Mouse L Cell에서의 외래 유전자 유래 단백질의 생산 = The Production of Foreign Protein in Mouse L Cell

국문 초록 (Abstract)

유전자 재조합 동물세포를 제작하여 외래 유전자 유래의 단백질을 생산하고자 그 model system으로써 부착성 동물 세포인 mouse L cell과 pBMG Neo vector, 그리고 외래 유전자로는 hNF-IL6를 선택하였다. hNF-IL6는 hIL-6 유전자의 promoter 서열에 결합하는 성질에 의해 분리된 핵단백질로서 IL-6의 전자조절 인자로 밝혀져 있다. 이 hNF-IL6는 다른 면역 관계 단백지의 전사 조절 영역에도 결합함이 밝혀져 그 중요성이 부각되고 있으나 재조합 대장균에서는 발현시 너무 빨리 분해되어 생산이 어려웠다.
Plasmid내의 neomycin resistance 특성을 이용한 1차 screening, 그리고 southern blot analysis를 이용한 2차 screening에 걸쳐 hNF-IL6 발현 vector가 도입된 재조합 clone을 선택하였으며, 전사 및 발현를 확인하였고 그 발현이 MT promoter 특유의 유도기작에 따르는 것도 알 수 있었다.
생산된 hNF-IL6는 핵내에 존재함으로써 본래의 핵단백질 특성을 유지하고 있었으며 DNA binding activity도 확인되었다.
따라서 pBMG Neo vector를 사용, mouse L cell에서 발현된 외래 단백질 hNF-IL6가 본래의 활성도 유지함 대량 생산된 것을 알 수 있었고, 동물 세포에서의 외래 유전자 발현에 대한 이 system의 응용 가능성도 확인할 수 있었다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

Some interleukin 6 (IL-6) transcription control factors were reported as the regulator of IL-6 expression. A nuclear protein bound to interleukin 1 (IL-1) responsive element in the IL-6 promoter region was named NF-IL-6 (nuclear factor for IL-6). This NF-IL6 was known to be very important as a transcription factor for various immuno-protein as well as for IL-6. The human NF-IL6 genes were transfected into the mouse L cells under the metallothionein promoter (MT promoter) to establish a model system for the expression of foreign gene in the mammalian cell line. Over a thousand of neomycin-resistant clones were obtained by using electroporation method, and some positive clones were screened with Southern blotting. After the selection of LBM6104 clone with high copy numbers, the expression of human NF-IL6 under the control of the MT promoter was confirmed by Northern and Western blot analysis. The MT promoter vector system became quite useful for a setup of foreign protein expression in the mammalian cell lines.