필터링을 이용한 항아리곰팡이(Batrachochytrium dendrobatidis) 감염 확인법 = The pathogenic chytid fungus (Batrachochytrium dendrobatidis) screening using the filter method

국문 초록 (Abstract)

항아리곰팡이(Batrachochytrium dendrobatidis)가 많은 양서류 개체군의 감소 및 멸종에 결정적인 영향을 주는 것으로 알려짐에 따라 전 세계적으로 관련 연구가 광범위하게 이루어 지고 있다. 이 때 항아리곰팡이의 감염 여부를 확인하는 것은 모든 연구의 기본으로 감염 예 상 부위를 멸균된 면봉으로 문질러 감염된 조직을 획득하는 방법이 널리 이용되고 있다. Nested PCR이나 Taqman-probe Assay와 같은 PCR방법을 통해 높은 민감도를 가지고 감 염여부를 확인할 수 있다. 하지만 스왑방법은 외부의 항아리곰팡이 포자로 인한 오염으로 결 과적 오류를 발생시키거나 수행하는 사람에 따라서 다른 결과를 나타낼 수 있다는 등의 문제 로 인해 신뢰성이나 정확성이 떨어진다. 본 연구는 스왑법의 결과적 오류의 가능성을 제시하 고 스왑법의 문제점을 보완할 수 있는 필터링 방법을 제안하였다. 실험실에서 사육중인 무당 개구리(Bombina orientalis) 13마리에 대해 시간적 간격을 두고 3회에 걸쳐 스왑을 실시하고 Nested PCR과 Taqman-probe Assay를 통해 감염여부를 확인하였다. 13마리 중 3마리만 3 회의 시도에서 동일한 양성 결과를 보여주었다. 나머지의 개체에 대해서는 각 시도마다 다 른 결과가 나타났다. 감염된 개체의 성숙한 항아리곰팡이는 물속으로 포자를 방출한다. 이 를 이용하여 150ml의 물이 든 플라스틱 상자에 단독으로 개체를 위치시키고 24시간 동안 포자의 배출을 유도했다. 50ml의 물을 0.2um의 멤브레인을 통해 걸러 3~4um 항아리곰팡 이의 포자를 획득했다. Nested PCR과 Taqman-probe Assay를 통해 감염여부를 확인하였 다. 실험에 이용된 모든 개체들이 항아리곰팡이에 감염된 것을 확인할 수 있었다. 본 연구에서 제안된 필터링 방법을 이용한 항아리곰팡이 감염 확인 법은 감염 여부의 정확 한 확인이 요구되는 실험이나 물리적인 자극 없이 올챙이의 감염을 확인하는 방법으로 이용 될 수 있을 것이다.