토양에서 분리한 Bacillus sp. WRD-1, WRD-2가 생산하는 Extracellular protease의 특성 및 혈전용해효소의 생산 = Isolation of bacillus sp. WRD-1, WRD-2 from soil. and charcterization and production of extracellular protease and fibrinolytic

국문 초록 (Abstract)

토양시료로부터 저온에서 높은 활성의 protease를 생산하는 미생물을 수십종 분리하였다. 산업적으로 우수한 균종을 선별하기 위하여 분리된 미생물중 protease활성과 성장속도면에서 가장 우수한 2균주를 선별하여 WRD-1, WRD-2로 명명 하였으며, 형태학적, 생화학적 및 생리학적 특성을 조사한 후 Bacillus sp.로 동정되었다.
WRD-1 유래의 pretense는 20℃ 배양 및 pH 9.0에서 배양된 균주로부터 높은 활성을 나타내어 비교적 저온에서 높은 활성을 가지는 알칼리성 pretense로 판명되었고, protease생산을 위한 최적배양조건은 배양온도 10~4O℃, 초기 pH 6.0~8.0 및 배양시간은 10시간 이상으로 나타났다. WRD-1 유래의 protease 최적활성은 pH 9.0, 온도는 30℃였다. 이상의 결과에서 WRD-1 유래의 protease는 알칼리성의 특성을 가지면서 넓은 온도 범위에서 비교적 높은 활성을 가지고 있어 산업적으로 널리 사용하고 있는 세제용이나 피혁 가공시 이용될 수 있는 효소제개발에 우수하리라 판단되어졌다.
WRB-2 유래의 pretense는 최적 pH 6.0, 최적온도가 40℃였고, pH 6~9일때 상대활성도는 70%이상을 나타냄 으로서 중성 protease로 판단하였다. protease생산을 위한 최적 배양조건은 초기 pH 6~8일 때 상대활성도가 80% 이상을 나타내었고, 배양 12시간째에 가장 높은 활성도를 나타내었다. Fibrin plate를 이용한 혈전용해능을 확인한 결과 높은 혈전용해능을 가지고 있었다. 이상의 결과로 WRD-2 유래의 pretense는 사람의 혈액 pH수준인 7, 체온 37℃로 대비하여 우수한 혈전용해제의 개발이 가능하리라 사료되어진다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

In order to protease, psychrotrophiz abcterium which have enzyme activity at low temperature, was isolated by using unrichment culture from soil sample and identified as genus Bacillus sp. WRD-1. WRD-2
1. Characterization of extracellular protease was produced by Bacillus sp. WRD-1 Time of highest cell growth were 8 hours and the optimal initial pH of culture condition for enzyme was pH 7 and culture time 10 hours. Temperature range of high enzyme activity were 10∼40℃, The optimal pH and temperature for the enzyme activity were pH 9 and 30℃.
2. Characterization of extracellular protease was produced by Bacillus sp. WRD-2 Time of highest cell growth were 15 hours and the optimal initial pH of culture condition for enzyme was pH 6 and culture time 12 hours. Temperature range of high enzyme activity were 20∼50℃. The optimal pH and temperature for the enzyme activity were pH 6 and 40℃.
Bacillus sp. WRD-2 which produces a novel protease with fibrinolytic enzyme activity.

목차 (Table of Contents)

• 목차 = ⅲ
• Ⅰ. 서론 = 1
• 1. Protease = 1
• 2. 혈전용해효소 = 6
• Ⅱ. 재료 및 방법 = 11
• 1. Bacillus sp. WRD-1, WRD-2 분리 및 동정 = 11
• 가. 균주의 분리 = 11
• 나. 균주의 동정 = 11
• 2. Bacillus sp. WRD-1, WRD-2의 배양 = 12
• 가. 사용균주 및 배지 = 12
• 나. 배양 조건 및 생육측정 = 12
• 3. 조효소의 특성 = 13
• 가. 조효소액의 준비 = 13
• 나. 카제인분해활성 = 13
• 다. 피브린분해활성 = 14
• 라. 조효소액의 최적pH 및 최적 온도 = 14
• 4. 배양배지에 따른 균체의 성장 및 protease활성 = 15
• 가. 탄소원의 종류 및 농도에 따른 균체생육 및 효소활성 측정 = 15
• 나. 질소원의 종류에 따른 균체의 생육 및 효소활성 측정 = 15
• Ⅲ. 결과 및 고찰 = 16
• 1. 균주의 분리 및 동정 = 16
• 가. Bacillus sp. WRD-1의 동정 = 16
• 나. Bacillus sp. WRD-2의 동정 = 16
• 2. 토양으로부터 분리한 Bacillus sp. WRD-1이 생성하는 extracellura protease의 특성 = 23
• 가. 배양시간에 따른 균체의 생육 및 효소활성의 변화 = 23
• 나. 초기 pH에 변화에 의한 균체의 생육 및 효소 활성의 변화 = 23
• 다. 조효소액의 효소활성에 미치는 pH 및 온도 영향 = 23
• 라. 탄소원의 종류와 농도에 따른 균체 생육 및 효소 활성 비교 = 24
• 마. 질소원의 종류에 따른 균체 생육 및 효소활성 비교 = 25
• 3. 토양으로부터 분리한 Bacillus sp. WRD-2가 생성하는 extracellura protease의 특성 = 34
• 가. 배양시간에 따른 균체의 생육 및 효소활성의 변화 = 34
• 나. 초기 pH 변화에 의한 균체 생육 및 효소 활성의 변화 = 34
• 다. 조효소액의 효소활성에 미치는 pH 및 온도 영향 = 35
• 라. 탄소원의 종류와 농도에 따른 균체 생육 및 효소 활성 비교 = 35
• 마. 질소원의 종류에 따른 균체 생육 및 효소활성 비교 = 36
• 4. 혈전용해효소활성 = 45
• 가. 탄소원의 종류 및 농도에 미치는 혈전용해능의 비교 = 45
• 나. 질소원의 종류 및 농도에 따른 혈전용해능의 비교 = 46
• Ⅳ. 적요 = 53
• 참고문헌 = 55
• ABSTRACT = 61
• 감사의 글 = 63