In situ Hybridization 技法에 의한 토끼 出血症 바이러스 遺傳子의 檢索 = Diagnosis of rabbit haemorrhagic disease virus in the infected organs

국문 초록 (Abstract)

토끼 출혈증(Rabbit haemorrhagic disense; RHD)은 1984년 중국에서 최초로 발생이 보고된 이후 한국을 포함하여 전세계적으로 발생하고 있는 토끼의 급성 열성 전염병으로서 주로 기관지의 출혈과 울혈, 폐출혈, 간조직의 심한괴사, 신장과 비장 및 심근의 변성괴사, 각 실질 장기의 파종성 혈관내 응고증 등의 소견을 특징으로 양토산업에 심각한 경제적인 피해를 끼치고 있다.
이 질병은 정확한 원인 바이러스의 분류와 발병기전이 밝혀져 있지 않아 여러가지 질병명으로 불리우고 있으며, 또한 질병의 전단은 바이러스의 항원이나 항체의 검출에 의존하고 있는 상황이다. 이에 본 연구에서는 요즘 활발하게 이용되고 있는 분자 병리학적 기법중의 하나인 in situ hybridization(ISH)기법을 이용하여 1987년부터 1993년 사이에 본 실험실로 병성감정 의뢰되어 RHD로 진단되었던 파라핀 포매조직을 재료로 각종 조직내 바이러스 유전자 분포를 조사하고, RHD를 분자 생물학적으로 정확히 진단 할 수 있는 계기를 마련하고자 하였다.
본 실험에 사용한 probe는 RHD 바이러스의 single strand RNA중에서 specificity가 높은 sequence에 상보적인 oligonucleotide probe틀 합성하여 biotin으로 표지하여 준비하였고, ISH의 전과정은 Microprobe^TM capillary action system을 이용하였다.
RHD에 감염된 토끼의 각종 장기를 대상으로 ISH를 실시한 결과, 병리조직학적으로 특징적인 병변인 관찰된 간과 폐 뿐 만아니라 기관, 기관지, 신장, 심근, 소장, 부신 소뇌 등의 장기에서도 RHD바이러스의 분포를 의미하는 적색의 양성반응을 관찰할 수 있었다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Rabbit Haemorrhagic Disease(RHD) have characterized by heamorrhage of trachea tract and necrosis lesion of liver, kidney, spleen, heart, lung etc. Persistently infected rabbit appear to be efficient transmitters and shed large amounts of RHD virus.
Histological finding have been screened for RHD infection. However these examinations have disadvantages that are not RHD virus research.
Therefore, to establish advanced rapid and specific detection examination for RHD in our work, We have used the new technique, in situ hybridization(ISH) that have been developed by the molecularbiologics.
Oligonucleotide probe which was made by RHD strain labelled with non-radioactive biotin (biotinylated oligonucleotide probe) to detect RHD vrus genome in the formalin-fixed parraffin-embedded tissue sections. All procedure of ISH to diagnose was taked within 1-2 hours in Microprobe^TM capillary action system. The biotin-labelled probe was demonstrated after hybridizatin under standard conditions by the application of streptoavidin and biotinylated alkaline phosphatase. Alkaline phosphatase was visualized using a Fast Red TR/ Naphthol phosphatate and the sections were counterstained with hematoxylin.
The procedure described preserved morpological detail yet is compatible hybridization conditions and reveals the disposition of RHD genome during gene expression. We have obtained the result of positive reactions in trachea, lung, liver, kidney, heart, small intestine and adrenal gland etc.
In situ hybridization is a powerful technique for the detection and localization of specific nucleic acid sequences within tissues and cells. Recently, it has potential application to both research and diagnostic studies.

목차 (Table of Contents)

• 국문초록 = 2
• 서론 = 4
• 재료 및 방법 = 7
• 결과 = 12
• 고찰 = 13
• 결론 = 16
• 사진설명 = 17
• 참고문헌 = 21
• 영문초록 = 24