PCR-based S.pombe transformation for systematic deletion mutants and functional analysis of human gene

국문 초록 (Abstract)

S. pombe의 genomic sequence 염기서열의 분석결과에 따르면 유전자의 기능적 반복성이 적으며 S. pombe에는 진핵세포에서 중요한 세포의 기능과 질병에 관련된 유전자들이 많은 양 차지하고 있다고 보고되었다. 따라서 S. pombe는 약물개발을 위한 cell-based 시스템으로서 인간 유전자의 기능연구에 효율적인 방법으로 쓰일 수 있다. 본 실험에서는 S. pombe의 genome-wide systematic deletion mutant 제조를 완성하기 위한 기반을 마련하기 위하여 이미 deletion mutant가 제조 된 바 있는 두 개의 유전자인 sum1, gef3를 직접 deletion 하여 gene deleted S. pombe를 제조 해 보았다. sum1은 S. pombe에서 essential gene으로써 chromosome 1에 존재하고, gef3은 non-essential gene으로써 chromosome 2에 존재한다. 이렇듯 gene의 essentiality를 증명하기 위하여 deletion mutant를 만드는 과정 중 yeast transformation을 위한 DNA 단편의 제조를 완성 하였으며, agarose gel electrophoresis를 통하여 확인 할 수 있었다. 이와 같이 임의로 제조된 DNA 단편은 S. pombe에 transformation 시킴으로써 mutant를 만들기 위한 핵심 요소가 될 것이다.