critical standpoint of Hemingway's own style. Those novels were critical of society and For Whom the Bell Tolls has political undercurrents. The themes of the works were not suitable for delineating his real aesthetic theme, the matter of perpetuity of human beings. Under the Iceberg Theory, social and political stories cannot be effectively described. After writing a series of works unfavorable to critics, he wrote The Old Man and the Sea which demonstrates the general effects of Iceberg Theory such as painting effects of style, objective words, image words, effects of blank, forward and backward movements of the narrative pattern, and the sense of rhythm. It also reaches the effects of a poem and allegory and emits the effects of the fourth and fifth dimensional style. In conclusion, the Iceberg Theory can be regarded as one of the devices and criteria that can help readers understand the themes and characteristics of his style. The style of Hemingway is a feat that demonstrates overcoming the limitation of expression of prose and transmits a powerful consciousness of the theme of a novel without particular depiction. Hemingway could enlarge the domain of novels by taking the influence of other arts into his style. Through those effects, he could accomplish the works which possess eternity derived from the implication of the fourth and fifth dimensions.

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