Arthrobacter luteus로부터 유래한 염기성 AL - Protease의 효소학적 성질 및 활성 아미노산 잔기의 검색

국문 초록 (Abstract)

Zymolyase 조효소로부터 분리, 정제되었고, 효모 세포벽 용해 촉진물질로 밝혀진 바있는 Arthrobacter luteus 로부터 유래한 염기성 protease(AL-protease)의 효소학적 성질 및 활성 아미노산 잔기를 검색한 결과는 다음과 같다.<br/>
1. AL-protease 는 저해제 DFP 및 PMSF 에 의해서 그 protease 활성 및 용해 촉진활성이 동시에 완전히 소멸되었으며, 그 저해 반응속도는 chymotrypsin 에 대한 것에 비하여 대단히 완만하였다. 그 반응에서 AL-protease와 DFP의 결합 mole 비는 1:1 로 추정되었다.<br/>
2. 정제된 AL-protease의 동결건조품 중에는 종래 효모세포벽 용해반응에 관여하는 것으로 알려진 yeast phosphomannase를 비롯한 다당류 가수분해 효소들의 활성은 그 어느 것도 인정되지 않았다.<br/>
3. AL-protease의 casein에 대한 최적 pH 및 최적온도는 pH 10.5와 65℃이었고, 그 활성은 pH 5~11 사이와 65℃이하에서 안정하였다. 또한, AL-protease의 활성에 미치는 여러가지 금속이온의 영향은 인정되지 않았다.<br/>
4. [(32)^P]-DFP에 의하여 화학수식된 [(32)^P]-DIP-AL-protease에 대한 활성부위의 아미노산 잔기를 검색, 동정하기 위하여 조제용 PAG-전기영동, SDS-PAG-전기영동, Dowex 이온교환 크로마토그래피 및 고압 여지 전기영동을 실시하였고, 그 결과, AL-protease는 활성 부위에 1 분자당 1 mole의 serine 잔기를 가지 는 염기성 protease로 밝혀졌다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

The enzymatic properties of the alkaline AL-protease, which had been prepared from the crude zymolyase of Arthrobacter luteus, was investigated together with its active amino acid residue.<br/>
Complete inactivation of the proteolytic activity of AL-protease by either DFP or PMSF was simultaneously accompanied by the loss of its lytic effect on the lysis of yeast cell wall. In the reaction, AL-protease showed the pattern of inactivation to decrease very slowly, as compared to that of chymotrypsin, and that enzyme and DFP were found to react with a molar ratio of 1 : 1.<br/>
The preparation of AL-protease exhibited no hydrolytic activity in any substrates of polysaccharases, playing a significant role in the lysis of yeast cell wall. The optimum pH and temperature of AL-protease was pH 10.5 and 65℃, respectively. It also showed stability in the pH range from 5 to 11 and at the temperature below 65℃.<br/>
Through the identification of the amino acid residue in the active site of the (32)^P-diisopropylph-osphorylated(DIP) AL-protease modified specifically with (32)^P-labeled DFP, AL-protease was found to be a DFP-sensitive enzyme which has a mole of active serine residue involved in its proteolytic activity per mole of the enzyme.

목차 (Table of Contents)

• Abstract
  
• 서론
  
• 재료 및 방법
  
• 결과 및 고찰
  
• 요약
  
• 사사
  
• 문헌