실시간 진단 모니터링시스템 구축을 위한 말라리아 신속진단키트 개발(2013) = Development of malaria rapid diagnosis kit for real-time monitoring system

국문 초록 (Abstract)

1. 말라리아 진단용 LDH 단세포군항체 및 진단키트 개발을 위한 형광체 대량 생산
가. 말라리아의 LDH 단백질의 항원 반응성이 좋은 부위에 대해 단세포군항체를 제조 하였음.
나. 제조된 단세포군항체를 대량 생산(30-35 mg)하였음.
다. 형광면역진단법에 활용될 소형 광원 기반 형광체를 대량 생산(1,200 mg)하였음.
2. 삼일열, 열대열, 사일열, 및 난형열말라리아 원충에 대한 유용성 평가(민감도/특이 도 평가)
가. 아시아 미얀마로부터 열대열말라리아 환자 혈액 샘플을 총 82개 확보함.
나. 아프리카 여행 중국인의 난형열말라리아 환자 혈액 샘플 총 10개 및 사일열말라리 아 환자 혈액 총 5개 확보함.
다. 확보된 삼일열, 열대열, 난형열, 사일열말라리아 환자의 혈액을 이용해 현미경진단 법, PCR, RDT, 및 ELISA test를 통해 양성 진단을 평가함.
라. 개발된 형광체-단세포군항체 축합체를 이용해 확진된 양성 샘플에 대해 FLISA 방 식으로 진단 민감도를 측정하였음.
마. 개발된 LDH 특이 단세포군항체는 인체 감염 4종 말라리아원충 모두를 진단할 수 있는 것으로 나타나 Pan-Plasmodium marker로서의 가능성이 검증됨.
바. 양성으로 진단된 혈액 샘플의 감염율과 형광세기의 증가 간에 상관관계를 분석한 결과, 인체 감염 4종 말라리아원충의 감염률이 증가할수록 형광세기가 강해지는 상관관계를 확인할 수 있었음.
사. 본 연구를 통해 개발된 형광면역진단법을 통해 말라리아의 정량적 진단이 가능함 을 확인함.
3. 말라리아 진단용 형광면역진단기기의 개발 및 시제품 효능 평가
가. 개발된 형광체의 wavelength에 최적화된 광원을 사용하여 형광면역진단용 정량기 기(GB F-ICT Reader)를 개발하였음.
나. 개발된 기기의 규격은 215 x 235 x 92 mm 로 이동이 편리한 크기임.
다. 형광면역진단용 정량기기를 구동할 수 있는 분석용 PC 소프트웨어를 개발함.
라. 말라리아 진단용 디바이스는 형광 신호 검출에 최적화되도록 고안됨.
마. 말라리아 임상 시료를 이용해 개발된 시제품(진단기기 및 진단키트)의 효능(진단 민감도 및 특이도)을 평가함.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

1. The mass production of P lasmodium lactate dehydrogenase (pLDH) specific monoclonal antibodies (mAb) and fluorophore for malaria diagnosis
A. Antigenic activities of several peptides in pLDH were analyzed.
B. About 30-35 mg of pLDH specific monoclonal antibodies were produced.
C. About 1,200 mg of fluorophore for FLISA diagnosis were produced.
2. The detection of four kinds of malaria parasites by FLISA and FICT-based diagnosis
A. Eighty two P. falciparum, ten P. ovale and five P. malariae clinical samples were collected from Myanmar and China, respectively.
B. Microscopic method, PCR, RDT and ELISA test have been used to detect malaria parasites from blood samples of malaria patients.
C. FLISA using coumarin conjugated anti-pLDH mAbs were tested with malaria clinical samples.
D. Monoclonal antibodies against pLDH were detected four Plasmodium species, which are infective to human, suggesting that pLDH mAbs plays as Pan-Plasmodium marker.
E. The correlation between parasitemia of clinical samples and fluorescence intensity was analyzed. The higher parasitemia resulted in the higher fluorescence showing the hight correlation between the number of parasitemia and the relative fluorescence.
F. Quantitative diagnosis for malaria is possible with developed FLISA system.
3. The development of quantitative measurement system for fluorescence signals
A. Quantitative fluorescence reader (GB F-ICT reader) has been developed with optimal light source for developed fluorophore.
B. The reader device is portable size with 215 (length) x 235 (width) x 92 (height) mm.
C. PC software has been developed to quantitatively analyze the fluorescent signal.
D. Malaria diagnostic kit (RDT) has been developed and optimized for reading fluorescent signal.
F. Quantitative fluorescence reader and diagnostic kit (RDT) have been evaluated by using malaria clinical samples.