대장균의 저사조절 유전자 nlp의 분자기구 해석 = Analysis of the Molecular Mechanism of nlp Gene Involved in Transcriptional Regulation in Escherichia coli

국문 초록 (Abstract)

대장균의 nlp(Ner like protein) 유전자를 클로닝하여 구조해석을 한 결과 전사조절 단백질인 Ner와는 61%의 높은 상동성을 가지고 있음을 이미 보고한 바 있다 . 본 연구는 당 대사 관련 유전자의 발현 조절을 보고자 nlp 유전자를 도입시켜 tac promoter에 의해 대량 발현시킴으로서 lactose 대사 관련 유전자 lacZ와 maltose 대사 관련 유전자인 malQ, malP의 유전자 발현이 2.5배에서 최고 8.3배 정도까지 증가됨을 확인하였다. 이는 nlp 유전자가 cAMP 비존재하에 crp^*1와 상호작용하여 maltose 및 lactose 대사를 촉진시킴을 시사한다.
nlp-lacZ 융합 유전자 산물을 Immunoblotting하여 분석한 결과 nlp의 promter가 in vivo 상태에서 발현되어짐을 확인하였다.
tac promoter와 IPTG에 의하여 nlp 유전자 산물을 대량 발현시킨 결과 약 10,000 Da의 산물을 SDS-polyacrylamide gel 전기영동으로서 확인하였으며, 부분 정제된 Nlp 단백질을 조절 영역의 DNA 단편에 결합함으로서 전사조절에 관여하는 것으로 사료되어졌다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

An nlp (Ner like protein) gene from E. coli was previously cloned and sequenced. Here we show that expression of the sugar metabolism related genes, lacZ, malQ and malP, increased 2.5- to 8.3-fold in the presence of a plasmid containing the nlp gene. This suggested that the nlp gene could induce maltose- and lactose-metabolism coordinately with crp*1 in the absence of cAMP. Using the nlp-lacZ fusion gene, it was possible to show the promoter of nlp was active in vivo. The overexpressed nlp gene product, a polypeptide of 10,000 daltons, was confirmed by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The band shift assay revealed that the partially purified Nlp protein bound a specific DNA of the regulatory region of the nlp gene.