LPS에 의해 활성화된 BV-2 미세아교세포로부터 분비되는 염증매개물질에 대한 마테·황칠의 효과 = Effects of llex paraguariensis and Dendropanax morbifera on inflammatory mediators released from lipopolysaccharide-activated BV-2 microglia

국문 초록 (Abstract)

미세아교세포의 병적 염증반응은 중추신경계의 신경병증에 관여하는 것으로 알려져 있다. 이를 치료하기 위한 다양한 약제가 활용되고 있으나, 장기간 약제를 복용할 경우 부작용의 위험을 초래하는 것으로 알려져 있다. 이러한 이유로 항염증 작용을 갖는 부작용이 거의 없는 천연물 및 그 혼합물을 이용한 치료 소재 발굴을 위한 연구가 필요하다. 따라서 본 연구는 마태·황칠 혼합추출물이 LPS로 유도된 mouse BV-2 미세아교세포에서 분비 되는 염증매개물질에 대하여 활성 억제효과를 확인하고자 하였다.
마테·황칠 혼합 추출물의 항염증 효과를 평가하기 위하여 LPS를 적용하여 BV-2 미세아교세포의 염증반응을 유도하였다. 마태·황칠의 혼합 비율을 확인하기 위해, 활성화된 미세아교세포가 존재하는 배지에 희석 비율을 달리하여 마테·황칠을 적용한 후 NO발생량을 확인하였다. 마테·황칠 혼합추출물을 농도 별로 투여하여 NO, iNOS, COX-2, TNF-α, IL-1β, IL-6의 발생량을 관찰하였다.
마테·황칠의 농도 비율 별 적용에서, 6:4 비윤의 마테·황칠 혼합물에서 NO방출이 가장 적으면서 세포생존도가 높게 나타났다. 마태·황칠 혼합물을 주입하지 않은 대조군과 비교했을 때, 마테·황칠 혼합 추출물 투여군(마태·황칠 6:4 비율)에서 NO의 생성량은 농도 의존적으로 감소하였고, iNOS와 COX-2의 발현도 mRNA 레벨과 단백질 레벨에서 모두 감소하였
으며, TNF-α, IL- 1β, IL-6의 발생량도 각각의 실험군에서 농도의존적으로 감소하였다.
마테·황칠 혼합 추출물은 LPS로 유도된 BV-2 미세아교세포의 활성화를 효과적으로 억제하였다. 이를 통해 마테·황칠 혼합 추출물의 항신경염증 효과를 확인하였다. 본 연구의 결과는 마테·황칠 혼합 추출물이 신경염증을 억제할 수 있는 천연물 식약 소재로서 응용 가능성이 있음을 시사한다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

It is known that inflammatory responses by pathologic microglial activation are associated with neuropathy in central nervous system(CNS). Several medications have been used for treatment of CNS injuries, but long term uses of them have adverse effects. For this reason, studies for development of food and drug materials by
using netural materials and their mixtures should be conducted. Thus, the purpose of this study was to investigate the anti-inflammatory effect of combined Ilex paraguariensis(Mate) and Dendropanax m orbifera
(DM) extracts against LPS-induced inflammatory mediators in BV- 2 microglia.
To decide an appropriate mixture dose of Mate and DM, different concentrations of Mate and DM extracts were mixed and treated to LPS-induced BV-2 micand NO release was investigated in each dose. After applying appropriate mixture of Mate and DM, nitric oxide (NO) production, and expressions of proinflammatory
mediators (iNOS and COX-2) and cytokines (TNF-α, IL-1β and IL-6) were investigated.
Among several doses applied in BV-2 microglila, 6:4 Mate and DM mixture showed reduction of NO release. Compared with control (no treatment), combined Mate and DM treatment (Mate:DM = 6:4) reduced NO release in a dosedependent manner. Treatment also reduced iNOS and COX-2 expression of mRNA and protein levels. Combined Mate and DM also dose-dependently declined the expressions of TNF-α, IL-1β and IL-6.
Considering the study results, combined extracts of Mate and DM displayed anti-inflammatory activity against LPS induction in BV-2 microglia. However, a further study should be designed and investigated on cellular and animal models to elucidate the anti-inflammatory action of this combined extract.

Keywords : Microglia, LPS, llex paraguariensis, Dendropanax morbifera, NO,
iNOS, COX-2, TNF-α, IL- 1β, IL-6

목차 (Table of Contents)

• Ⅰ. 서 론 1
• Ⅱ. 재료 및 방법
• 1. 시약 6
• 2. 시료 및 추출 6
• 3. 세포배양 7
• 4. 세 포 독 성 검 사 7
• 5. N O 농 도 측 정 7
• 6. Total RNA 분리 8
• 7. W estern blot analysis 9
• 8. 통 계 9
• Ⅲ. 연구결과
• 1. BV-2 미세아교세포 에서 LPS와 M/DM의 세포 독성 검사 11
• 2. BV-2 미세아교세포 에서 LPS와 비율별 M/DM 복합추출물의 NO 방출량 측정 13
• 3. LPS로 자극된 BV-2 미세아교세포 에서 M/DM 6:4 혼합추출물의 NO 생성 억제 효능 16
• 4. LPS로 자극된 mouse BV-2 미세아교세포 에서 M/DM의 농도 의존적인 iNOS의 유전자 및 단백질의 발현 저해 작용 19
• 5. LPS로 자극된 mouse BV-2 미세아교세포 에서 M/DM의 농도 의존적인 COX- 2의 유전자 및 단백질의 발현 저해 작용 21
• 6. LPS로 자극된 mouse BV-2 microglia cell 에서 염증매게 cytokine의 생산 시, M/DM 6:4 추출물의 농도 의존적인 억제효능 23
• Ⅳ. 고찰 26
• V. 결론 29
• 참고문헌 31
• Abstract 41