Partial Purification and Characterization of an Electrophoretically Labile Hydrogenase Isoenzyme from Aerobically Grown E. coli HB101

국문 초록 (Abstract)

산소존재하에서 자란 대장균 HB101로부터 전기이동시 활성이 보이지 않는 하이드로지나아제 동위효소를 부분적으로 분리하였다. 분리과정은 데옥시콜레이트에 의한 세포막의 분산, 암모니움 설페이트 침전, 이온교환, 하이드록시아파타이트, 그리고 gel 여과단계 등을 포함했다. 수소 : 메철바이올로젠의 산화환원 활성도로 효소의 활성을 정량적으로 측정하였고 이온 교환 chromatography 단계부터 약 50배의 분리가 이루어졌다. 마지막으로 얻은 효소의 비활성도는 1분에 mg 단백질당 248.2 nmol(산화된 메칠바이올로젠)이였고, 이 효소는 39 kDa과 30 kDa 두개의 폴리펩타이드로 구성되어 있었다. 또한 효소의 활성이 가장 큰 pH 범위는 7과 8 사이였고 $70^{\circ}C$에서도 최고활성이 52%를 유지하였다.

다국어 초록 (Multilingual Abstract)

An electrophoretically labile hydrogenase from the membrane fraction of aerobically grown Escherichia coli was partially purified. The enzyme was assayed by quantification of the $H_2$ : methyl viologen oxidoreductase activity and purification was achieved 50-fold by ion exchange chromatography and gel filtration steps. The specific activity of the final preparation was 248.2 nmol methyl viologen oxidized $min^{-1}$ mg $protein^{-1}$. The purified enzyme consists of two subunits whose molecular weights are 39000 D and 30000 D. The enzyme showed a pH optimum between 7 and 8, and retained 52% of the maximal activity at $70^{\circ}C$.