마필농가의 생산성 향상을 위한 말허피스 바이러스 고효능백신 및 초고속 진단법 개발

목차 (Table of Contents)

• 목차
• 제1장 연구개발과제의 개요(The outline of research project) = 13
• 제2장 국내외 기술개발 현황(The present condition of technical development in and outside of country) = 15
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과(The contents and results of research project) = 17
• 제1절 재료 및 방법(Materials and methods) = 17
• 1. EHV-Fc Fusion 백신(EHV-Fc Fusion vaccine)
• 가. 바이러스 배양 및 정제(Culture and purification of virus)
• 나. 바이러스 불활화 및 정제(Inactivation and purification of virus)
• 다. 말 IgG Fc분획의 정제(Purification of Fc fraction of horse IgG)
• 라. EHV-Fc 단백 융합체의 제조 및 정제(Production and purification of EHV-Fc protein conjugate)
• 2. 백신 효능시험(Vaccine efficacy)
• 가. 수지상세포 표적화 기술개발(Development of dendritic cell targeting technology)
• 나. 말 수지상세포 배양 및 기능 확인(Culture of horse dendritic cells and confirmation of their function)
• 다. 표적화단백질 선별(Selection of target protein)
• 라. 수지상세포를 이용한 in vitro 시험법(체액성, 세포성면역) 확립(Establishment of in vitro experiments(humoral and cellular immunity) using dendritic cells)
• 마. 고효율 equine dendritic cells(DCs) 배양기술 확립(Establishment of high efficient culture techniques for equine dendritic cells)
• 바. Equine IgG-FITC에 대한 항원탐식과정 규명(Elucidation about the antigen uptake of equine IgG-FITC)
• 사. 마우스의 사용 및 관리(Mouse management)
• 아. EHV 백신후보물질의 접종 및 혈액채취(Inoculation of EHV vaccine candidate and blood sampling)
• 자. EHV특이항체의 정량을 위한 ELISA(체액성면역 측정)(ELISA for measuring of EHV-specific antibody(humoral immunity))
• 차. EHV특이세포성면역의 측정을 위한 유세포분석(세포성면역 측정)(FACS analysis for measuring of EHV-specific cellular immunity(cellular immunity))
• 카. 기타 실험(Other experiments)
• 3. EHV-1, -4에 대한 진단법(The diagnosis for EHV-1, -4)
• 가. 마우스면역(Mouse immunization)
• 나. Hybridoma 작성(Production of hybridoma cells)
• 다. Hybridoma의 screening(Hybridoma screening)
• 라. 단클론항체의 정제(Purification of monoclonal antibody)
• 마. ELISA kit
• 바. ICG kit
• 4. 제조합 gD(Recombinant gD)
• 가. Viral gpD gene 분리(Isolation of viral gpD gene)
• 나. gD gene cloning
• 다. Expression of EHV-1, 4 recombinant gD
• 라. Purification of EHV-1, 4 recombinant gD
• 5. EHV-3의 발생 보고(The outbreak report of EHV-3)
• 가. 환축(Infected horses)
• 나. 세포 및 바이러스 배양(Culture of cells and virus)
• 다. DNA 염기서열분석(DNA sequence analysis)
• 라. 전자현미경 관찰(The observation using EM)
• 마. EHV3 항체검사를 위한 ELISA(ELISA for EHV3 antibody)
• 제2절 결과(Results) = 54
• 1. EHV-Fc Fusion 백신(EHV-Fc Fusion vaccine)
• 가. 바이러스의 역가(Virus titer)
• 나. 바이러스 대량배양을 위한 최적 MOI(Optimal MOI for mass production of virus)
• 다. CPE별 배지와 MDBK 세포내의 virus titeration(Virus titration in media and MDBK cells depending on CPE)
• 라. 바이러스의 불활화(Inactivation of virus)
• 마. 말 IgG Fc분획의 정제(Purification of horse IgG Fc fraction)
• 바. EHV-Fc 단백 융합체의 제조(Production of EHV-Fc protein conjugate)
• 2. 백신 효능시험(Vaccine efficacy)
• 가. 말 수지상세포 및 T 림프구 분리, 배양(Isolation and culture of equine dendritic cells and T lymphocytes)
• 나. 수지상세포 표적화 이용 가능한 단백질의 탐색(Survey for dendritic cell targeting protein)
• 다. Mannosylated-FITC-albumin 적용실험(Mannosylated-FITC-albumin application)
• 라. 수지상세포의 림프구자극능에 대한 EHV 효과(EHV effects on the stimulatory capacity of dendritic cells)
• 마. 수지상세포 표면 Fc 수용체의 탐식작용 연구(Antigen uptake of Fc receptors on the surface of dendritic cells)
• 바. 백신후보물질의 체액성면역(humoral immunity) 시험결과(Humoral immune responses of vaccine candidates)
• 사. 백신후보물질의 세포성면역(cellular immunity) 시험결과(Cellular immune responses of vaccine candidates)
• 아. Live or Dead EHV-1 virus를 접종한 수지상세포의 면역반응시험(Immune function of dendritic cells inoculated with live or dead EHV-1 virus)
• 3. EHV에 대한 진단법(Diagnosis for EHV)
• 가. Monoclonal Abs의 특성(Characterization of monoclonal Abs)
• 나. ELISA(ELISA)
• 다. ICG(ICG)
• 4. 제조합 gD(Recombinant gD)
• 가. EHV-1 gD cloning 및 expression(Cloning and expression of EHV-1 gD)
• 나. EHV-4 gD cloning 및 expression(Cloning and expression of EHV-4 gD)
• 다. EHV-1 및,-4 sequencing(Sequencing of EHV-1 and -4)
• 5. EHV-3의 국내최초 보고(The first report of EHV-3 in Korea)
• 가. 실험마에서의 항체수준(Antibody titer of experimental horse)
• 나. EHV-3의 감염과 항체지속기간(Infection of EHV-3 and the duration of antibody titer)
• 다. PCR 검사와 비교한 ELISA의 민감도 및 특이도(Sensitivity and specificity of ELISA compared to PCR)
• 라. EHV3 원인 바이러스 분리 및 임상소견(Isolation of EHV3 and clinical symptoms)
• 마. 가검물의 EHV-3 PCR 분석(EHV-3 PCR analysis in samples)
• 바. 바이러스 배양(Virus culture)
• 사. 전자현미경 관찰(The observation using EM)
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도(Achievement of goals and contribution to related areas) = 110
• 제5장 연구개발결과의 활용계획(Application of results of research projects) = 112
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보(Scientific and technological information gained from outside of country) = 113
• 제7장 참고문헌(References) = 114