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( Apon Zaenal Mustopa ),( Sri Kartika Wijaya ),( Ratih Asmana Ningrum ),( Dian Fitria Agustiyanti ),( Lita Triratna ),( Wida Nurul Alfisyahrin ) 한국미생물생명공학회(구 한국산업미생물학회) 2019 한국미생물·생명공학회지 Vol.47 No.3
Hepatitis B treatments using immune therapy are gaining interest because of the improvements in dendritic cell performance for antigen presentation, which induces an appropriate immune response and raises patient survival rates. This research aims to produce a significant amount of the HBcAg antigen, which can induce an immune response and have a curative effect on HBV infection. In this study, the HBV subgenotype B3 of the HBcAg gene was used, which is dominant in Indonesia. Further, Lactococcus lactis bacteria was used as the host because of its safety and tightly regulated protein expression. The codon usage for the HBcAg gene was optimized to improve protein expression in L. lactis, which is important because a codon is not random between species. The HBcAg gene is attached to a pNZ8148 plasmid and transformed into the L. lactis NZ3900 expression host. The results confirm that a positive protein band (21 kDa) in two fractions of purified HBcAg was recognized by both western blotting and dot blot hybridization, even if the HBcAg optimized codon has higher GC contents than that suggested for L. lactis expression. Overall, this research strengthens the broad use of L. lactis bacteria for any protein expression, including higher protein expression of codon optimized HBcAg gene compared to non-optimized genes. Furthermore, the improvement in the codon optimization of the HBcAg gene significantly increases the total protein expression by 10-20%, and the expression level of the codon optimized HBcAg increases 1.5 to 3.2-times that of the native HBcAg.
Mustopa, Apon Zaenal,Wijaya, Sri Kartika,Ningrum, Ratih Asmana,Agustiyanti, Dian Fitria,Triratna, Lita,Alfisyahrin, Wida Nurul The Korean Society for Microbiology and Biotechnol 2019 한국미생물·생명공학회지 Vol.47 No.3
Hepatitis B treatments using immune therapy are gaining interest because of the improvements in dendritic cell performance for antigen presentation, which induces an appropriate immune response and raises patient survival rates. This research aims to produce a significant amount of the HBcAg antigen, which can induce an immune response and have a curative effect on HBV infection. In this study, the HBV subgenotype B3 of the HBcAg gene was used, which is dominant in Indonesia. Further, Lactococcus lactis bacteria was used as the host because of its safety and tightly regulated protein expression. The codon usage for the HBcAg gene was optimized to improve protein expression in L. lactis, which is important because a codon is not random between species. The HBcAg gene is attached to a pNZ8148 plasmid and transformed into the L. lactis NZ3900 expression host. The results confirm that a positive protein band (21 kDa) in two fractions of purified HBcAg was recognized by both western blotting and dot blot hybridization, even if the HBcAg optimized codon has higher GC contents than that suggested for L. lactis expression. Overall, this research strengthens the broad use of L. lactis bacteria for any protein expression, including higher protein expression of codon optimized HBcAg gene compared to non-optimized genes. Furthermore, the improvement in the codon optimization of the HBcAg gene significantly increases the total protein expression by 10-20%, and the expression level of the codon optimized HBcAg increases 1.5 to 3.2-times that of the native HBcAg.
구연 : 조직학적 간염활성도, HBV DNA 및 조직내 HBcAg의 발현과의 관계 -만성 B형 간염바이러스를 보유한 젊은 남자의 군 신검용 검사에서-
김학철,김태현,김용성,염주진,박도심,조지현,윤기중,문형배 대한간학회 2003 Clinical and Molecular Hepatology(대한간학회지) Vol.9 No.3(S)
배경/목적: HBV의 간세포의 손상은 직접적인 세포독성에 의한 것이 아니라, 감염된 간세포에 숙주의 면역반응 결과로 알려져 있다. 이러한 면역반응은 바이러스의 여러 항원들 중 주로 HBcAg가 표적항원으로 작용하는 것으로 알려져 있고, HBcAg은 HBV DNA량과 밀접한 관련이 있는 것으로 알려져 있으며, HBeAg의 존재에 따라서도 간손상이 다르다고 한다. 그러나 HBV DNA은 연령과 관련되어 젊을수록 많지만, 간손상의 정도는 연령이 높을수록 심하다고 알려져 있어, 이러한 차이점을 연령에 따른 면역능의 차이로 설명하고 있다. 이에 본 연구에서는 동일한 집단에서의 HBV에 의한 간손상에 관련성을 추구코져하였다. 대상과 방법: 1999년 1월부터 2002년 8월까지 HBV의 보유자로 군신검을 목적으로 내원하여 간생검을 실시하였던 젊은 남자들 중 항바이러스제등을 사용하지 않았으며, 간생검을 실시한 일주일이내에 채혈하였던 85명을 대상으로 하였다. 간기능 검사, 간염표지자, HBV bDNA 및 간생검을 실시하였으며, 간생검은 파라핀에 포매한 후 조직학적 관찰하였으며, 또한 HBcAg에 조직면역학적 검사는 상품화된 Kit(DAKO, USA)을 이용하였다. 이들의 결과를 분석하여 HBeAg, HBV DNA 및 HBcAg의 발현유무 및 정도로 세분{A(8);N(음성)-N-N, B(7);N-N-P(양성), C(5);N-P-P, D(8);P-P-N, E(55); P-P-P, etc(2)}하여, 통계처리하였다. 결과: 1. HBeAg양성군에서 음성군에 비하여 DNA치와 HBcAg의 조직면역학적 소견의 발현의 빈도와 발현정도(grade)가 높았으나(각각 p<0.001, 0.01, 0.01), 섬유화는 낮았다(p<0.01). 2. HBeAg가 양성군에서는 HBV DNA와 lobular activity와 음의 관련성이 있었고, AST, ALT, portal activity는 음의 경향이었으나, 음성군에서는 일부가 양의 경향이었으나, 대부분이 양의 상관성인 경향을 보였다. 3. 조직내의 HBcAg의 발현은 양성군에서는 HBV DNA와 AST, ALT, lobular & porto-periportal activity등이 관련성이 없었지만, 음성군에서는 AST, ALT, lobular activity와는 양의 상관성이 있었으나(모두 p<0.05), HBV DNA와 porto-periportal activity와는 양의 상관적인 경향만을 보였다. 4. 조직학적 활성도는 AST, ALT 및 HBcAg의 발현형과 양의 상관성이 있었으나(모두 p<0.05), HBV DNA와 HBeAg 양성군에서는 음의 상관성이 보였으나(p<0.000), 음성인 군에서는 양의 관계가 성립하였다(p<0.05). 5. HBV DNA와 HBcAg의 발현이 동일한 경우에도 HBeAg의 발현유무에 따라, HBeAg가 음성인(C군)에서 양성인(E군)에 비하여 HBV DNA는 적었지만, 문맥부위과 및 주변부위에서 활성도와 섬유화의 정도는 심하였다(p<0.001, 0.01). 6. 간 섬유화의 정도도 HBeAg 음성군과 양성군간에 공통적인 상관성이 가장 많은 porto-periportal activity(R=0.8 p<0.000 vs R=0.57 p<0.001)에서도 유의한 차이가 있었다. 결론: HBeAg의 유무에 따라 간손상, 조직내의 면역조직학적인 HBcAg발현 양상 및 HBV DNA간의 관련성이 달라, HBeAg가 음성인 경우에는 이들간에 양(positive)의 상관성이 존재하거나 무관하였지만, 양성인 경우에는 양부터 음(negative)까지 다양하였다. 따라서 동일한 연령군에서도 간손상의 주요 요인이 HBeAg의 발현과 유관할 것으로 생각된다.
간 조직내 HBcAg 및 HBsAg의 면역조직화학염색에 의한 발현양상과 Victoria blue 염 색 과의 비교연구
한경희 ( Kyung Hee Han ) 대한임상검사과학회 1998 대한임상검사과학회지(KJCLS) Vol.30 No.3
The expression pattern of HBcAg and HBsAg in the liver of 01 serum HBsAg positive and 21 serum anti-HCV positive patients were studied by immunohistochemical stain method (Avidin-biotin conjugate). The sensitivity and specificity of irrmmohistochemical stain were compared with those of victoria blue stain and the results are as follows. 1. The expression of HBcAg and HBsAg in liver were 46.3%(31cases) and 1000/0 of serum HBsAg positive patients by irrmmohistochemical stain. 2. Victoria blue stain showed positive reaction in 83.6%(56cases) of serum HBsAg positive patients. Most of victoria blue negative cases showed membranouses expression of HBsAg by immunohistochemical stain. 3. The expression pattern of HBsAg and HBcAg in the liver were type II(3.0%), type III (46.3%) and type IV(50.7%) and the major expression pattern of inactive carrier was type III. 4. All cases of serum anti-HCV positive and HBsAg negative patients showed negative reaction by victoria blue stain and irrmmohistochemical stain for HBsAg and HBcAg. In conclusion, Imrrnmohistochemistry and victoria blue stain evaluated to the specific method for HBcAg and HBsAg. Immunohistochemical stain is necessary to study expression of hepatitis B virus maker, because of the sensitivity of victoria blue is &3.6% and lower than that of irrmmohistochemical stain.
만성 B형 간염 바이러스를 보유한 젊은 남자에서 간손상, 혈청 HBV-DNA 및 간세포내 HBcAg의 발현 양상과의 관련성
김태현 ( Tae Hyeon Kim ),김용성 ( Yong Sung Kim ),염주진 ( Joo Jin Yeom ),조은영 ( Eun Young Cho ),김희식 ( Hee Sik Kim ),김학철 ( Haak Cheoul Kim ),박도심 ( Do Shim Park ),조지현 ( Ji Heun Cho ),윤기중 ( Gi Jung Yoon ),문형배 ( H 대한소화기학회 2004 대한소화기학회지 Vol.44 No.2
Background/Aims: Although the viral load is correlated with HBcAg, liver injury was not correlated to viral load in HBeAg positive patient. We aimed to study the inter-relationship of clinical parameters such as the level of HBV-DNA, the level of aminotra
만성 B형 간염의 젊은 남자에서 간조직내 HBcAg 발현과 HBV C-gene의 변이와의 연관성
김태현 ( Kim Tae Hyeon ),김학철 ( Kim Hag Cheol ),김용성 ( Kim Yong Seong ),염주진 ( Yeom Ju Jin ),손영우 ( Son Yeong U ),유교상 ( Yu Gyo Sang ),박도심 ( Park Do Sim ),조지현 ( Jo Ji Hyeon ),윤기중 ( Yun Gi Jung ),문형배 ( Mun Hye 대한소화기학회 2003 대한소화기학회 추계학술대회 Vol.2003 No.-
<배경 및 목적> HBV의 간세포의 손상은 직접적인 세포독성보다는 감염된 간세포에 숙주의 면역반응 결과로 알려져 있고 이러한 면역반응은 HBcAg이 표적항원으로 작용한다. 간조직내 HBcAg은 혈청 HBV DNA양과 밀접한 관련이 있는 것으로 알려져 있으나 혈청 HBV DNA가 높은 경우에도 발현되지 않는 경우를 조직의 절편의 크기로 설명하지만 충분한 절편에서도 발현되지 않는 경우도 있다. 또한 HBV의 염기서열은 사람마다 차이가 있어 발현되는 단백질에