잉어에 대한 Microcystis의 독성 연구

우현철 인제대학교 교육대학원 2004 국내석사

Microcystis를 잉어(common carp, Cyprinus carpio L.)에 구강으로 섭취시킨 실험을 통하여, Microcystis가 잉어에 끼치는 아만성 독성에 대하여 연구하였다. 실험실에서 평균 체중이 355±80g, 길이 254±16mm의 잉어를 시료로, 남조독소의 농도가 50㎍ microcystin/kg body weight가 되도록 Microcystis의 bloom scum을 어류 배합사료과 함께 혼합하여 28일간 사육하는 실험을 수행하였다. 잉어의 생장은 Microcystis의 섭식에 의해 상당히 저해되는 것으로 나타났다. Hepatosomatic index는 Microcystis 처리군 잉어가 대조군에 비교하여 다소 높게 나타났다. Microcystis가 잉어 생리에 미치는 영향을 정량적으로 평가하기 위해, 잉어혈청 내의 효소 활성을 측정하였다. GPT와 GOT의 활성은 대조군과 비교하여 Microcystis 처리군 잉어의 혈청에서 통계적으로 유의성 있는 증가를 보였으나, GGT, ALP 및 LDH의 활성은 유의한 차이가 없었다. Protein Phosphatase Inhibition Assay(PPIA)에 의하여 Microcystis 처리군 잉어 조직의 microcystin의 농도를 분석한 결과 간조직은 221±121ng microcystin-LR equivalent/g fresh weight로 근육조직 (111±38ng microcystin-LR equivalent/g fresh weight)에 비하여 농축 농도가 높게 나타났다. 이러한 결과는 체중 60kg인 사람이 물고기 근육 약 30g을 섭취할 경우 약 3.3±1.1㎍의 microcystin을 섭취할 가능성이 있으며, 이는 세계보건기구(WHO)의 권고(TDI 0.04㎍/kg/day) 2.4㎍/day보다 많은 microcystin을 섭취할 수 있음을 나타낸다. 따라서 남조류 수화와 남조독소에 대한 보건위생학적 문제가 야기될 가능성을 시사하며, 향후 남조류 수화에 대한 경보 체계 수립이 요구된다. The subchronic oral toxicity of microcystin in common carp(Cyprinus carpio L.) was investigated in the present study. The fish(mean body weight of 322±36g) were orally exposed to Microcystis by feeding with bloom scum at the dose of 50㎍ microcystin/kg body weight under laboratory conditions for 28 days. Growth assay results showed that microcystin could completely inhibited the growth of carp. The fish hepatosomatic index increased slightly with the diet with Microcystis. Serum biochemical assays with commercial kits indicated that glutamic pyruvic transaminase(GPT) and glutamic oxaloacetic transaminase(GOT) activities were significantly increased as compared to control levels, but γ-glutamyl transferase(GGT), alkaline phosohatase(ALP) and lactate dehydrogenase(LDH) activities remained unchanged. Protein phosphatase inhibition assay revealed that microcystin concentrations were 221±121ng microcystin-LR equivalent/g fresh weight in hepatopancreas tissue and 111±38ng microcystin-LR equivalent/g fresh weight in muscle tissue. In case the human take 30g of fish muscle tissue, they will take about 3.3±1.1㎍ microcystin. These results are above the limit recommended by the World Health Organization for human consumption. Therefore, it is recommended that a warning system should be instituted for announcing the occurrence of microcystin-producing water bloom and the possible risk of human intoxication.

잉어질秦法硏究 및 뜰동과 서침 秦法과의 關係比較

조선애 梨花女子大學校 大學院 1986 국내석사

잉어(Cyprinus carpio L.)體內 Endosulfan의 代謝와 Radioimmunoassay(RIA)에 의한 殘留分析法의 開發에 關한 硏究

이강봉 全南大學校 大學院 1994 국내박사

잉어체내에서 endosulfan의 代謝過程과 endosulfan에 의한 잉어 體內의 生化學的, 病理學的 變化를 觀察하기 위해 供試藥劑를 LC_(10) 濃度(4.5㎍/L)로 處理하여 각 組織에서의 蛋白質, glycogen, lipid, cytochrome P_(450)의 含量과 GST(glutathione S-transferase), LDH(lactate dehydrogenase), CE(carboxylesterase), APND(aminopyrine N-demethylase), NADPH cytochrome P_(450) reductase의 活性을 調査하였으며 이들 組織에서 處理 時間別로 光學顯徵鏡과 電子顯微鏡 觀察을 실시하였다. 供試魚의 肝과 賢臟에서 蛋白質, glycogen, lipid는 모두 그 含量이 減少하였는데 蛋白質은 肝에서 14.55 %, 賢臟에서 45.48 %까지 減少되었고 glycogen은 肝에서 27.02 %, 賢臟에서 60 %까지 減少되었다. Lipid 含量은 肝에서 最大 28.51 %까지, 賢臟에서는 64.36 %까지 減少되었다. 이 結果에서 이들 成分은 肝 보다 賢臟에서 그 減少가 뚜렷하였다. 또한 CE와 cytochrome P_(450)의 含量調査에서도 類似한 減少現象이 나타났다. 반면에 LDH, GST, APND는 그 活性이 약간씩 增加되었는데 보통 8∼24 時間이 經過되면 다시 減少되는 傾向을 보였다. 供試藥劑 處理에 따른 肝과 賢臟組織에서의 病理學的 觀察結果는 뚜렷한 藥害症狀을 보였다. 肝에서는 液胞化(vacuolation)나 細胞腫脹(cell swelling), 脂肪變性 症狀이 나타나고 이들 症狀은 處理濃度와 處理期間에 比例하여 나타났다. 賢臟組織에서는 근위곡 細尿管 變性(proximal tubule cell swelling)과 蛋白尿現象이 時間이 經過됨에 따라 심각하게 나타났다. ^(14)C-α-endosulfan을 處理하여 in vivo와 in vitro에서 代謝過程을 追跡한 結果 endosulfan은 處理 直後에 供試魚에 빠르게 吸收되었다가 時間이 經過됨에 따라 잉어 體內로부터 除去되었다. 잉어의 肝과 賢臟, 消化管에서 發見된 endosulfan의 代謝物質로는 EE(endosulfan ether), EA(endosulfan alcohol), EHE(endosulfan hydroxyether), EL(endosulfan lactone) 이었으며 주된 代謝物質은 EE와 EA이었다. 다만 植物體나 哺乳類에서 發見되는 것으로 알려진 ES (endosulfan sulfate)는 잉어의 어느 組織에서도 發見되지 않았다. Cytochrome P_(45O) 酵素系에 의해 endosulfan이 代謝作用을 받는지를 調査한 結果 이 酵素系에 反應시킨 후의 抽出物에서는 上記 言及한 代謝物質이 모두 發見되었으나 동일한 反應液에 cytochrome P_(450) 酵素系의 沮書劑로 알려진 piperonyl butoxide를 添加하였을 때는 代謝物質의 生成이 현격히 減少되었다. 또한 endosulfan이 phase II 反應에 의해 conjugation 되는지를 調査하였을 때 glucuronide conjugate가 生成됨을 暫定的으로 確認 하였다. 以上의 結果에서 endosulfan은 EA로 加水分解되고 이것은 다시 EE와 EHE로 酸化되며 EHE는 EL으로 酸化되었다. 또한 EA와 EHE는 glucuronide conjugate를 形成하여 體外로 排泄되는 것으로 推測되었다. Endosulfan의 殘留分析을 위한 RIA(radioimmunoassay)는 EA-BSA conjugate를 抗原으로 하여 집토끼에서 免疫抗體를 生産하였다. 生産된 免疫抗體의 力價는 1:32,000 으로 endosulfan과 EA 以外의 類似化合物에서는 거의 反應性을 나타내지 않았으며 RIA를 위한 最適 稀釋倍數는 1:2,000으로 나타났다. RIA의 最適培養溫度는 4 ℃이었으며 endosulfan의 檢出範圍는 1 ng ∼ 20 ㎍이었고 最小檢出量은 1 ng이었다. RIA 技法을 利用하여 잉어의 各 組織과 供試水에서 回收率은 GC-ECD(gas chromatograph-electron capture detector)나 ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)를 이용한 回收率과 큰 차이없이 우수한 結果를 보였다. 試料에서 RIA에 의한 endosulfan의 檢出限界는 0.1 ppb 였다. Intoxication of carp(Cyprimus carpio L.) with an acute dose of endosulfan(4.5㎍/L) evoked severe toxic symptoms characteristic of hepatocyte cell swelling and multiple fat degeneration during 1-2 hr, lasting for 96 hr. Lactate dehydrogenase, a "biomarker" cytoplasmic enzyme catalyzing the reversible reaction of lactatepyruvate, increased in the activity by treatment of endosulfan during 1, 8, 24, 48, 96 hr. The activities of glutathione S-transferase and aminopyrine N-demethylase increased in the liver and kidneys. The activities of carboxylesterase, NADPH cytochrome P_(450) reductase, and contents of cytochrome P_(450) decreased in the endosulfan-treated group as compared with the control group. However, the activities of these enzymes and the level of cytochrome P_(450) got back slowly as time elapsed. The contents of glycogen, lipid, and protein decreased in the liver, kidneys, and guts. In the pathological study, the liver and kidneys were severely damaged by the exposure to endosulfan. Two weeks after endosulfan treatment(LC_(50);7.96 ㎍/L), hepatocyte cell swelling, fat degeneration, and vacuolation could be observed by both light and electron microscopy in the carp liver tissue. In the kidney tissues, proximal tubule cell swelling and hyaline necrosis were observed by light microscopy. To study the metabolism and absorption of endosulfan in carp, ^(14)C-α-endosulfan was used at the LC_(10) concentration. In an in vivo test, endosulfan was metabolized (65-80%) in tissues and endosulfan ether, endosulfan alcohol, endosulfan αhydroxyether, and endosulfan lactone were identified, indicating that they are the main metabolites of detoxification in carp. In an in vitro test, endosulfan was converted to endosulfan α-hydroxyether, endosulfan alcohol, and endosulfan ether. The maximum levels of ^(14)C-endosulfan in the head, muscle, and gut occurred after 8 hr exposure. However, the maxima reached in the liver and kidneys after 30 min and 4 hr, respectively. The radioactivity in the tissue decreased rapidly 8 hr after treatment. The total radioactivity of ^(14)C-endosulfan recovered from the liver, kidneys and gut of the fish was about 80-90 % of the original amount during the 8 hr treatment. The non-extractable radioactivity increased after 8 hr exposure(27-31%). When endosulfan was incubated with the liver, kidneys, and gut subcellular preparations respectively, it was metabolized to water-soluble and organo-soluble metabolites. The addition of NADPH resulted in rapid conversion of endosulfan to the metabolites in an in vitro test. The rate of metabolism of endosulfan in the liver, kidneys and gut supplemented with NADPH as a cofactor was higher in the 105,000 g supernatant than in microsomes. In this case, endosulfan was hydrolyzed to endosulfan alcohol which was successively oxidized to endosulfan ether and endosulfan hydroxyether. Endosulfan hydroxyether may be further oxidized to endosulfan lactone. Finally, endosulfan alcohol and endosulfan hydroxyether may be conjugated with glucuronic acid. However, this pathway which was tentatively proposed in this study was not clear. The established methods in the residue analysis of endosulfan require an extensive sample clean-up prior to quantification by relatively complex equipment. A radioimmunoassay(RIA) provides a simple procedure with theoretically higher sensitivity and specificity necessitating only a minimum of sample clean-up. Endosulfan-specific antibodies were developed in rabbits by using a bovine serum albumin(BSA) conjugate wherein the alcohol form of endosulfan was multiply bound to the protein via succinylation. An RIA method was developed by using ^(14)C-labeled endosulfan as a tracer. The lowest detection limit of endosulfan was 1 ng in the liver, kidneys, gut and water samples, and 3 ng in the whole body sample of carp without any clean-up, corresponding to 0.1 ppb of endosulfan.

붕어와 잉어의 효능에 대한 연구 : 동의보감에 사용된 처방을 중심으로

박원 尙志大學校 一般大學院 2007 국내석사

정기를 보전하고 자연에 순응함으로서 질병을 예방하고 천수를 누리기 위한 방법 가운데 음식을 조절하는 방법이 있는데 질병을 치료함에 있어서 우선해야 할 것이 음식으로 치료를 하고도 치료가 되지 않으면 그 후에 약으로 치료한다고 하여 음식을 이용하는 양생을 매우 중요하게 여겼다. 의료가 발달되지 않았던 시기에 질병이 발생하면 생활주변에서 구하기 쉽고 비용이 적게 들면서 치료효과가 있는 약재를 사용하였는데 이것을 단방이라고 하여 민간에서 자주 사용되어왔다. 이러한 단방 가운데 음식으로 이용되면서 특수한 보양기능이 있는 것을 선택적, 집중적으로 사용하여 질병의 회복을 도모하는 것을 식료라고 하는데, 식료에 쓰이는 단방을 한의학의 이론을 바탕으로 현대적 생활에 맞게 적용시키면 안정성이 있고, 자원 확보가 가능한 약재의 개발이 이뤄질 수 있을 것이며, 치료율을 높일 수 있는 방법을 얻어 낼 수 있을 것이다. 한반도 전역에서 서식하는 담수어에서 주점종을 형성하는 붕어와 잉어는 붕어즙, 붕어찜, 용봉탕, 잉어찜의 형태로 지금도 애용되고 있다. 붕어와 잉어의 서식환경, 먹이, 단방의 사용례, 본초서적에서의 효능과 주치 증상, 동의보감에서의 사용례를 조사하여 민간요법에 대한 가치를 재인식하고, 붕어와 잉어의 적확한 임상적용 범위를 정하여 한약재로서의 활용도를 높이고, 특수 치료약물로의 개발의 가능성을 구하고자 하여 본 연구를 시행하였다. 대부분의 물고기는 화에 속하나 붕어는 진흙을 먹어 토에 속하고, 고여 있는 물에 주로 서식하여 미네랄이 잉어보다 더 풍부하다. 붕어와 잉어 모두 보양의 영양소를 갖추고 있으나 붕어는 비위대장에 작용하여 만성적인 질병이나 음식을 먹지 못하여 오는 비위허약을 회복하여 생명체에게 영양원을 공급해 재료로 이용되는 동시에 소화흡수를 도와 정기가 축적되게 해 주는 효능을 갖고 있고, 잉어는 폐신간에 주로 작용하여 소통하고 하기하여 정체성을 갖고 있어 대사가 잘 이뤄지지 않아 생기는 부종, 효천, 유즙불하, 태동불안 등의 질환들에 많이 사용이 되었다는 점이 붕어와 잉어의 활용에 있어서 중요한 구별점이 된다. Ancient doctors have had considered that control of food-intake is important way of nourishing life and clearing away of disease. People have been using one kind of material which people cook in normal life, which is called one-material prescription, medicine which had been handed down. Using one herbal medicine prevents and cures disease. Carassius carassius and Cyprinus carpio are easy to get around and to be adapted to various purposes to cure. They are used such ways as long-boiled extracts, boiled soup of Cyprinus carpio and hen, pan-caked Carassius carassius. But as the study on these two fish is not enough, the use is limited to the only one material used way. So, in order to know efficacy of Carassius carassius and Cyprinus carpio, I researched their ecology and habits, their game, ratio of nutrients, example used by people, flavor and property written in herbal text, and the records written in Dongeuibogam. Most fish belong to fire element, but Carassius carassius eats clay, so it belongs to earth element. It habitats mainly in stagnant water and has more minerals than Cyprinus carpio. Though Carassius carassius and Cyprinus carpio all have nutrients for energy, Carassius carassius penetrates to spleen, stomach, and colon meridians, and recovers weakness from long chronic disease and dysphagia, and gives nutrients to patients, and helps to digest food well, resulting in accumulating energy. On the other hand, Cyprinus carpio penetrates to liver, lung, and kidney meridians, and makes qi circulate more fluently, makes a person urinate well, and cures such diseases as swelling from low metabolism, asthma, ischogalactia, and weak fetal movement. In Dongeuibogam, Carassius carassius is all recorded in 19 examples. 2 examples are used with other herbal medicines, and 17 examples are all used as the only one material. In case of Cyprinus carpio, 2 examples of Cyprinus carpio gallbladder are used, and 10 examples of Cyprinus carpio flesh are used.

農藥에 의한 참잉어 및 이스라엘잉어의 急性 毒性 比較

임요섭 全南大學校 1991 국내석사

淡水産 魚類인 이스라엘 잉어 (Cyprinus Israeli carpio L.) 와 참잉어 (Cyprinus carpio L.) 에 對한 13個 農藥의 急性毒性 (96hr)과 5個 殺蟲劑(diazinon, malathion, carbofuran, cartap, methomyl)에서 acetylcholinesterase (AchE)와 glutathione s-transferase 活性을 測定한 結果는 다음과 같다. 이스라엘 잉어에서 供試農藥의 LC_50値에 의한 毒性크기 順序는 endosulfan, captafol, chlorothalonil, butachlor, captan, carbofuran, cartap, diazinon, nitrofen, methomyl, propanil, malathion, isoprothiolane順이었고, 毒性의 差異는 endosulfan (0.0061ppm)이 isoprothiolane(12.8ppm)보다 2×10³倍의 毒性 을 나타냈으며 참잉어에서의 毒性크기 順序는 endosulfan, captafol, chloro thalonil, captan, butachlor, carbofuran, nitrofen, diazinon, cartap, metho myl, propanil, malathion, isoprothiolane 順으로 endosulfan (0.0026ppm)이 isoprothiolane(13.20ppm) 보다 5×10³倍의 毒性 差異를 나타내었다. 毒性은 diazinon, carbofuran, cartap, endosulfan, nitrofen에서는 참잉어가 이스라엘 잉어보다 約 2-6倍의 毒性을 나타냈으나, malathion, methomyl과 captafol에서는 이스라엘 잉어의 毒性이 약간 높았다. 準致死 濃度의 殺蟲劑가 이스라엘 잉어의 AchE의 活性에 미치는 影響은 有機憐系 殺蟲劑인 diazinon과 malathion에서는 各各 約 31-52%의 沮害를 나타냈으며 GST(CDNB)에 미치는 影響은 5가지 農藥中 methomyl만이 2.6倍의 活性을 보였고 나머지 農藥은 약간의 活性만 보였다. This study was carried out to investigate the comparison of acute toxicity(96hr) in carp (Cyprinus carpio L.) and israeli carp (Cyprinus Israeli L.) of fresh water fishes by 13 chemicals, and activities of acetylcholinesterase (AchE) and glutathione s-transferase ( GST ) in israeli carp by 5 (diazinon, malathion, carbofuran, cartap, methomyl) insecticides. LC_50 value of acute toxicity of agricultural chemicals in Israeli carp were the endosulfan ( 0.0061ppm ), captafol ( 0.041ppm ), chlorothalonil (0.073ppm), butachlor (0.48ppm), captan (0.14ppm), carbofuran (1.13ppm), cartap (1.15ppm), diazinon (1.35ppm), nitrofen (3.72ppm), methomyl (4.39ppm), propanil(10.61ppm), malathion (11.78ppm) and isoprothiolane (12.81ppm). The acute toxicity of endosulfan (0.0061ppm) was 2100 times higher than that of isoprothiolane (12.8 ppm). LC_50 value of acute toxicity of agricultural chemicals in carp were the endosulfan (0.0026ppm), captafol(0.062ppm), chlorothalonil (0.078ppm), cap tan (0.14ppm), butachlor (0.47ppm), carbofuran (0.52ppm), nitrofen (0.58ppm), diazinon (0.81ppm), cartap (0.82ppm), methomyl (5.03ppm), propanil (10.67 ppm), malathion (11.92ppm), and isoprothiolane (13.20ppm). The acute toxicity of endosulfan as 5×10³times higher than that of isoprothiolane. The toxicity of the diazinon, carbofuran, cartap, endosulfan, and nitrofen in carp was approximately 2-6 times as high as that of israeli carp, but the toxicity of malathion, methomyl and captafol in israeli carp was slightly higher than those of carp. Sublethal exposures of israeli carp to 5 phosphorus insecticides had been investigated. AchE activity was inhibited by 31-52% on diazinon and malathion exposure on 96hr in israeli carp. GST activity (CDNB conjugation) of israeli carp was 2.6 times higher induced by methomyl exposure on 96hr.

과산화수소에 의한 SK-N-MC 신경세포주의 細胞死에서 잉어 추출물의 보호효과

김홍재 尙志大學校 大學院 2006 국내석사

잉어추출물의 세포보호효과를 보기 위하여 신경세포주인 SK-N-MC 세포에 과산화수소를 처리하여 세포사를 유도하였다. 먼저 항산화효과를 조사하기 위하여 DPPH radical 소거효과를 수행하였고, 세포생존력을 알아보기 위하여 crystal violet를 수행하였으며, caspase-3, caspase-9, cytochrome C, Bax, Bcl-2, p53, p21 및 cyclin D1를 조사하기 위하여 Western blot 분석을 실시하였다. 잉어 추출물을 농도 별로 처리하여 DPPH radical 소거효과를 수행한 결과 농도에 의존적으로 라디칼이 소거되었는데, 이것은 잉어 추출물이 in vitro 상에서 항산화효과가 있음을 증명하는 것이다. 세포에 과산화수소를 처리하여 세포사를 유도하였으며 여기에 잉어 추출물을 동시에 처리한 결과 세포사가 억제됨을 확인하였다. 이 때 과산화수소를 처리한 경우 caspase-3와 caspase-9은 활성화 되었으나 잉어 추출물을 처리한 경우 억제 되었다. 잉어 추출물의 보호기작을 알아보기 위하여 Bax와 Bcl-2및 cytochrome C의 세포질 내 발현을 확인한 결과 Bcl-2가 과산화수소를 처리시 감소함을 잉어 추출물에 의하여 증가하였으며, Bax와 cytochrome C는 과산화수소를 처리시 증가함을 잉어 추출물에 의하여 감소시켰다. 이는 세포질내에서 anti-apoptosis 분자인 Bcl-2를 증가 시키므로써 세포보호효과를 보이는 것으로 사료된다. 또한 p53과 p21은 과산화수소를 처리시 증가되었으나 잉어 추출물의 경우 감소되었으며, cyclin D1은 반대현상을 보였다. 이는 잉어 추출물이 세포주기와 관계하여 세포사를 방지하며, 세포보호효과를 나타냄을 의미한다. The purpose of this study was to identify the protective effect of Cyprinus carpio (Cc) extract on cell death induced by H_(2)O_(2) in SK-N-MC neuroblastoma cells. We measured the antioxidant effect by DPPH radical scavenging analysis and examined the cell viability by crystal violet and caspase-3, caspase-9, cytochrome C, Bax, Bcl-2, p53, p21, and cyclin D1 by using Western blot analysis. Cc extract scavenged DPPH radical in a dose-dependent manner, suggested that Cc extract have antioxidant effect in vitro. Treatment of cells with hydrogen peroxide, a reactive oxygen species, was to induce cell death and pretreatment with Cc extract attenuated the occurrence of H_(2)O_(2)-induced cell death. Caspase-3 activity induced by H_(2)O_(2) was decreased with Cc extract treatment. Furthermore, the active fragments of caspase-9 were almost absent following exposure to Cc extract. To elucidate the protective mechanisms of action of Cc extract, Western blot analyses for Bcl-2 and Bax expression and cytochrome c release were carried out. Pretreatment with Cc extract induced the expression of Bcl-2 and suppressed the release of cytochrome c and Bax into the cytosol, thereby arresting H_(2)O_(2)-induced apoptotic cell death. Especially p21 and p53 were decreased prior to H_(2)O_(2) treatment, while cyclin D1 increased in the cytosol. These results suggest that Cc extract is associated with the cell cycle and anti-apoptotic cell death.

양식 잉어류의 신종 잉어 바이러스성 질병에 대한 면역학적 신속 진단법의 검토

김위식 麗水大學校 大學院 2004 국내석사

국내 양식산 잉어류를 대량 폐사시킨 신종 잉어 바이러스는 지금까지 보고되지 않은 신종의 병원체에 의한 질병이라는 점에서 기존에 연구되어 있는 적용 가능한 진단방법이 전무한 실정이며, 이 바이러스성 질병의 원인으로 최초 발병 이후 수년간 연속적으로 재발되고 있어, 본 연구에서는 신종 잉어 바이러스에 특이적이고 신속ㆍ효과적인 면역학적 진단법을 검토하였다. 본 연구에서는 바이러스를 특이적으로 신속히 진단하기 위해 단클론 항체를 제작하였으며, 제작된 27개의 hybridoma 세포 중 바이러스 특이적 검출능이 가장 높은 hybridoma 세포 (18-2, 42-1, 55-1)로부터 단클론 항체 CV18, CV42, CV55를 얻을 수 있었으며, 이들을 이용한 바이러스 특이 검출법의 확립을 위하여 IFAT, ELISA에 의한 신속진단법을 실시하였다. 형광 항체법 실험 결과, 잉어 바이러스에 감염된 비장조직과 바이러스를 접종하여 CPE가 나타난 FHM 세포에서는 특이적인 반응을 확인할 수 있었으며, 정상 잉어 비장조직과 정상 FHM 세포에서는 음성 반응을 확인하였다. ELISA 실험에서는 바이러스에 감염된 FHM세포 배양액과 정제된 바이러스액에서 양성 반응을 확인 하였고 FHM세포 배양액에서는 음성 반응을 확인하였으며, 바이러스에 대한 항원 검출능을 조사시, 바이러스에 감염된 FHM세포 배양액 1000배 희석 (10^(1) TCID_(50)/㎖)에서도 양성반응을 확인할 수 있었다. 그리고 다양한 현장에서 발병된 감염 어체를 대상으로 FHM세포를 이용하여 분리한 바이러스에 대해서도 대조구에 비해 높은 OD값을 보여 특이적으로 반응함을 확인할 수 있었다 이상의 결과로 본 연구에서 제작된 단클론 항체 CV18, CV42, CV55는 ELISA법과 형광 항체법을 통한 신종 잉어 바이러스 진단에 효과적으로 사용되어질 수 있을 것으로 생각되어진다. A new viral disease with high mortalities has been occurring in summer since 1998 in different ages of carp Cyprinus carpio cultured in Korea. This study was conducted to develop the diagnosis techniques for the new viral disease. 18-2, 42-1 and 55-1 hybridoma clones secreting monoclonal antibodies (MAbs) were produced from mouse myeloma and spleen cells immunized with a new virus. Indirect fluorescent antibody technique (IFAT) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were evaluated for rapid detection with MAbs. The monoclonal antibody gave positive reactions by IFAT with the spleen of virus-infected carp and virus-infected FHM cells, and negative reactions with the spleen of normal carp and uninfected FHM cells. Detection of the new virus in cell culture by ELISA was shown that positive reactions were obtained in virus-infected FHM cell supernatant, while the non-infected cell supernatant and marine birnavirus (MABV)-infected cell supernatant were uniformly negative. In addition, virus-infected FHM cell supernatant was detected positive reaction at a 1000-folds dilution (10^(1) TCID_(50)/㎖) by ELISA. The virus isolated from various regions of cultured carp also showed positive reactions. These results suggest that IFAT and ELISA methods developed in this study are rapid and reliable diagnostic methods

잉어(Cyprinus carpio linne)와 이스라엘잉어(Cyprinus carpio specularis) mitochondrial DNA의 유전적 다형

유선아 忠南大學校 1994 국내석사

잉어 體表面 粘液으로부터 肝吸蟲에 대한 殺蟲性 物質 分離

이상복 全南大學校 大學院 1983 국내박사

肝吸蟲은 우리나라에서 가장 重要한 吸蟲類의 一種으로서 南韓 各處 河川 流域에 큰 流行地를 形成하고 있으나 肝吸蟲症의 疫學的 事實을 理解하는데 필요한 第二中間宿主에 대한 生態學的 知識에는 不充分한 点이 너무나 많다. 同一水系에 棲息하고 있는 淡水魚類라 할지라도 그 種類에 따라 肝吸蟲 有尾幼蟲 容易하게 侵入할 수 있는 것과 그렇지 않은 것으로 區別할 수 있고 또 魚體內에 있어서 被囊幼蟲 感染度와 그 壽命이 현저하게 다른데 이의 確實한 機轉에 대해서는 不明한 点이 많다. 最近에 이르러 우리나라에서 잉어와 붕어 등의 體表面 粘液內의 肝吸蟲에 대한 殺蟲性 物質이 分劃된 바 있는데 著者는 이 機轉을 闡明하기 위한 一環으로 영어 體表面 粘液內 含有되어 있는 肝吸蟲에 대한 殺蟲性 物質을 分離하여 化學分析하였다. 1. 잉어 體表面 粘液의 에테르抽出物을 벤젠을 容媒로 사용하여 silica gel column chromatography한 바 4個로 分劃되었는데 이 4個 分劃 중 肝吸蟲 有尾幼蟲에 대한 殺蟲力이 가장 强한 것은 第二分劃(赤黃色部分)으로 接觸 125分/10mg에 死滅하였다. 2. 이 赤黃色의 第二分劃으로부터 더욱 純粹한 殺蟲性 物質을 얻기 위하여 石油에테르/클로로포름 : 30/70의 混合溶媒를 사용하여 silica gel thin layer chromatography한 바 6個斑点으로 分劃되었는데 이 중 肝吸蟲 有尾幼蟲에 대한 殺蟲力이 가장 强力한 것은 第一斑点(Rf. 0.714)으로 接觸 80分/10mg에 死滅하였다. 3. 이 第一斑点(Rf. 0.714) 物質을 벤젠/아세톤 : 90/10의 混合溶媒를 사용하여 silica gel thin layer chromatography한 바 다시 6個斑点으로 分劃되었는데 이 중에서 第一斑点(Rf. 0.800)이 肝吸蟲 有尾幼蟲에 대한 殺蟲力이 强力하여 接觸 54分/10mg에 死滅하였다. 4. 이 第一斑点(Rf. 0.800) 物質을 벤젠을 溶媒로 사용하여 silica gel column chromatography한 바 二個物質로 分劃되었는데 肝吸蟲 脫囊幼蟲에 대한 殺蟲效果를 檢討한 結果 第二分劃인 淡褐色 部分에서 殺蟲力이 强力하였다(115分/10mg). 5. 이 淡褐色 第二分劃物質(最終 分劃物質) 10mg을 사용하여 肝吸蟲에 대한 殺蟲時間을 觀察한 바 有尾幼蟲 26分, 脫囊幼蟲 115分 그리고 成蟲 443分에 完全 死滅하였다. 6. 以上과 같은 精製方法에 의하여 肝吸蟲에 대한 殺蟲性物質을 잉어 體表面 粘液에 에테르抽出物로부터 15倍 精製하였으며 그 收率은 0.03%이었다. 7. 이 最終分劃物質의 化學構造를 把握하기 위하여 赤外線 分光分析 및 核磁氣共鳴 分光分析 등의 化學分析을 試圖한 結果 이 物質에는 ethyl ester group이 存在하고 2個의 double bond에 隣接한 2個의 methylene group 그리고 carbonyl group에 隣接한 1個의 methylene group이 存在하며 또한 1個의 methylene group은 double bond 사이에 있고 alkane의 直鎖는 CH₃(CH₂)_10 CH₂-가 된다. 이러한 部分構造로 보아 이 物質은 2個의 double bond, 15個의 methylene group 그리고 1個의 methyl group으로 構成된 不飽和脂肪酸의 ethyl ester로 判明되었다. The wormicidal substance for Clonorchis sinensis in the epidermal mucus of Cyprinus carpio was isolated by silica gel column and thin layer chromatography, and analyzed for its chemical nature. The results obtained were summarized as follows 1. The mucus was extracted by ethyl ether and separated into 4 fractions by silica gel column chromatography, using benzene as a solvent. The second fraction with yellowish red colour among' them showed the strongest wormicidal effect on Clonorchis sinensis. 2. The yellowish red fraction obtained by silica gel column chromatography was fractionated into 6 spots by silica gel thin layer chromatography with petroleum ether/chloroform (30/70, v/v). The R.f. 0.714 spot showed the strongest clonorchicidal effect. 3. The Rf. 0. 714 spot was further fractionated into 6 spots by silica gel thin layer chromatography with benzene/acetone (90/lO, v/v). The Rf. 0.800 spot revealed the strongest clonorchicidal effect. 4. The Rf. 0. 800 spot was chromatographed on silica gel column with benzene and 2 fractions were obtained. The second fraction of light brown colour represented the final purified fraction. 5. By these purification procedures, the clonorchicidal substance was purified 15-fold with 0.03% yield from the epidermal mucus of Cyprinus carpio. 6. Ten mg of the final fraction killed the cercaria in 26 min., the excysted metacercaria in 115 min., and the adult Clonorchis sinensis in 443 min. 7. Infra red and nuclear magnetic resonance spectrometric analysis of the purified substance revealed that the substance belongs to an ethyl ester of unsaturated fatty acid with 2 double bonds, 15 methylene groups and 1 methyl group.

循環濾過飼育槽에서 물의 흐름 方向에 따른 잉어(Cyprinus carpio) 成長에 關한 硏究

장계남 建國大學校 農畜大學院 1994 국내석사

순환 여과수조에서 注水의 흐름방향을 달리하여 이스라엘 잉어를 94년 1월 5일 - 동년 4월 5일 까지 88일간에 걸쳐 급이 사육한 결과는 다음과 같다. 1. 이스라엘 잉어를 주수의 수류 방향을 달리하여 사육한 결과 개체의 평균 성장도는 시계 방향(정)과 시계 반대 방향(역)이 무방향 (무)과 양방향 교대(변)에 비해 좋은 것으로 나타났다. 2. 방법별 방양 사육어에 대한 취양 결과 개체 평균 체장의 성장 비율이 전장은 정(1.2), 역(1.18), 변(1.17), 무(1.16) 순위이고, 체중은 정(2.45), 역(2.42), 무(2.16), 변(2.16)으로 4개 방법중 정 과 역 방향이 비교적 성장도가 높게 나타났으며, 사육조별 총 체중에 대한 성장도 역시 방양 당시보다 정(225.7%), 역(218.0%), 변(185.8%) 무(177.6%) 순으로 나타나 수류의 방향을 일정하게 한 사육조의 성장도가 높았고 가장 우수한 성장은 정 방향(시계방향) 수류의 수조가 나타났다. 비만도는 각 실험군간에 차가 없었다. 3. 魚體重의 1.5-2.0% (평균 1.7%)의 사료를 급이한 결과 飼料效率은 정(1.9), 역(2.0), 변(2.5), 무(2.7) 순으로 나타나 수류방향이 일정한 정과역수조에서 증육계수가 가장 높은 것으로 나타났다. 4. 실험후 잉어 근육의 성분 분석 결과 단백질 함량은 각 실험군간에 차가 없었으나 지방함량에 있어 정과 역 방향이 변과 무 방향 보다 높은 것으로 나타났으나 통계적 유의차는 없었다. Effect of different water drawing systems on the growth of carp was investigated. Carp were reared in four tanks with different water drawing systems as follwings; group Ⅰ, water circulated to the clockwise direction; group Ⅱ, water circulated to the counterclockwise direction; group Ⅲ, changed group Ⅰ and Ⅱ at weekly interval; group Ⅳ, water poured straightly to the center. Body weight gain, feed conversion efficiency and daily growth rates in the group Ⅰ and Ⅱ were higher than those of the group Ⅲ and Ⅳ. Protein content of muscle in carp was not different among the groups, however lipid content of muscle in the group Ⅰ and Ⅱ was higher than that of group Ⅲ and Ⅳ. However, these values were not significantly. Accordingly, the water drawing system with the clockwise circulation would be advantageous in carp culture.