RISS 학술연구정보서비스

검색
다국어 입력

http://chineseinput.net/에서 pinyin(병음)방식으로 중국어를 변환할 수 있습니다.

변환된 중국어를 복사하여 사용하시면 됩니다.

예시)
  • 中文 을 입력하시려면 zhongwen을 입력하시고 space를누르시면됩니다.
  • 北京 을 입력하시려면 beijing을 입력하시고 space를 누르시면 됩니다.
닫기
    인기검색어 순위 펼치기

    RISS 인기검색어

      A Study on Homeostatic Maintenance of Retinal Pigment Epithelium against Oxidative Stress with an Emphasis on Roles of Autophagy and Keratin 8 = 산화스트레스에 대한 망막색소상피세포의 항상성 유지에 관한 연구‐ : 세포 자가포식작용과 케라틴8의 역할을 중심으로

      한글로보기

      https://www.riss.kr/link?id=T14571985

      • 0

        상세조회
      • 0

        다운로드
      서지정보 열기
      • 내보내기
      • 내책장담기
      • 공유하기
      • 오류접수

      부가정보

      다국어 초록 (Multilingual Abstract)

      Cellular homeostasis maintains the intracellular environment against intra-, and/or extracellular stress. Autophagy, which is an important process to maintain the cellular homeostasis, degrades damaged organelles, unnecessary or dysfunctional proteins under cellular stress conditions such as starvation or oxidative damage. Senescence is caused by accumulation of cell damages due to loss of homeostasis under long-term exposure of stressful stimuli. Loss of homeostasis and accumulated cellular damage caused by autophagy disorder are known to lead to age-related disorders, such as Alzheimer's disease and Parkinson's disease.
      Age-related macular degeneration (AMD), which causes the vision loss among people age 50 and older, is a disease that damages the macula in the central portion of the retina. Accumulation of detrimental metabolic products such as intracellular lipofuscin and extracellular drusen is possibly caused by imbalance between production of damaged cellular components and degradation. Early stage of AMD is established by atrophy delineated by retinal pigment epithelium (RPE) thinning or depigmentation that precede geographic atrophy. In advanced stages of AMD, geographic atrophy of RPE and/or development of new blood vessels (choroidal neovascularization, CNV) result in death of photoreceptors and central vision loss; the first is called dry type AMD and the second is called wet type AMD. The wet type AMD is characterized by an abnormal growth of new blood vessels that often causes leakage of blood and fluid. On the other hand, dry type AMD is characterized by accumulation of the extracellular waste products (i.e. drusen) in a layer of the retina. Because main therapeutic target for wet type AMD treatment is a vascular endothelial growth factor (VEGF), anti-VEGF agents have been used as a standard treatment for CNV. However, there is no currently proven effective treatment for dry type AMD, which accounts for nearly 90% of AMD patients. Although extensive research efforts have focused on understanding the basic of dry type AMD, pathogenesis of AMD remains to be elucidated.
      In this study, I investigated the molecular pathogenesis of AMD through the maintenance of RPE under oxidative stress condition in terms of cellular homeostasis with an emphasis on roles of autophagy and intermediate cytoskeleton, Keratin 8 (KRT8). Keratin 8 has been selected as AMD pathogenesis marker protein from the previous proteomics study based on AMD patients’ aqueous humoral samples. In the first chapter, I investigated roles of autophagy on the cellular homeostasis in RPE under oxidative stress. Human RPE cells undergo mechanistic target of rapamycin (mTOR)-mediated autophagy pathway to protect RPE from apoptotic cell death under reactive oxygen species (ROS) stress conditions. Importantly, RPE cells under ROS stress condition enhances expression of KRT8 along with autophagy induction. Keratin 8 was observed to facilitate autophagosome-lysosome fusion in RPE cells under oxidative stress.
      In the second chapter, role of KRT8 has been investigated on RPE homeostasis under ROS condition in terms of epithelial-mesenchymal transition (EMT). I found that phosphorylation of KRT8 induces RPE degeneration through pathologic EMT of RPE cells under oxidative stress. KRT8 is perinuclear reorganized through phosphorylation by extracellular signal-regulated kinases (ERK) under oxidative stress condition. Perinuclear reorganization of phosphorylated KRT8 leads to increase of cell migration and induction of EMT. I demonstrated that inhibition of KRT8 phosphorylation and its subsequent perinuclear reorganization by ERK inhibitor, PD98059, suppresses oxidative stress-induced cell degeneration both in vitro and in vivo.
      In the last chapter, I studied a possible role of KRT8 on mitochondrial homeostasis in RPE under oxidative stress. KRT8 expression facilitates mitochondrial fission and mitophagy in RPE cells under oxidative stress, which leads to suppression of necrotic cell death. I found that mitophagy, a selective degradation process of mitochondria by autophagy, occurs sequentially after mitochondrial fission in RPE cells that express KRT8 under oxidative stress. In contrast, when mitochondrial fission does not occur properly, mitochondria were swollen to large shape (i.e. enlargement) due to accumulation of ROS stress. The cytoprotective effect of KRT8 is supposed to be achieved by mitochondrial fission and mitophagy via facilitation of the interaction between endoplasmic reticulum and mitochondria under oxidative stress condition.
      Taken together, I studied homeostatic maintenance of RPE against oxidative stress with an emphasis on roles of autophagy and cytoskeletal protein KRT8. Through the doctorate study, I found three important results on molecular pathogenesis of AMD, as followings; 1) Autophagy protects retinal pigment epithelium from apoptotic cell death under oxidative stress, 2) Phosphorylated keratin 8 induces degeneration of retinal pigment epithelium through epithelial-mesenchymal transition, and 3) Keratin 8 suppresses necrotic cell death under oxidative stress through mitophagy. These findings will improve current understanding of the molecular pathology of AMD and suggest a therapeutic strategy for the treatment of AMD by preventing RPE degeneration under oxidative stress.
      번역하기

      Cellular homeostasis maintains the intracellular environment against intra-, and/or extracellular stress. Autophagy, which is an important process to maintain the cellular homeostasis, degrades damaged organelles, unnecessary or dysfunctional proteins...

      Cellular homeostasis maintains the intracellular environment against intra-, and/or extracellular stress. Autophagy, which is an important process to maintain the cellular homeostasis, degrades damaged organelles, unnecessary or dysfunctional proteins under cellular stress conditions such as starvation or oxidative damage. Senescence is caused by accumulation of cell damages due to loss of homeostasis under long-term exposure of stressful stimuli. Loss of homeostasis and accumulated cellular damage caused by autophagy disorder are known to lead to age-related disorders, such as Alzheimer's disease and Parkinson's disease.
      Age-related macular degeneration (AMD), which causes the vision loss among people age 50 and older, is a disease that damages the macula in the central portion of the retina. Accumulation of detrimental metabolic products such as intracellular lipofuscin and extracellular drusen is possibly caused by imbalance between production of damaged cellular components and degradation. Early stage of AMD is established by atrophy delineated by retinal pigment epithelium (RPE) thinning or depigmentation that precede geographic atrophy. In advanced stages of AMD, geographic atrophy of RPE and/or development of new blood vessels (choroidal neovascularization, CNV) result in death of photoreceptors and central vision loss; the first is called dry type AMD and the second is called wet type AMD. The wet type AMD is characterized by an abnormal growth of new blood vessels that often causes leakage of blood and fluid. On the other hand, dry type AMD is characterized by accumulation of the extracellular waste products (i.e. drusen) in a layer of the retina. Because main therapeutic target for wet type AMD treatment is a vascular endothelial growth factor (VEGF), anti-VEGF agents have been used as a standard treatment for CNV. However, there is no currently proven effective treatment for dry type AMD, which accounts for nearly 90% of AMD patients. Although extensive research efforts have focused on understanding the basic of dry type AMD, pathogenesis of AMD remains to be elucidated.
      In this study, I investigated the molecular pathogenesis of AMD through the maintenance of RPE under oxidative stress condition in terms of cellular homeostasis with an emphasis on roles of autophagy and intermediate cytoskeleton, Keratin 8 (KRT8). Keratin 8 has been selected as AMD pathogenesis marker protein from the previous proteomics study based on AMD patients’ aqueous humoral samples. In the first chapter, I investigated roles of autophagy on the cellular homeostasis in RPE under oxidative stress. Human RPE cells undergo mechanistic target of rapamycin (mTOR)-mediated autophagy pathway to protect RPE from apoptotic cell death under reactive oxygen species (ROS) stress conditions. Importantly, RPE cells under ROS stress condition enhances expression of KRT8 along with autophagy induction. Keratin 8 was observed to facilitate autophagosome-lysosome fusion in RPE cells under oxidative stress.
      In the second chapter, role of KRT8 has been investigated on RPE homeostasis under ROS condition in terms of epithelial-mesenchymal transition (EMT). I found that phosphorylation of KRT8 induces RPE degeneration through pathologic EMT of RPE cells under oxidative stress. KRT8 is perinuclear reorganized through phosphorylation by extracellular signal-regulated kinases (ERK) under oxidative stress condition. Perinuclear reorganization of phosphorylated KRT8 leads to increase of cell migration and induction of EMT. I demonstrated that inhibition of KRT8 phosphorylation and its subsequent perinuclear reorganization by ERK inhibitor, PD98059, suppresses oxidative stress-induced cell degeneration both in vitro and in vivo.
      In the last chapter, I studied a possible role of KRT8 on mitochondrial homeostasis in RPE under oxidative stress. KRT8 expression facilitates mitochondrial fission and mitophagy in RPE cells under oxidative stress, which leads to suppression of necrotic cell death. I found that mitophagy, a selective degradation process of mitochondria by autophagy, occurs sequentially after mitochondrial fission in RPE cells that express KRT8 under oxidative stress. In contrast, when mitochondrial fission does not occur properly, mitochondria were swollen to large shape (i.e. enlargement) due to accumulation of ROS stress. The cytoprotective effect of KRT8 is supposed to be achieved by mitochondrial fission and mitophagy via facilitation of the interaction between endoplasmic reticulum and mitochondria under oxidative stress condition.
      Taken together, I studied homeostatic maintenance of RPE against oxidative stress with an emphasis on roles of autophagy and cytoskeletal protein KRT8. Through the doctorate study, I found three important results on molecular pathogenesis of AMD, as followings; 1) Autophagy protects retinal pigment epithelium from apoptotic cell death under oxidative stress, 2) Phosphorylated keratin 8 induces degeneration of retinal pigment epithelium through epithelial-mesenchymal transition, and 3) Keratin 8 suppresses necrotic cell death under oxidative stress through mitophagy. These findings will improve current understanding of the molecular pathology of AMD and suggest a therapeutic strategy for the treatment of AMD by preventing RPE degeneration under oxidative stress.

      더보기

      국문 초록 (Abstract)

      세포의 항상성은 세포의 내·외부에서 발생하는 스트레스 자극에도 세포 내 환경을 일정하게 유지해준다. 세포의 항상성 유지에 중요한 자가포식작용은 영양결핍 혹은 스트레스 조건에서 손상된 세포 소기관, 혹은 불필요하거나 비정상적인 단백질을 분해하는 역할을 한다. 노화는 계속되는 스트레스 자극에 의해 세포가 항상성을 잃게 되고 이로 인한 세포 손상이 축적되어 나타나게 된다. 알츠하이머 병, 파킨슨 병 등과 같은 대부분의 노인성 질환은 자가포식작용의 이상, 그로인한 항상성 기능 저하 및 세포 손상이 그 원인으로 알려져 있다.
      나이관련 황반변성(age-related macular degeneration, AMD)은 50대 이상의 노년층에서 실명을 야기하는 대표적인 노인성 질환으로 망막에 존재하는 황반부에 손상이 일어나면서 나타나게 된다. 세포 내 리포푸신(lipofuscin) 세포 외 드루젠(drusen)과 같은 해로운 세포 대사 산물의 축적은 아마도 손상된 세포 구성 성분의 분해와 생성의 불균형으로부터 기인하는데, 이러한 해로운 세포 대사산물의 축적이 황반변성의 병리기전으로 인식된다. 나이관련 황반변성의 초기단계(건성 황반변성)는 망막 색소 상피층(retinal pigment epithelium, RPE)의 위축과 색소 소실에 의한 위축에 의해 이루어지며, 이는 지도모양위축증(geographic atrophy)으로 발전된다. 나이관련 황반변성의 심화단계인 지도모양위축증과 신생혈관 생성(neovascularization, CNV)은 광수용체 세포의 죽음과 중심시력의 상실을 일으킨다. 습성 황반변성은 비정상적인 혈관 생성과 혈액 누수가 특징적으로 나타나며 건성 황반변성의 경우 세포 대사 찌꺼기인 드루젠이 망막층과 그 아래 존재하는 기저막 사이에 축적되어 나타난다. 습성 황반변성은 직접적인 원인(예, vascular endothelial growth factor, VEGF; 혈관내피세포 성장인자)이 규명되어 있어 이미 많은 치료제도 개발되어 있지만, 환자의 약 90% 비율을 차지하는 건성 황반변성은 확실한 발병기전이 알려져 있지 않으며 치료제 역시 없는 상황이다.
      본 연구에서는 황반변성의 분자병리학적인 이해를 위하여 산화스트레스에 대한 망막색소상피세포의 항상성 유지에 관하여 중간 세포골격인 케라틴8과 자가포식작용의 역할을 중점적으로 다루었다. 케라틴8은 나이관련 황반변성 환자로부터 얻어낸 방수(aqueous humor) 시료를 바탕으로 한 이전 단백질체(proteomics) 연구를 통해 나이관련 황반변성의 질병 마커 단백질로 선택되었다.
      첫 번째 장에서는, 산화스트레스 하에서 망막색소상피세포의 세포 항상성에 대한 자가포식작용의 역할을 연구했다. 사람의 망막상피세포는 산화스트레스 조건에서 세포 사멸로부터 세포를 보호하기 위해 mTOR (mechanistic target of rapamycin)를 매개로 하는 자가포식작용 경로를 겪는다. 특히, 산화스트레스 하에 망막색소상피세포는 자가포식작용의 유도와 함께 케라틴8의 발현이 증가됨을 관찰하였다. 케라틴8은 산화스트레스 하에서 망막상피세포의 자가포식체와 리소좀의 융합을 촉진하는 것으로 관찰되었다.
      두 번째 장에서는 상피-간엽세포화(epithelial-mesenchymal transition, EMT)에 관한 산화스트레스 조건의 망막색소상피세포 항상성에서 케라틴8의 역할에 대해 연구하였다. 케라틴8의 인산화가 산화스트레스 하에서 망막색소상피세포의 병리학적 상피-간엽세포화를 통해 망막상피세포 변성을 유도한다는 것을 발견했다. 산화스트레스 조건 하에서 케라틴8은 세포외 신호조절인산화효소(extracellular signal-regulated kinases, ERK)에 의한 인산화를 통해 핵 주위로 재배열된다. 인산화 된 케라틴8의 재배열은 세포 이동성 증가 및 상피-간엽세포화를 야기한다. ERK 억제제(PD98059)를 이용하여 케라틴8의 인산화와 이에 따른 핵 주변으로의 재배열을 억제하였고, 이는 산화스트레스에 의한 세포 변성을 저해한다는 것을 밝혔다.
      마지막 장에서는 산화스트레스 조건 하에 망막색소상피세포의 미토콘드리아 항상성에 대한 케라틴8의 역할과 기능을 연구하였다. 산화스트레스에 노출된 망막색소상피세포에서 케라틴8의 발현은 세포 괴사를 억제하는 미토콘드리아의 분열과 자가포식작용을 활발히 일어나게 한다. 미토콘드리아 선택적 자가포식작용(mitophagy)은 산화스트레스 조건의 케라틴8을 발현하는 망막색소상세포에서 미토콘드리아의 분열이 진행되고 난 후 순차적으로 일어나게 된다. 그러나 미토콘드리아의 분열이 잘 이루어지지 못하면 미토콘드리아 내 손상이 축적되어 부풀어오른 형태로 변화하게 된다. 케라틴8의 세포보호효과는 소포체와 미토콘드리아 간의 상호작용 조절을 증가시켜 미토콘드리아의 분열 및 자가포식작용을 도와 나타나는 것으로 보여진다.
      정리하자면, 본 연구는 산화스트레스에 대한 망막색소상피세포의 항상성 유지를 자가포식작용과 세포골격 단백질인 케라틴8의 역할을 중점적으로 다루어 그 분자기전을 규명한 것이다. 특히, 나이관련 황반변성의 분자생물학적 발병기전에 관한 세 가지 중요한 결과를 발견했다. 1) 자가포식작용은 산화스트레스 하에서 망막색소상피세포를 세포 사멸로부터 보호한다; 2) 인산화된 케라틴8은 상피-간엽세포화를 통해 망막색소상피세포의 변성을 유도한다; 3) 케라틴8은 미토콘드리아 선택적 자가포식작용을 통해 산화스트레스에 의한 세포괴사를 억제한다. 이러한 연구 결과는 나이관련 황반변성의 분자병리학적 이해를 향상시킬 것이며, 산화스트레스에 의한 망막색소상피세포의 변성을 억제하여 황반변성에 대한 치료전략을 제안할 것이다.
      번역하기

      세포의 항상성은 세포의 내·외부에서 발생하는 스트레스 자극에도 세포 내 환경을 일정하게 유지해준다. 세포의 항상성 유지에 중요한 자가포식작용은 영양결핍 혹은 스트레스 조건에서 ...

      세포의 항상성은 세포의 내·외부에서 발생하는 스트레스 자극에도 세포 내 환경을 일정하게 유지해준다. 세포의 항상성 유지에 중요한 자가포식작용은 영양결핍 혹은 스트레스 조건에서 손상된 세포 소기관, 혹은 불필요하거나 비정상적인 단백질을 분해하는 역할을 한다. 노화는 계속되는 스트레스 자극에 의해 세포가 항상성을 잃게 되고 이로 인한 세포 손상이 축적되어 나타나게 된다. 알츠하이머 병, 파킨슨 병 등과 같은 대부분의 노인성 질환은 자가포식작용의 이상, 그로인한 항상성 기능 저하 및 세포 손상이 그 원인으로 알려져 있다.
      나이관련 황반변성(age-related macular degeneration, AMD)은 50대 이상의 노년층에서 실명을 야기하는 대표적인 노인성 질환으로 망막에 존재하는 황반부에 손상이 일어나면서 나타나게 된다. 세포 내 리포푸신(lipofuscin) 세포 외 드루젠(drusen)과 같은 해로운 세포 대사 산물의 축적은 아마도 손상된 세포 구성 성분의 분해와 생성의 불균형으로부터 기인하는데, 이러한 해로운 세포 대사산물의 축적이 황반변성의 병리기전으로 인식된다. 나이관련 황반변성의 초기단계(건성 황반변성)는 망막 색소 상피층(retinal pigment epithelium, RPE)의 위축과 색소 소실에 의한 위축에 의해 이루어지며, 이는 지도모양위축증(geographic atrophy)으로 발전된다. 나이관련 황반변성의 심화단계인 지도모양위축증과 신생혈관 생성(neovascularization, CNV)은 광수용체 세포의 죽음과 중심시력의 상실을 일으킨다. 습성 황반변성은 비정상적인 혈관 생성과 혈액 누수가 특징적으로 나타나며 건성 황반변성의 경우 세포 대사 찌꺼기인 드루젠이 망막층과 그 아래 존재하는 기저막 사이에 축적되어 나타난다. 습성 황반변성은 직접적인 원인(예, vascular endothelial growth factor, VEGF; 혈관내피세포 성장인자)이 규명되어 있어 이미 많은 치료제도 개발되어 있지만, 환자의 약 90% 비율을 차지하는 건성 황반변성은 확실한 발병기전이 알려져 있지 않으며 치료제 역시 없는 상황이다.
      본 연구에서는 황반변성의 분자병리학적인 이해를 위하여 산화스트레스에 대한 망막색소상피세포의 항상성 유지에 관하여 중간 세포골격인 케라틴8과 자가포식작용의 역할을 중점적으로 다루었다. 케라틴8은 나이관련 황반변성 환자로부터 얻어낸 방수(aqueous humor) 시료를 바탕으로 한 이전 단백질체(proteomics) 연구를 통해 나이관련 황반변성의 질병 마커 단백질로 선택되었다.
      첫 번째 장에서는, 산화스트레스 하에서 망막색소상피세포의 세포 항상성에 대한 자가포식작용의 역할을 연구했다. 사람의 망막상피세포는 산화스트레스 조건에서 세포 사멸로부터 세포를 보호하기 위해 mTOR (mechanistic target of rapamycin)를 매개로 하는 자가포식작용 경로를 겪는다. 특히, 산화스트레스 하에 망막색소상피세포는 자가포식작용의 유도와 함께 케라틴8의 발현이 증가됨을 관찰하였다. 케라틴8은 산화스트레스 하에서 망막상피세포의 자가포식체와 리소좀의 융합을 촉진하는 것으로 관찰되었다.
      두 번째 장에서는 상피-간엽세포화(epithelial-mesenchymal transition, EMT)에 관한 산화스트레스 조건의 망막색소상피세포 항상성에서 케라틴8의 역할에 대해 연구하였다. 케라틴8의 인산화가 산화스트레스 하에서 망막색소상피세포의 병리학적 상피-간엽세포화를 통해 망막상피세포 변성을 유도한다는 것을 발견했다. 산화스트레스 조건 하에서 케라틴8은 세포외 신호조절인산화효소(extracellular signal-regulated kinases, ERK)에 의한 인산화를 통해 핵 주위로 재배열된다. 인산화 된 케라틴8의 재배열은 세포 이동성 증가 및 상피-간엽세포화를 야기한다. ERK 억제제(PD98059)를 이용하여 케라틴8의 인산화와 이에 따른 핵 주변으로의 재배열을 억제하였고, 이는 산화스트레스에 의한 세포 변성을 저해한다는 것을 밝혔다.
      마지막 장에서는 산화스트레스 조건 하에 망막색소상피세포의 미토콘드리아 항상성에 대한 케라틴8의 역할과 기능을 연구하였다. 산화스트레스에 노출된 망막색소상피세포에서 케라틴8의 발현은 세포 괴사를 억제하는 미토콘드리아의 분열과 자가포식작용을 활발히 일어나게 한다. 미토콘드리아 선택적 자가포식작용(mitophagy)은 산화스트레스 조건의 케라틴8을 발현하는 망막색소상세포에서 미토콘드리아의 분열이 진행되고 난 후 순차적으로 일어나게 된다. 그러나 미토콘드리아의 분열이 잘 이루어지지 못하면 미토콘드리아 내 손상이 축적되어 부풀어오른 형태로 변화하게 된다. 케라틴8의 세포보호효과는 소포체와 미토콘드리아 간의 상호작용 조절을 증가시켜 미토콘드리아의 분열 및 자가포식작용을 도와 나타나는 것으로 보여진다.
      정리하자면, 본 연구는 산화스트레스에 대한 망막색소상피세포의 항상성 유지를 자가포식작용과 세포골격 단백질인 케라틴8의 역할을 중점적으로 다루어 그 분자기전을 규명한 것이다. 특히, 나이관련 황반변성의 분자생물학적 발병기전에 관한 세 가지 중요한 결과를 발견했다. 1) 자가포식작용은 산화스트레스 하에서 망막색소상피세포를 세포 사멸로부터 보호한다; 2) 인산화된 케라틴8은 상피-간엽세포화를 통해 망막색소상피세포의 변성을 유도한다; 3) 케라틴8은 미토콘드리아 선택적 자가포식작용을 통해 산화스트레스에 의한 세포괴사를 억제한다. 이러한 연구 결과는 나이관련 황반변성의 분자병리학적 이해를 향상시킬 것이며, 산화스트레스에 의한 망막색소상피세포의 변성을 억제하여 황반변성에 대한 치료전략을 제안할 것이다.

      더보기

      목차 (Table of Contents)

      • Chapter I. Autophagy protects retinal pigment epithelium from apoptotic cell death under oxidative stress 1
      • 1.1. Introduction 1
      • 1.2. Materials and Methods 5
      • 1.2.1. Reagents and antibodies 5
      • 1.2.2. Cell culture and transfection 6
      • Chapter I. Autophagy protects retinal pigment epithelium from apoptotic cell death under oxidative stress 1
      • 1.1. Introduction 1
      • 1.2. Materials and Methods 5
      • 1.2.1. Reagents and antibodies 5
      • 1.2.2. Cell culture and transfection 6
      • 1.2.3. Reactive oxygen species detection 6
      • 1.2.4. Autophagy assay; GFP-LC3B analysis 7
      • 1.2.5. Autophagosome fusion assay; mCherry-EGFP-LC3B analysis 7
      • 1.2.6. Transmission electron microscopy 8
      • 1.2.7. Autophagy assay; autophagy fluorescence detection 9
      • 1.2.8. Western blot analysis 9
      • 1.2.9. Apoptotic cell death analysis 10
      • 1.2.10. Statistical analysis 10
      • 1.3. Results 11
      • 1.3.1. Superoxide radicals induce autophagy in retinal pigment epithelial cells 11
      • 1.3.2. Activation of the AKT-MTOR pathway and autophagy induction protects RPE cells from apoptotic cell death under oxidative stress 15
      • 1.3.3. Oxidative stress induces upregulation of KRT8 during autophagy 21
      • 1.3.4. KRT8 facilitates autophagosome-lysosome fusion during autophagy in RPE cells 25
      • 1.3.5. KRT8 protects RPE cells from apoptotic cell death 33
      • 1.4. Discussion 36
      • Chapter II. Phosphorylated keratin 8 induces degeneration of retinal pigment epithelium through epithelial-mesenchymal transition 38
      • 2.1. Introduction 38
      • 2.2. Materials and Methods 40
      • 2.2.1. Reagents and antibodies 40
      • 2.2.2. Western blot analysis 40
      • 2.2.3. Flow cytometric analysis 41
      • 2.2.4. Autophagy assay; GFP-LC3B analysis 41
      • 2.2.5. Cell migration assay 42
      • 2.2.6. Experimental animals and immunostaining 43
      • 2.2.7. Statistical analysis 44
      • 2.3. Results 45
      • 2.3.1. Oxidative stress induces ERK-mediated KRT8 phosphorylation and perinuclear reorganization in RPE cells 45
      • 2.3.2. KRT8 phosphorylation elicits epithelial-mesenchymal transition and migration in RPE cells under oxidative stress 50
      • 2.3.3. ERK inhibitor inhibits oxidative stress-induced RPE degeneration in vivo. 53
      • 2.4. Discussion 56
      • Chapter III. Keratin 8 suppresses necrotic cell death of retinal pigment epithelium under oxidative stress through mitochondrial fission-mediated mitophagy 58
      • 3.1. Introduction 58
      • 3.2. Materials and Methods 60
      • 3.2.1. Reagents and antibodies 60
      • 3.2.2. Intracellular and mitochondrial reactive oxygen species detection 60
      • 3.2.3. Analysis of mitochondrial morphology 61
      • 3.2.4. Transmission electron microscopy 62
      • 3.2.5. Flow cytometric analysis; Mitochondrial damage detection 63
      • 3.2.6. Mitophagy assay; GFP-LC3B analysis 63
      • 3.2.7. Western blot analysis 64
      • 3.2.8. Flow cytometric analysis; Cell death detection 64
      • 3.2.9. Mitochondrial calcium ion detection 65
      • 3.2.10. Endoplasmic reticulum-mitochondrial interaction analysis 65
      • 3.3. Results 67
      • 3.3.1. KRT8 promotes mitochondrial fission and suppresses mitochondrial damage in RPE cells under oxidative stress 67
      • 3.3.2. Mitophagy degrades fragmented mitochondria but not enlarged mitochondria 74
      • 3.3.3. KRT8 facilitates mitochondrial fragmentation and subsequent mitochondrial salvage 78
      • 3.3.4. Mitochondrial fission protects RPE cells from necrotic cell death under oxidative stress 80
      • 3.3.5. KRT8 suppresses calcium ion accumulation in mitochondria and modulates the interaction between endoplasmic reticulum and mitochondria 82
      • 3.4. Discussion 86
      • References 88
      • Abstract (in Korean) 99
      더보기

      분석정보

      View

      상세정보조회

      0

      Usage

      원문다운로드

      0

      대출신청

      0

      복사신청

      0

      EDDS신청

      0

      동일 주제 내 활용도 TOP

      더보기

      주제

      연도별 연구동향

      연도별 활용동향

      연관논문

      연구자 네트워크맵

      공동연구자 (7)

      유사연구자 (20) 활용도상위20명

      이 자료와 함께 이용한 RISS 자료

      나만을 위한 추천자료

      해외이동버튼