CD8+ T 세포에서 4-1BB cross-linking에 의해 활성화되는 TCR signaling pathway 연구 = Cross linking 4-1BB activates TCR signaling pathways in CD8+ T cell

국문 초록 (Abstract)

공동자극분자 중 하나인 4-1BB는 TNF 수용체 superfamily의 member로 T세포와 T세포수용체의 ligation에 의해서 발현된다. 4-1BB는 증식을 촉진시키고 T세포의 activation induced cell death (AICD)를 억제하는 공동자극분자로 흔히 알려져 있다. 4-1BB는 allo-graft transplantation, 암의 박멸, integrin를 매개로 하는 T세포접착, T세포를 매개로 하는 cytolysis 등에 면역 거부 반응을 위한 결정적인 분자로 평가되어지고 있다. 그리고 4-1BB에 의해 조절되는 공동자극은 CD4^(+)와 CD8^(+)T세포의 반응도 포함한다.
4-1BB 자극은 CD8^(+) T세포에서 TCR signaling molecule 인 Lck, LAT, SLP-76과 ITAM motif의 tyrosine phosphorylation을 증가 시킨다.
이 연구에서, 4-1BBL를 발현하고 있는 p815 세포와 활성화된 CD8^(+) T세포를 incubation 하여 T세포와 p815세포의 contact을 유도함으로써, CD8^(+) T세포의 lipid raft 부분이 재구성된다. 4-1BB ligation 에 의해서 CD8^(+) T세포의 TRAF2, PKC, PLC-γ1, SLP-76 과 같은 molecule이 translocation 하게 된다.
Cross-linking 4-1BB는 CD8^(+) T세포내 Ca^(2+)의 농도를 증가시킨다.
PLC-1을 translocation 시키고 IκB-α를 degradation 시키는 4-1BB는 methylbeta-cyclodextrin 으로 형성된 lipid raft를 파괴 시킬 수 있다.
따라서 TNFR family인 4-1BB는 T세포의 공동자극분자 수용체이고, CD8^(+) T세포의 TCR signaling pathway를 활성화 시킨다는 것을 제시한다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Cross-linking 4-1BB increased tyrosine phosphorylation of TCR signaling molecules such as CD3ε, CD3ζ, Lck, LAT and SLP-76. Incubation of activated CD8^(+) T cells with p815 expressing 4-1BBL leads to the redistribution of the lipid raft domains and Lck on T cell membrane to a contact area with p815 cell, and the recruitment of 4-1BB, TRAF2 and pTyr proteins into the raft domains. 4-1BB ligation induced the translocation of TRAF2, PKC-θ, PLC-γ1 and SLP-76 to detergent-insoluble compartments in CD8^(+) T cells. Cross-linking 4-1BB increased intracellular Ca^(2+) levels of CD8^(+) T cells. 4-1BB-evoked translocation of PLC-γ1 and degradation of IκB-α were inhibited by disrupting the formation of lipid raft with methyl-β-cyclodextrin. These findings demonstrate that 4-1BB, a TNFR family, is a T cell co-stimulatory receptor that activates TCR signaling pathways in CD8^(+) T cells.

목차 (Table of Contents)

• 목차
• 국문 요약 = 1
• Ⅰ. 서론 = 2
• Ⅱ. 실험 재료 및 방법 = 4
• 1. Mice, reagent, and Abs = 4
• 2. CD8+ T cell purification = 5
• 3. T cell stimulation = 5
• 4. T cell proliferation assay = 5
• 5. Immunopreciptation and Western blotting = 6
• 6. Cell fractionation = 6
• 7. Immunofluorescence staining = 7
• 8. Imaging of cytosolic Ca2+ = 7
• Ⅲ. 실험결과 = 8
• 1.Cross-linking 4-1BB activates TCR-mediated signals in primary CD8+ T lymphocytes. = 8
• 2. 4-1BB engagement by 4-1BB ligand leads to the reorganization of lipid raft and Lck, and the recruitment of pTyr proteins into lipid rafts. = 11
• 3. 4-1BB ligation recruits 4-1BB and TRAF2 into lipid rafts = 14
• 4. 4-1BB cross-linking triggers the translocation of TRAF2 and TCR signaling. molecules into detergent-insoluble fractions = 16
• 5.4-1BB ligation increases intracellular Ca2+ = 19
• 6.Methyl- β-cyclodextrin blocks 4-1BB-mediated signaling pathways = 21
• Ⅳ. 고찰 = 23
• References = 25
• Abstract = 30