자궁 경부암 세포에서 시스플라틴이 소포체 스트레스에 미치는 영향

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Cisplatin is a widely used chemotherapeutic agent. A number of evidences in cytotoxic mechanism of cisplatin, including perturbation of redox status, increase in lipid peroxydation and formation of DNA adduct, have been suggested. After addition of cisplatin to human cervical cancer Hela cells, the author observed an increased expression of endoplasmic reticulum (ER) stress response genes through a gradual increase of nitric oxide and cytosolic Ca2+ concentration. Cisplatin-induced apoptosis was inhibited by iNOS inhibitor 1400W and intracellular Ca2+ chelator BAPTA-AM. These inhibitors also reduced mitochondrial apoptotic signals, such as mitochondrion membrane potential disruption and cytosolic release of cytochrome c, which eventually decreased the death of Hela cells. Taken together, ER may play an important role in cisplatin-induced apoptosis of Hela cells through the early release of Ca2+ and the late amplification of mitochondria-mediated apoptotic signals.

국문 초록 (Abstract)

항암제 cisplatin의 세포독성 기작은 활성산소종과 lipid peroxydation의 증가와 DNA adduct의 형성 등이 알려져 있다. 이 연구에서는 cisplatin이 자궁경부암 세포인 Hela 세포에서 과량의 NO와 세포내 칼슘 이온의 농도 증가를 통해 소포체 스트레스 관련 단백질들의 발현을 증가시킴을 확인하였다. Cisplatin에 의해 유도되어지는 세포자멸사 현상은 유도성 NO 합성효소의 특이적 억제제인 1400W와 세포내 칼슘 이온 소거제인 BAPTA-AM에 의해 감소되었다. 이러한 약물들은 또한 미토콘드리아의 막전위를 회복시킴으로 미토콘드리아에 의한 세포자멸사 신호전달을 억제하였다. 결과를 종합하면, cisplatin에 의한 세포자멸사 현상은 초기 시간대의 칼슘 이온 농도의 증가와 그에 따른 미토콘드리아에 의한 세포자멸사 신호전달체계에 의해 유도되어 지며 이때 소포체가 중요하게 관여되어 있음을 확인할 수 있었다.

목차 (Table of Contents)

• Ⅰ. 서 론 1
• Ⅱ. 재료 및 방법 3
• 1. 재료 3
• 1) 세포주 3
• 2) 시약 3
• 2. 방법 3
• 1) Hela 세포주 배양 및 시약처리 3
• 2) 세포 생존율 측정 4
• 3) Western blot 4
• 4) Flow cytometry 분석 5
• 5) DNA 추출 및 전기영동 5
• 6) DAPI 및 TUNEL 염색 6
• 7) 미토콘드리아 막 전위 측정 6
• 8) 통계 처리 7
• Ⅲ. 결 과 8
• 1. Cispaltin이 Hela 세포의 생존율에 미치는 영향 8
• 2. Cispaltin이 iNOS의 발현과 세포내 칼슘농도에 미치는 영향 10
• 3. 산화질소와 칼슘이 cispaltin에 의한 세포죽음에 미치는 영향 12
• 4. Cispaltin이 소포체 스트레스에 미치는 영향 16
• 5. Cispaltin이 미토콘드리아의 막 전위에 미치는 영향 17
• Ⅳ. 고 찰 21
• 참 고 문 헌 25