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- 저자 : 고기성(Ki Seong Ko) (검색결과 1 건)
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CRISPR/Cas9 시스템을 이용한 세포 사멸 불활성화(immortalization) 배추
이예린(Ye-Rin Lee),이혜은(Hye-Eun Lee),한고은(Koeun Han),이은수(Eun Su Lee),고기성(Ki Seong Ko),이균오(Kyun Oh Lee),김도선(Do-Sun Kim) 한국원예학회 2021 한국원예학회 학술발표요지 Vol.2021 No.10
배추(Brassica rapa)는 국내뿐만 아니라 중국 및 다른 동아시아에서 중요한 채소이다. 배추의 경우 애기장대가 속하는 배추과 식물로서 애기장대 발현 시스템을 직접 이용할 수 있고, 유전체 및 전사체 서열이 밝혀져 있어 유전체 편집 기술을 활용하여 식물 특이적 당 잔기를 제거할 수 있다. 현재까지 많은 식물 이용 바이오의약품 생산 연구가 진행되어왔지만 식물 세포의 낮은 단백질 생산성을 극복하고 생산 수율 증진시키는 데 한계가 있다. 이러한 생산기술의 한계를 극복하고 안전하고 저렴한 식물 기반의 차세대 biosimilar 생산 플랫폼을 개발하는 노력이 필요하다. 따라서 본 연구에서는 애기장대에서 소포체 스트레스에 의해 유발되는 미절첩 단백질 반응(unfolded protein response, UPR)의 핵심 신호전달 유전자를 유전체 수준에서 교정한 배추 변이체 후보군을 확보하고자 하였다. CRISPR/Cas9시스템과 Agrobacterium 형질전환을 통한 유전자 교정으로 배추 형질전환체를 획득하였다. PCR 분석을 통해 형질전환 여부를 확인한 후 deep-sequencing 분석을 수행하여 유전자 변이 개체를 선발하였으며, 자가수정을 통한 homozygous 계통을 확보하였다. 확보된 E1 종자를 파종하여 파종 7일 후 N-glycosylation inhibitor인 tunicamycin (TM)을 농도별로 처리하여 기존 식물(wild type)의 식물체와 유전자 교정이 된 식물체간의 스트레스 내성을 비교하였다. 세포사멸 조절인자가 제거된 불멸화(immortalization) 식물체 세포의 경우 wild type 세포에 비해 스트레스 저항성과 증식율(proliferation)이 증가할 것으로 기대되며 또한 식물 세포배양 시스템으로 전환 시 단백질 생산 수율도 증가될 것으로 기대된다.
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