소아에서 4제요법 후 enzyme immunoassay에 의한 Helicobacter pylori 대변 항원 검출법의 유용성에 대한 연구

양혜란,서정기,Yang, Hye Ran,Seo, Jeong Kee 대한소아소화기영양학회 2004 Pediatric gastroenterology, hepatology & nutrition Vol.7 No.2

목적: H. pylori 대변항원(Helicobacter pylori stool antigen; HpSA) 검사는 H. pylori 감염 여부를 진단하는 데 이용되는 비침습적 검사이지만, 소아에서 제균요법 후 H. pylori 대변항원검사의 유용성에 대한 연구가 거의 이루어지지 못한 상태이다. 본 연구에서는 소아에서 H. pylori의 제균 여부를 확인하는 데 있어 enzyme immunoassay에 의한 HpSA 검사의 진단 정확도를 평가하고자 하였다. 연구방법: 2001년 1월부터 2003년 10월까지 서울대학교병원 소아과에서 146명의 소아(평균 연령 $9.3{\pm}4.3$세)를 대상으로 총 164회의 H. pylori 대변항원검사(Primier platinum HpSA)를 시행하였다. H. pylori 감염여부를 확인하기 위해 모든 환아에서 H. pylori 대변항원검사와 상부위장관내시경에 의한 위점막 생검을 병행하였다. H. pylori 감염이 확인되어 사제요법(omeprazole, amoxicillin, metronidazole, bismuth subcitrate)을 1주 동안 시행 받은 환아들에서는 치료 종결 후 최소 4주가 경과하였을 때 위내시경과 H. pylori 대변항원검사를 반복 실시하였다. H. pylori 대변항원검사는 OD값이 0.16 이상일 때 양성, 0.14~0.16 사이는 감염 미확정, 0.14 미만은 음성으로 판정하였다. 결과: 1) 제균 전 시행한 131회의 위내시경 조직검사 결과 28명이 H. pylori 양성이었고 나머지 103명은 H. pylori 음성이었다. 동시에 시행한 H. pylori 대변항원검사 결과에서 30명이 H. pylori 양성이었고, 101명이 음성으로 판정되었다. 따라서 제균요법 시행 전 H. pylori 대변항원검사의 민감도, 특이도, 양성 예측치, 음성 예측치는 각각 96.4%, 97.1%, 90% 그리고 99%이었다. 2) 제균요법 4주 후 33명의 환아에서 시행한 위내시경에 의한 조직검사에서 H. pylori는 24명에서 음성이었으나 9명은 여전히 양성이었다. 동시에 시행한 H. pylori 대변항원검사는 10명에서 양성, 23명에서 음성이었다. 따라서 제균요법 후 H. pylori 대변항원검사의 민감도, 특이도, 양성 예측치, 음성 예측치는 각각 88.9%, 91.7%, 80% 그리고 95.7%이었다. 결론: 소아에서 H. pylori 대변항원검사는 제균 후에도 높은 진단 정확도를 보였다. 따라서 H. pylori 대변항원검사는 소아에서 제균요법 후 균 박멸여부를 확인하는 데에도 매우 유용한 비침습적인 검사방법이라고 하겠다. Purpose: The Helicobacter pylori stool antigen (HpSA) enzyme immunoassay is a non-invasive test for the diagnosis and monitoring of H. pylori infection. But, there are few validation studies on the HpSA test after eradication in children. The aim of this study was to assess the diagnostic accuracy of HpSA enzyme immunoassay for the detection of H. pylori to confirm eradication in children. Methods: From January 2001 to October 2003, 164 tests were performed in 146 children aged 1 to 17.5 years (mean $9.3{\pm}4.3$ years). H. pylori infection was confirmed by endoscopy-based tests (rapid urease test, histology, and culture). All H. pylori infected children were treated with quadruple regimens (Omeprazole, amoxicillin, metronidazole and bismuth subcitrate for 7 days). Stool specimens were collected from all patients for the HpSA enzyme immunoassay (Primier platinum HpSA). The results of HpSA tests were interpreted as positive for $OD{\geq}0.160$, unresolved for $$0.140{\leq_-}OD$$<0.160, and negative for OD<0.140 at 450 nm on spectrophotometer. Results: 1) One hundred thirty-one HpSA tests were performed before treatment. The result of HpSA enzyme immunoassay showed three false positive cases and one false negative case. The sensitivity, specificity, positive predictive value, and negative predictive value of HpSA enzyme immunoassay before treatment were 96.4%, 97.1%, 90%, and 99%, respectively. 2) Thirty-three HpSA enzyme immunoassay were performed at least 4 weeks after eradication therapy. The results of HpSA enzyme immunoassay showed two false positive cases and one false negative case. The sensitivity, specificity, positive predictive value, and negative predictive value after treatment were 88.9%, 91.7%, 80%, and 95.7%, respectively. Conclusion: Diagnostic accuracy of the HpSA enzyme immunoassay after eradication therapy was as high as that of the HpSA test before eradication therapy. The HpSA enzyme immunoassay was found to be a useful non-invasive method to confirm H. pylori eradication in children.

Enzyme immunoassay(EIA)에 의한 소의 progesterone 측정과 이의 응용에 관한 연구 II. Progesterone 측정에 대한 효소면역측정방법(酵素免疫測定方法)의 확립

강정부,신종욱,최상용,Kang, Chung-boo,Shin, Jong-uk,Choe, Sang-yong 대한수의학회 1989 大韓獸醫學會誌 Vol.29 No.1

This experiment was carried out to determine the progesterone concentration of bovine plasma by liquid phase double antibody enzyme immunoassay. The optimum conditions of assay-system, enzyme conjugate and gelatin were invested. The sensitivity, recovery rate and reproducibility by this assay were also analyzed. The results obtained were as follows: 1. The suitable supplementation level of gelatin was 0.2%. As the gelatin level increased to 1%, coefficient variation of interassay was shown to be irregular. 2. The optimum dilution rate of enzyme conjugate was 30 times. Enzyme activity was greatly fluctuated depending on the minor condition of enzyme conjugate technique. Therefore, it was considered to be checked when determined. 3. The sensitivity of the assay was 12 pg/tube. 4. Recovery rate was decreased when the amount of sample was too little or too much, but the recovery rate was high as 97.8% when the amount of sample between 50 and $200{\mu}l$. 5. Mean intra-assay and inter-assay coefficient of variation was 4.5% and 5.9%, respectively. By using liquid phase double antibody enzyme immunoassay, progesterone in plasma can be detected, and also this assay system is applicable to study on physiological function of progesterone and to diagnosis of reproductive disorders.

Enzyme-linked fluorescent immunoassay에 의한 가공식품 중 땅콩의 검출

김미혜(Mi-Hye Kim),김현정(Hyun-Jung Kim),손동화(Dong-Hwa Shon) 한국식품과학회 2009 한국식품과학회지 Vol.41 No.1

Enzyme-linked fluorescent immunoassay(ELFA)를 이용하여 가공식품 중 땅콩을 분석하고, 그 결과가 표시내용과 일치하는지를 조사하였다. 땅콩으로부터 분리한 조단백질(CPP)을 토끼에게 면역하여 생산한 특이항체 및 horseradish peroxidase-항체 복합물을 이용하여 sandwich ELFA를 확립하였다. 특이항체의 교차반응은, CPP, 땅콩, 아몬드, 콩, 호도에 대하여 각각 100, 9.8, 1.1×10?², 4.4×10?³, 0%로 나타났다. 시료로는 비스킷, 스낵, 초콜릿 등 19점을 사용하였다. 이들의 분석결과, 7점의 시료에서 땅콩이 검출 되었으며, 이 중 땅콩의 함유가 표시된 제품은 5점이었고 그렇지 않은 제품은 2점이었다. 이들 2점 중 하나는 아몬드를 함유하고 있다고 표시된 비스킷으로 분석 상 미량(2.1×10?³%)의 땅콩이 검출되었는데, 이는 교차반응 때문으로 추측된다. 나머지 1점은 대두의 함유가 표시된 스낵으로 분석 상 9.8×10?²%의 땅콩이 검출되었다. 이는 대두의 매우 낮은 교차반응율을 감안하면 제조공정상 땅콩의 교차오염 때문으로 추측된다. 이와 같이 ELFA에 의하여 가공식품 중 땅콩의 검출이 가능하였고, 현재 유통 되는 일부 가공식품 중 알레르겐의 표시를 정확히 할 필요가 있다고 생각한다. In this study we analysed for peanuts in processed foods using an enzyme-linked fluorescent immunoassay (ELFA), and compared the results with labeled ingredients. Crude peanut protein (CPP) was immunized into rabbits to produce specific antibodies(Ab). A sandwich ELFA was established using anti-CPP Ab and Ab-horseradish peroxidase (HRP) conjugate. The cross-reactivities of the Ab toward CPP, peanuts, almonds, soybeans, and walnuts were 100, 9.8, 1.1 × 10?², 4.4 × 10?³, and 0%, respectively. The samples included 19 items consisting of biscuits, snacks, chocolates, and so on. The results from the sandwich ELFA showed that peanuts were contained in 7 of the processed food items, among which, 5 items were labeled as having peanuts present but 2 items were not. One of the 2 items that was peanut-detected but unlabeled was a biscuit labeled to contain almonds and assayed to contain 2.1×10?³% peanuts, which might have been due to the weak cross-reactivity of the Ab toward almonds. The other item was a snack labeled to contain soybeans and assayed to contain 0.098% peanuts, which might have been due to peanut cross-contamination during processing, since the crossreactivity of the Ab toward soybeans was very weak. These results suggest that ELFA is a good tool to detect peanuts in processed foods, and allergens in certain processed foods should be labeled correctly.

Enzyme immunoassay(EIA)에 의한 소의 혈중 progesterone 측정과 이의 응용에 관한 연구 I. 이항체(二項體)의 최적조건에 관한 연구

강정부,신종욱,최상용,Kang, Chung-boo,Shin, Jong-uk,Choe, Sang-yong 대한수의학회 1988 大韓獸醫學會誌 Vol.28 No.2

This experiment was carried out to determine the progesterone concentration of bovine plasma by liquid phase double antibody enzyme immunoassay. The optimum conditions of assay-system, double (first and second) antibody and carrier (normal rabbit serum) were investigated. The optimum dilution rate of first antibody, second antibody and normal rabbit serum was $10{\times}10^3$ to $15{\times}10^3$, 20 and $1{\times}10^3$ times, respectively.

임상 검체에서 중합효소연쇄반응을 이용한 C형 간염 바이러스의 검출

홍승복,우경남,이도훈,최윤미 충북대학교 의과대학 충북대학교 의학연구소 1996 忠北醫大學術誌 Vol.6 No.1

C형 간염 바이러스는 RNA 바이러스로 현재 항원의 일부인 C-100-3에 대한 항체를 검출하므로써 HCV 감염의 진단에 널리 이용되고 있다. 그러나 현재 사용되고 있는 효소면역 측정법은 예민도는 매우 높으나 거기에 따른 위양성의 결과가 많다고 보고되어, 그에따른 문재점이 대두되고있다. 따라서 검사 결과의 특이도를 높임과 동시에 실질적으로 검사실에서 쉽게 이용할 수 있는 새로운 검사법의 도입이 절실히 요구된다. 이에 본 연구자들은 분자 생물학적 기법중 하나인 중합효소 연쇄반응을 이용하여 실제 임상 검체에서 HCV의 RNA를 검출하므로써 민감도뿐만 아니라 특이도를 높일 수 있는 검사 기법으로써의 유용성을 평가하고자 하였다. 연구는 간염 바이러스의 감염이 의심되는 총 67 검체를 대상으로 실시하였고 검체는 혈청을 이용하여 acid guanidium thiocyanate-phenol chloroform 방법으로 RNA를 추출하고 비구조성 유전자의 5'-noncoding 부위에 해당되는 부위를 primer로 사용하여 중합효소 연쇄반응을 실시하였다. 본 연구에서 동시에 같이 실시한 anti-HCV 항체 검사는 microparticle enzyme immunoassay 방법을 이용하였고 4가지의 recombinant 단백질인 c200, c22-3, HC-34, HC-31에 대한 항체를 검출할 수 있다. RT-PCR 검사 결과, PCR 양성인 11명 중 9명에서 anti-HCV 항체가 검출되었으며, anti-HCV 항체가 음성인 30명은 모두 RT-PCR에서 음성을 보였다. RT-PCR 상 음성인 51명 중 30명은 anti-HCV 항체가 검출되지 않았으나 10명에서는 항체가 검출되었다. ALT 수치 변화에 따른 비교를 살펴보면 RT-PCR과 anti-HCV 항체 양성자의 ALT 분포도를 살펴보면 40 UI/L 이하로 정상인 경우는 RT-PCR 양성 중에는 2명 (18.2%)이었고, anti-HCV 항체 양성 중 9명 (47.4%)이었다. 40 UI/L 이상으로 증가된 경우에서는 RT-PCR 양성 중 9명(81.82%), anti-HCV 항체 양성 중 10명 (52.6%)이었다. 이상의 결과에서 C형 간염을 진단하기 위한 검사법으로는 민감도는 높으나 특이도에 문제가 있는 anti-HCV 항체 검사 결과의 신빙도를 높이기 위해서는 RT-PCR을 이용해 C형 간염의 감염 여부를 확진함이 필요할 것으로 사료된다. The enzyme immunoassay test is a very sensitive method to detect anti-HCV antibody but this is known to have high false positive rate. It is necessary to have another method to diagnosis hepatitis C viral infection. As a new method tool, we evaluated the polymerase chain reaction method to detect HCV RNA. A reverse transcription PCR was compared with the enzyme immunoassay in samples which were requested for anti-HCV antibody test. Of the 19 anti-HCV antibody positive samples, 9 were also positive for RT-PCR. Among RT-PCR positive 11 samples, none of all showed negative for anti-HCV antibody. The prevalence of HCV RT-PCR of the liver disease was 45.5% in the chronic hepatitis, 27.2% in liver cirrhosis, 27.3% in other liver disease. The positivity of RT-PCR was also higher in group had elevated serum ALT level than in group with normal serum ALT level. We concluded that HCV RT-PCR can be the additional test for the confirmation of anti-HCV antibody test by enzyme immunoassay.

Microparticle enzyme immunoassay법을 이용한 혈청 T3의 측정

홍기숙 대한임상병리학회 1992 대한임상병리학회지 Vol.12 No.4

로타바이러스 검출을 위한 두 가지 면역크로마토그래피법 신속검사의 평가

김수경,김영진,조선영,박태성,이희주 대한진단검사의학회 2019 Laboratory Medicine Online Vol.9 No.2

배경 로타바이러스는 전 세계적으로 5세 이하의 소아에서 장염을 일으키는 주요 병원균이다. 최근에는 로타바이러스 검출을 위한 검사방법으로 면역크로마토그래피법(ICA)이 널리 사용되고 있다. 이 연구의 목적은 두 제조사의 로타바이러스 신속 검사 키트의 성능을 비교 평가하고자 하였다. 방법 2017년 11월부터 2018년 1월까지 수집된 총 130개의 소아 급성 장염환자의 잔여 분변 검체를 사용했다. 기존에 시행되어 온 효소면역측정법과 면역크로마토그래피법에 기반한 두 개의 로타바이러스 신속 검사 키트(SD BIOLINE Rotavirus kit와 GENEDIA Rotavirus Ag Rapid Test) 간의 검사 결과를 비교하였다. 결과 SD BIOLINE Rotavirus kit와 효소면역측정법의 양성일치율, 음성일치율, 총 일치율은 각각 98.0%, 100%, 99.2%로 나타났다. GENEDIA Rotavirus Ag Rapid Test와 효소면역측정법의 양성일치율, 음성일치율, 총 일치율은 각각 96.0%, 100%, 98.4%로 나타났다. 결론 두 제조사의 로타바이러스 신속 검사 키트 모두 기존의 효소면역측정법과 매우 좋은 일치율을 보였다. 따라서 짧은 검사 시간 내에 간편하게 분변 검체에서 직접 로타 바이러스 검출이 가능한 유용한 검사로 생각된다. Background Rotavirus is a major pathogen causing enteritis worldwide in children under five years of age. In recent years, immunochromatographic assay (ICA) has been widely used as a diagnostic test for rotavirus detection. This study aimed to compare and evaluate the performance of ICA-based rotavirus rapid test kits from two manufacturers. Methods Residual stool samples from a total of 130 children with acute enterocolitis from November 2017 to January 2018 were used. We compared the results of the two immunochromatographic methods (SD BIOLINE Rotavirus kit and GENEDIA Rotavirus Ag Rapid Test) with those of the currently used enzyme immunoassay method. Results Positive agreement, negative agreement, and total agreement rates between the SD BIOLINE rotavirus kit and the enzyme immunoassay were 98.0%, 100%, and 99.2%, respectively. Positive agreement, negative agreement, and total agreement rates between the GENEDIA Rotavirus Ag Rapid Test and the enzyme immunoassay were 96.0%, 100%, and 98.4%, respectively. Conclusions Both rotavirus rapid test kits showed very good agreement with the conventional enzyme immunoassay. Therefore, it could be a useful test to detect rotavirus directly from stool samples in a short time.

갑상선 기능검사에 있어서의 자동효소 면역측정기 IMx에 대한 평가

이위교,최태윤,이동화,강득용 대한임상병리학회 1992 대한임상병리학회지 Vol.12 No.4

Nested PCR과 DNA Enzyme-Linked Immunosorbent Assays를 이용한 Ralstonia solanacearum의 검출

고영진,조홍범,Ko, Young-Jin,Cho, Hong-Bum 한국미생물학회 2007 미생물학회지 Vol.43 No.3

본 연구는 polymerase chanin reaction(PCR)기법과 DNA enzyme-linked immunosorbent assay(DNA ELISA) 기법을 이용하여 토양내 식물병원균인 Ralstonia solanacearum를 검출하고자 하였다. 토양 시료로부터 분석에 사용될 R. solanacearum DNA를 추출하기 위하여 몇 가지 방법을 비교 평가한 결과 기존의 DNA 추출 방법에 비하여 Guanidin isothiocyanate와 Chelex-100 resin을 사용하는 방법 이 토양 내에 존재하는 다양한 중류의 반응 저해 물질과 R. solanacearum만의 고유한 PCR반응 저해물질들을 제거하는 데에 효과적이었다. R. solanacearum만을 특이적으로 검출하기 위해 fliC유전자 부위에 특이적인 몇 종의 primer들을 제작하였다. 이들 중 높은 민감도와 특이도를 나타내는 두 set의 primer RsolfliC(forward; 5-GAACGCCAACGGTGCGAACT-3 and reverse; 5-GGCGGCCTTCAGGGAGGTC-3, designed by J. $Sch\ddot{o}nfeld$ et al.)와 RS_247 (forward; 5-GGCGGTCTGTCGGCRG-3 and reverse; 5-CGGTCGCGTTGGCAAC-3, designed by this study)를 선정하여 nested PCR을 수행할 수 있도록 고안하였다. Nested PCR primer에 biotin을 표지하였고 nested PCR산물의 내부 서열과 특이적으로 교잡반응을 할 수 있는 probe를 제작하여 PCR 결과를 DNA-EIA반응으로 확인 분석할 수 있도록 하였다. Primary PCR과 nested PCR의 산물을 전기영동 상에서 확인한 결과, nested PCR이 약 $10^2$정도의 높은 민감도를 나타내었고 DNA-EIA의 경우 $10^2P{\sim}10^3$정도의 민감도를 상승시켜주는 것으로 확인되었다. In this study, we used the method of guanidin isothiocyanate and boiling with Chelex-100 resin to extract genomic DNA of Ralstonia solanacearum from soil. It is more efficient than general protocols to remove inhibitory compounds in soil and R. solanacearum on. Then, we applied polymerase chain reaction and DNA enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to identify and detect pathogen. The fliC gene of R. solanacearum was selected for specific detection of pathogen and primer sets were designed. Among the primer sets, two specific and sensitive primer sets, RsolfliC(forward: 5-GAACGCCAACGGTGCGAACT-3 and reverse; 5-GGCGGCCTTCAGGGAGGTC-3, designed by J. $Sch\ddot{o}nfeld$ et al.) and RS_247 (forward: 5-GGCGGTCTGTCGGCRG-3 and reverse; 5-CGGTCGCGTTGGCAAC-3 designed by this study), were designed to perform nested PCR. Nested PCR primer was labeled with biotin for hybridization between nested PCR product and probe to analyze with DNA ELISA.

인체 혈장 중 칼시트리올의 효소면역 분석법 검증 및 단회투여 후 약물동태 연구

김예태 ( Ye Tae Kim ),진수언 ( Su Eon Jin ),김현기 ( Hyun Ki Kim ),신백기 ( Baek Ki Shin ),정의현 ( Ui Hyeon Jeong ),김종국 ( Chong Kook Kim ),박정숙 ( Jeong Sook Park ) 韓國藥劑學會 2009 Journal of Pharmaceutical Investigation Vol.39 No.4