Lactic acid bacteria isolated from kimchi and shrimp(Palaeomon macrodactylus) inhibit the infection of porcine epidemic diarrhea virus in vitro

국문 초록 (Abstract)

"Probiotics" 는 장내의 microflora 의 조절에 의해서 사람이나 동물의 건강을 증진시키기 위한 미생물학적 agent 또는 미생물학적 product 의 사용으로 정의되고 면역반응 또는 직접적으로 pathogen 에 작용하는 능력의 증대를 유도할 수 있다. 가장 흔하게 잘 알려져 있는 probiotic microorganism 은 금세기의 낙농업과 다양한 식품에 사용되어져 왔던 유산균(lactic acid bacteria)이다.
이 연구에서 우리는 김치(Korean traditional fermented vegetable)와 한국의 새우 (Paleaomon macrodactylus)에서 분리된 36 lactic acid bacteria(LAB)를 돼지의 장내 질병인 porcine epidemic diarrhea virus (PEDV)에 대한 항 바이러스성 합성물의 분비를 연구하기 위해 screening 하였다. 36 lactic acid bacteria 로부터 얻어낸 배양액으로 microneutralization assay 를 통해 Vero 세포에서의 PEDV 감염억제 능력 실험과 focus reduction neutralization test를 수행하였다.
36 개의 lactic acid bacteria 로부터 얻어진 배양액들은 microneutralization assay 에 의해 테스트 되었고, 19 개의 배양액들이 1/10 희석된 Vero 세포내의 PEDV 의 감염을 억제한다는 것을 보여주었다.
항 PEDV 성향을 보여준 배양액들은 Lactobacillus casei (4), Lactobacillus bifermentans (1), Lactobacillus acidophilus (1), Lactobacillus reuteri (3), Lactobacillus salivarius subsp. salivarius (1), Leuconostoc mesenteroides subsp. cremosis (2), Leuconostoc paramesenteroides (1), Lactococcus lactis (2), Enterococcus faecalis (1), Enterococcus faecium (2)과 두개의 알려지지 않은 strain들로부터 유도되었다.
더 나아가, Focus reduction neutralization 실험에 의해 이들 11 가지 Strain 들로부터의 배양액 분석은 Vero 세포들 내의 PEDV 감염의 억제가 감염성의 바이러스 입자들의 감소(65%~87%)에 의해 이루어짐을 알게해 주었다. 이들 결과들에 기초하여 김치나 한국새우로부터 분리된 유산균내에서 항 PEDV 성 합성물들의 분비가 있음을 설명하였고 이들 항바이러스성 합성물들이 감염성의 바이러스입자들을 줄이고 바이러스에 직접적으로 작용함에 의해 in vitro 내에서 PEDV 감염을 억제시킬 수 있음을 설명하였다. 비록 Mechanism은 알 수 없었지만 항 바이러스성 합성물들에 관한 이전의 연구들에 기초하여, 바이러스 Envelope 파괴를 통해 이러한 작용들이 이루어 질것이라고 생각한다.

목차 (Table of Contents)

• CONTENTS = 0
• INTRODUCTION = 1
• MATERIALS AND METHODS = 5
• 1. Cell Culture = 5
• 2. Virus Stock = 6
• 3. Preparation of Polyclonal Antisera against PEDV = 8
• 4. Lactic Acid Bacteria Culture Supernatants = 9
• 5. Microneutralization Assay = 10
• 6. Focus Reduction Neutralization Test (FRNT) of LAB Culture Supernatants = 11
• RESULTS = 14
• 1. Detection and Titration of Mouse Polyclonal Antibodies to PEDV = 14
• 2. Detection of Anti-PEDV Activity by LAB Culture Supernatants by Microneutralization Assay = 14
• 3. Semi-quantitation of Antiviral Activity by LAB Culture Supernatant using FRNT = 16
• DISCUSSION = 29
• REFERENCES = 33
• 국문초록 = 40