Purification of Sulfhydryl Oxidase from Bovine Skim Milk and its Nonidentity with r-Glutamyl transpeptidase = 우유내 Sulfhydryl Oxidase의 정제 및 r-Glutamyl Transpeptidase와의 비동일성에 관한 연구

국문 초록 (Abstract)

Bovine skim milk로 부터의 Sulfhydryl Oxidase (E.C. 1.8.3.2)를 전통적인 방법인 Sephadex G-100 과 DEAE-cellulose를 사용하여 부분정제하였다. 이때 이효소는 skim milk로 부터 최종단계까지 약 1800배 정제 되었으며 일반적 특성으로 pH7.2, 37℃에서 최적 조건을 나타내었으며, 효소에 대한 온도의 영향을 Arrhenius식을 이용해 13.8kcal/mole의 효소 활성화 에너지를 얻었다. 이효소의 분자량은 Sephadex G-200 Column을 통과시켜 87,000으로 추정되었으며 이 효소는 Sulfhydryl group을 그에 대응하는 disulfide로 전환시키는데 작용한다는 것을 직접적으로 확인할 수 있었다. 또한 이효소는 철이온에 작용하는 chelator에 영향을 받지 않았고 EDTA처리에 의해 완전히 불활성화 되었다. 이때 Mn^+^+에 의해 원래의 활성도를 되찾아 이효소는 Mn^+^+-dependent 효소임을 알 수 있었다. Sulfhydryl Oxidase의 기질로는 2개 이상의 이온화가 가능한 작용기를 갖는 thiol 화합물에 작용한다는 것이 밝혀졌다. 그리고 2개의 기질중 하나를 고정시키고 다른 한기질의 농도에 따라 double-reciprocal plot 했을때 고정된 기질의 변화에 따라 uncompetitive type으로 나타났으며 이효소는 disulfide에 의해 활성도가 저해되지 않아, 먼저 효소에 RSH가 들어가 disulfide로 되어 나오며 여기에 O_2가 들어가 H_2O_2로 되어 나오는 간단한 효소 기작을 제시 할 수 있었다. 한편 이러한 결과들은 Sulfhydryl Oxidase 가 r-Glutamyl transpeptidase와 명백히 구분됨을 보여 주었다.