혈관내피세포에서 Autophagy와 Ca2+에 의한 과발현된 lysyl-tRNA synthetase 분비기전 연구

국문 초록 (Abstract)

Aminoacyl-tRNA synthetase (ARS) 중 하나인 lysyl-tRNA synthetase (KRS)는 림프구에서 세포외로 분비되어 염증촉진제 역할을 한다고 알려져있다. 또한 암세포에서 KRS는 exosome을 통해 분비된다는 보고가 있었다. 그러나 KRS가 혈관내피세포에서 어떻게 분비되는지는 알려져 있지 않다. 따라서 본 학위논문에서는 혈관내피세포에서 과발현된 KRS가 어떤 경로를 통해 세포외간질액으로 분비되며 혈관에 어떤 영향을 미치는지 조사해 보았다. 흥미롭게도 혈청 기아, calcium ionophore 및 autophagy inducer는 KRS가 media로 분비되는 것을 향상시켰다. 이와 반대로 autophagy inhibitor는 KRS의 분비를 감소시켰다. 이러한 결과는 calcium ion과 분비유발 autophagy가 혈관내피세포에서 KRS의 분비와 관련되어 있음을 나타낸다. 또한 세포외로 분비된 KRS는 내피 세포의 염증 반응 및 세포 사멸을 유발하는 것으로 나타났다. 이에 비해 혈관 평활근 세포에서는 세포외 KRS가 세포 증식을 유도하였다. 선행연구에서는 KRS가 pro-atherogenic 요인인 oscillatory shear stress에 노출된 혈관에서 과도하게 발현되며 또한 KRS발현은 anti-atherogenic factor인 laminar shear stress에 노출된 혈관에서 하향 조절되는 것을 확인하였다. 본 학위논문에서는 동맥경화 유발 가능성을 갖는 KRS의 분비 경로와 분비되어 혈관에 미치는 영향을 관찰하여 KRS가 새로운 atherogenic factor로 작용하는 모델을 제안하였다.

목차 (Table of Contents)

• 목 차 (Contents)
• 국문초록 ⅰ
• 감사의 글 iii
• 목 차 v
• List of Figures vii
• Ⅰ. 서론 1
• Ⅱ. 방법 4
• 1. pEF6-KRS Vector에 GFP tagging 4
• 2. KRS 단백질의 생산 및 정제 4
• 1) 열충격 방법에 의한 형질전환 4
• 2) 단백질 발현 4
• 3) KRS 단백질의 정제 5
• 4) 정제된 KRS 단백질의 투석 5
• 5) KRS 단백질의 확인 및 정량 6
• 3. 세포배양 6
• 1) BAEC의 배양 6
• 2) Rao SMC의 배양 7
• 4. 형질주입 (transfection) 7
• 5. 단백질, 시약의 처리 7
• 6. 세포 용해물 준비 8
• 7. 세포 배양액에서의 KRS 분리 8
• 8. 웨스턴 블롯팅 8
• 9. Live cell imaging 9
• 10. 형광유세포분석법 (FACs) 9
• 11. 세포면역형광법 10
• Ⅲ. 결과 11
• Ⅳ. 그림 15
• Ⅴ. 논의 25
• Ⅵ. 참고문헌 27
• 외국어초록 31