메밀 단클론 항체를 이용한 저항원성 메밀의 면역학적 특성 분석 = Immunoblot Analysis of Hypoallergenic Buckwheat with Monoclonal Antibodies

국문 초록 (Abstract)

목 적 : 음식 알레르기 환자의 60%에서는 회피요법을 시행한 후 1-2년이 경과하면, 피부시험이나, RAST상 양성이 지속되더라도 그 임상 중상은 소실되는 것으로 알려걱 있다. 그러나, 메밀, 땅콩, 일부 해산물 알레르기는 자연 치유가 드물고 그 임상 양상이 중하고 위급하며 일상 생활에서 회피요법을 완벽하게 시행하기에는 어려움이 많다. 따라서, 식품 알레르기 치료에 있어서 저항원성 식품의 개발이 요구된다. 이에 본 연구는 저항원성 메밀을 제조하고, 그 면역학적 특성을 알아보고자 하였다.
방 법 :시판되는 메밀가루를 이용하여 조항원을 만들고, standard polyethylene glycol 방법으로 메밀 24 kD 단백에 대한 단클론 항체를 제조하였다. 메밀가루를 이용하여 0.5 M NaCl을 이용한 salting 방법으로 저항원성 메밀을 제조하였다. 제조된 조항원으로 SDS-PAGE를 시행하였다. 순수 메밀의 주 알레르겐인 24 kD 단백에 대한 단클론항체를 이용하여 저항원성 메밀의 immunobloting을 시행하였다.
결 과 :
1) 저항원성 메밀의 단백질 농도는 47.3 ㎍/μL였다.
2) SDS-PAGE의 결과 순수 메밀과 비교할 때 50, 36, 13 kD의 단백띠는 소실되었으며, 24 kD 단백띠는 약하게 관찰되었다.
3) 3개의 메밀 단클론 항체와 immunoblot 결과 1개의 단클론 항체에는 전혀 결합하지 않았으며, 2개의 단클론 항체에는 24 kD 단백에 결합하는 양상을 보였다.
결 론 : 저항원성 메밀은 메밀 주알레르겐인 24 kD 단백에 대한 일부 단콜론 항체와 반응하였으며, 주알레르겐인 24 kB 단백 함유를 저하시키기 위한 연구가 필요할 것으로 생각된다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Background and objective : It is generally accepted that one third of children with food allergy lose their clinical activity if the responsible food allergen can be identified and completely eliminated from their diet. But buckwheat allergy rarely lose clinical activity. So, we have produced hypoallergenic buckwheat(HBW) according to Ikezawa`s method, and characterized the allergenicity by immunoblot method using monoclonal antibodies to raw buckwheat. Material and Methods : HBW was prepared from raw buckwheat by salting with 0.5 M NaCl. 18 monoclonal antibodies to raw buckwheat were made according to standard polyehtylene glycol method. We performed SDS-PAGE of HBW and transferrd to nitrocellulose membranes, which were immunoblotted by selected 3 monoclonal antibodies to raw buckwheat. Results : The protein concentration of HBW was 47.3 ㎍/μL. As the result of SDS-PAGE of HBW the protein bands of 50, 36, 13 kD of raw buckwheat disappeared. 3 monoclonal antibodies were selected due to their higher specificities in ELISA. Immunoblot study showed that 2 among 3 monoclonal antibodies bind to HBW. Conclusion : The SDS-PAGE of HBW showed less protein bands in comparison to raw buckwheat. But the allergic component of HBW still remained. So further studies are required to eliminate the residual allergenicity of hypoallergenic food.