RISS 검색 - 국내학술지논문 상세보기

국문 초록 (Abstract)

본 연구에서는 hG-CSF의 발현을 유도적으로 조절하기 위한 FIV-Tet-On lentivirus vector system을 구축하고자 하였다. hG-CSF는 호중성구 계열 세포의 증식과 분화, 생존에 영향을 미치는 물질로서, 이 유...

본 연구에서는 hG-CSF의 발현을 유도적으로 조절하기 위한 FIV-Tet-On lentivirus vector system을 구축하고자 하였다. hG-CSF는 호중성구 계열 세포의 증식과 분화, 생존에 영향을 미치는 물질로서, 이 유전자의 발현을 증가시키기 위하여 FIV-Tet-On vector 상의 hG-CSF나 rtTA2SM2 서열의 3' 위치에 WPRE 서열을 도입하였다. 구축된 각각의 vector는 293FT 세포에 일시적으로 transfection하여 virus를 생산하였으며, 이 virus를 일차 배양 세포인 CEF와 PFF에 감염시켰다. 각 세포에 전이된 hG-CSF의 발현 양상을 관찰하기 위하여 doxycycline을 첨가하거나 첨가하지 않은 배지에서 배양한 후 quantitative real-time PCR, Western blot과 ELISA를 이용하여 hG-CSF 유전자의 발현 정도를 비교 측정한 결과, CEF에서는 WPRE가 hG-CSF의 3' 위치에 도입된 경우에 발현량과 유도율이 가장 높은 것으로 나타났고, PFF에서는 rtTA 서열의 3'위치에 도입된 경우에 발현량과 유도율이 가장 큰 것으로 확인되었다. 이 FIV-Tet-On vector system은 형질 전환 동물의 생산이나 유전자 치료에서 문제시되는 외래 유전자의 지속적인 과다 발현에 의한 개체의 생리적인 부작용을 최소화하기 위한 해결 방법으로 제시될 수 있을 것이다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

In this study, using FIV-based lentivirus vector system, we tried to express hG-CSF in tetracycline-controllable manner. hG-CSF influences the proliferation, differentiation, and survival of cells in the neutrophil lineage. To enhance stability and translation of hG-CSF transcript, WPRE sequence was also introduced into FIV-Tet-On vector at downstream region of either the hG-CSF gene or the sequence encoding rtTA. Primary culture cells (CEF, chicken embryonic fibroblast; PFF, porcine fetal fibroblast) infected with the recombinant FIV were cultured in the medium supplemented with or without doxycycline for 48 hours, and induction efficiency was measured by comparing the hG-CSF gene expression level using quantitative real-time PCR, Western blot and ELISA. Higher hG-CSF expression and tighter expression control were observed from the vector in which the WPRE sequence was placed at downstream of the hG-CSF (in CEF) or rtTA (in PFF) gene. This FIV-Tet-On vector system may be helpful in solving serious physiological disturbance problems which has continuously hampered successful production of transgenic animals and gene therapy.

목차 (Table of Contents)

ABSTRACT
요약
서론
재료 및 방법
FIV Vector의 구축

ABSTRACT
요약
서론
재료 및 방법
FIV Vector의 구축
Lenitivirus의 생산 및 표적세포에의 감염
hG-CSF의 발현 검증 및 Tet System을 이용한 외래유전자의 발현 확인
RT-PCR
Western Blotting
ELISA 분석
Quantitative Real-Time PCr
결과
FIV-CGW Virus Vector System의 발현 여부 확인
Tet System을 이용한 hG-CSF 유전자의 유도적 발현 여부 확인
고찰
인용문헌

참고문헌 (Reference)

1 "mRNA polyadenylation and its coupling to other RNA processing reactions and to transcription" 11 : 352-357, 1999

2 "Woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element enhances expression of transgenes delivered by retroviral vectors" 73 : 2886-2892, 1999

3 "Transduction of non- dividing cells using pseudotyped defective high- titer HIV type 1 particles" 93 : 15266-15271, 1996

4 "Tight control of gene expression in mammalian cells by tetracycline-responsive promoters" 5547-5551, 1992

5 "The effect of GM-CSF and G-CSF on human neutrophil function" 29 : 111-119, 1995

6 "Stable gene transfer to the nervous system using a non-primate lentiviral vector" 6 : 1808-1818, 1999

7 "Promoter interactions in retrovirus vectors introduced into fibroblasts and embryonic stem cells" 2314-2319, 1991

8 "Preservation of aqueous outflow facility after second-generation FIV vector-mediated expression of marker genes in anterior segments of human eyes" 43 : 3686-3690, 2002

9 "Optimization of vesicular stomatits-G pseudotyped feline immunodeficiency virus vector for minimized cytotoxicity with efficient gene transfer" 93 : 25-30, 2003

10 "Optimization of transgene expression at the posttranscriptional level in neural cells: implication for gene therapy" 7 : 782-789, 2003