BSA 또는 Fatty Acid Free BSA 첨가가 닭 희석 정자와 동결 정자의 생존성에 미치는 영향

김성우(Sung Woo Kim),김민수(Min Soo Kim),유연희(Yeonhui Yu),김찬란(Chan-Lan Kim),전익수(Ik Soo Jeon),김종대(Chongdae Kim) 한국가금학회 2017 韓國家禽學會誌 Vol.44 No.1

본 연구에서는 닭 정액의 운동성 분석에 미치는 요인을 분석하기 위하여 희석배율에 따른 생존성을 조사하고, 신선정액의 희석 시에 필요한 조건을 확보하기 위하여 희석제에 단백질원으로서 BSA와 FAF-BSA의 첨가가 닭정자의 생존성에 미치는 영향을 관찰하였다. 최종 희석율이 1/4이 되도록 닭 정액을 희석하여 생존성을 조사하면 신선정액에서 희석율이 1/8, 1/16 및 1/32로 낮아질수록 89.9%, 69.9% 및 53.2%로 생존율이 낮아지는 것을 관찰하였으며, 단백질원으로 BSA나 FAF-BSA를 이용하면 생존율을 유의적으로 증진시킬 수 있음을 증명하였다. 또한 이러한 현상은 동결정액의 희석에도 중요한 요인으로 관찰되었는데, FAF-BSA를 이용하여 희석할 때 단백질이 없는 경우보다 양호한 생존율이 나타난다는 것을 관찰하였다(17.6% 대 34.0%). 그러나 단백질원을 활용하더라도 닭정액의 희석율이 낮아질수록 생존율이 저하하는 현상은 지속적으로 나타나고 있으며, 신선정액에 비하여 동결정액은 장수성이 낮은 것으로 추정되었다. 그러므로 본 연구에서 사용된 정자의 분석방법은 닭 정액 동결을 실시하여 운동성을 분석할 때 필요한 기본 정보를 제공할 수 있을 것으로 판단되며, 닭 희석배율을 낮추어 동결 정액의 효율성을 높이는 연구에 기여할 것으로 추정된다. This study examined factors affecting the analysis of motility of chicken semen. The viability of spermatozoa was estimated using varying dilution ratios and supplementation with BSA or fatty acid free (FAF)-BSA as protein sources in semen diluent. Fresh semen was examined after preparing dilutions in beltsvile poultry semen extender (BPSE) of 1/8, 1/16 and 1/32 at 25℃. The motility of incubated semen at each dilution was observed at 3 min (89.9%, 69.9% and 53.2%), 30 min (86.7%, 71.4% and 51.7%), 1 h (89.5%, 74.0% and 53.5%) and 3 h (78.5%, 66.5% and 45.7%), respectively. The addition of BSA or FAF-BSA to BPSE diluent significantly increased the viability of semen in 1/32 dilution with results of 53.2% (control), 84.8% (BSA) and 92.9% (FAF-BSA) (p<0.05). This phenomenon was also observed in the dilution of frozen semen, where FAF-BSA treatment increased the viability of thawed semen from 17.6% to 34.0% in a 1/8 dilution (p<0.05). When the protein sources were used in the dilution, the survival rates of diluted chicken semen were also increased with time lapse. These results show that FAF-BSA may act to protect chicken semen and is suitable as a basic component of chicken semen diluent for the method of analyzing rooster semen after freezing.

BSA고정막에 의한 Tryptophan 이성질체의 분리

김민,김재훈,나원재,김병식 한국막학회 2006 멤브레인 Vol.16 No.2

방사선 그라프트 중합법을 적용하여, 폴리에틸렌 다공성 중공사막에 전자선을 조사시킨 후, glycidyl methacrylate(GMA)를 그라프트 중합하였다. 그 후, 음이온 교환기로서 diethylamine (DEA), triethylamine (TEA)를 도입시켜 2종류의 음이온 교환막을 합성하였다. DEA막과 TEA막의 이온교환 밀도는 3.4 mmol/g, 1.74 mmol/g으로 DEA막이 TEA막보다 높은 이온교환기를 얻을 수 있었다. 이 2종류의 음이온교환막에 단백질(bovine serum albumin, BSA)을 투과법에 의해 고정시켜 BSA 고정막을 만들었다. DEA-BSA막의 경우, 그라프트 체인에 BSA가 8층 이상으로 다층 흡착하였으나, TEA-BSA막의 경우, 강한 음이온에 의해 다층 흡착이 이루어지지 않았다. DEA-BSA막의 경우, BSA 다층 흡착성 고정을 나타내기 때문에 L-Trp가 D-Trp보다 더 강한 흡착 특성을 나타내었다. L, D-Trp 이성질체 혼합물을 투과시킨 BTC에 있어서, DEA-BSA 막의 경우, BSA에 대한 L-Trp와 D-Trp의 키랄 인식이 다르기 때문에 2단계의 BTC곡선을 얻을 수 있었다. A hollow fiber membrane containing BSA as ligand was Prepared by radiation-induced grafting GMA onto a porous polyethylene hollow fiber and subsequent reacting with DEA and TEA. The density of the DEA and TEA of the membrane were 3.4 mmol/g, 1.7r mmol/g, respectively. The DEA membrane exhibited a higher amount of than the TEA membrane. BSA was immobilized by the graft chains during the permeation of BSA solution throught the DEA and TEA membrane. The BSA was adsorbed in multilayer binding of 8 onto the DEA membrane whereas adsorption onto the TEA membrane remained constant. A two-stage stepwise BTC was observed due to independent chiral recognition for L, D-Trp solution by DEA-BSA membrane.

AOT 역미셀 용액으로부터 BSA의 역추출에 영향을 미치는 인자들에 관한 연구

노선균,강춘형 한국생물공학회 2000 KSBB Journal Vol.26 No.4

주입법을 이용하여 AOT 역미셀 용액에 가용화된 BSA를 과잉 수용액으로 역추출할 때 효율에 영향을 미치는 요인들 에 대하여 조사하였다. 특히 수용액의 pH, 수용액에 가한 염 의 종류와 농도, 알코올의 종류에 따른 영향을 검토하였다. 더하여, 역추출된 BSA의 CD 스펙트럼을 원래의 BSA의 CD 스펙트럼과 비교하여 추출공정 중에 발생하는 구조적 변화를 결정하였다. KCI이나 NaCI과 같은 1: 1염을 수용액에 첨가하 면 BSA의 등전점 이상의 pH에서는 거의 100% 역추출 효율을 보였다. 이것은 첨가된 염에 의하여 유발되는 역미셀과 단백질 간의 전기적 상호작용의 변화에 기인한 것으로 추측 된다 $CaCl_2$ 과 $MgCl_2$, 와 같은 1:2염의 경우에는 20% 이하의 역추출 효율을 보였다. 1가 염과 2가 염의 경우 각각 pH=7 과 pH=8에서 최고의 효율을 보였다 표면활성시약으로써 알 코올을 침가하는 경우에는 역추출 효율이 향상됨을 보였다. 과잉 수용액으로 추출된 BSA의 CD 스펙트럼으로부터 추출 공정 중에는 특이할 만한 구조적 변성은 관찰되지 않았으며, 특정된 추출조건에서는 원래의 단백질 보다 높은 활성을 보이기도 하였다. The factors affecting the back-extraction efficiency of Bovine Serum Albumin (BSA, Mw. 65kDa, pl 4.9) solubilized in an AOT reverse micellar solution, prepared by the injection method, to an excess aqueous phase were investigated. In particular, the effects of pH, the types of salts, alcohols added as cosurfactants, and their concentrations in the aqueous phase were examined. Furthermore, by comparing the CD spectra of the back-extracted BSA and the feed BSA, the structural changes of BSA during the extraction process were determined. The addition of 1:1 salt such as KCl or NaCl to the aqueous phase resulted in almost a 100% extraction to the aqueous phase at a pH higher than its isoelectric point pl. This high efficiency of back-extraction might be due to the change in the interactions between the protein and micellar aggregates driven by the added salt. For 1:2 salts like $CaCl_2$ and $MgCl_2$, BSA was back-extracted with lower than 20% extraction efficiency. Maximum extraction efficiencies were attained at about pH=7 and pH=8 for monovalent and divalent salts, respectively. The addition of alcohols as cosurfactants led to an improvement in monovalent and divalent salts, respectively. From the CD spectra of BSA extracted to the aqueous phase, it was observed that denaturation of BSA was not significant. In certain back-extraction conditions, the extracted BSA showed even higher activity than the feed BSA.

전기방사로 제조된 PES-BSA 친화막의 흡착특성

변홍식,홍병표 한국막학회 2008 멤브레인 Vol.18 No.4

전기방사법을 이용하여 제조된 pelyestersulfone (PES)-bovin albumin serum (BSA) 친화막에 대하여 L-tryptophan에 대한 흡착특성을 연구하였다. FESEM과 Image Analyzer를 이용하여 방사조건에 따른 섬유의 직경분포를 비교분석 함으로써 섬유의 직경을 조절할 수 있음을 알았다. 또한, 2,2,3,4,4,4-Hexafluoro-1-butanol (HFB)와 BSA의 함량증가에 따른 미세섬유 발생빈도가 높아져서 Darcy 투과도, 기계적 물성, 발수성이 증가한다는 것을 알았다. L-tryptophan의 용출량은 tris-HCl 완충용액보다 borate-DMSO 완충용액에서 높았으며, A 8022형 BSA보다 A 7906형 BSA가 높은 용출량을 보였다. 이러한 결과는 BSA의 종류에 따른 그 특성에 기인하는 것으로 A 7906형은 A 8022형보다 순도가 높고 분자량 분포가 고르며, 사용 pH 환경이 더욱 안정적이기 때문이다. The adsorption characteristics of L-tryptophan of PES-BSA affinity membranes prepared by using electro-spinning were investigated. It was found that the fiber diameters could be controlled by the comparisons of fiber diameters prepared by various spinning conditions through FESEM and Image Analyzer. Darcy's permeability constants, mechanical properties and hydrophobic properties were enhanced since micro-fibers increased by increasing the composition ratio of HFB and BSA. The elution capacity of L-tryptophan in borate-DMSO buffer solution was higher than that in tris-HCl buffer solution, while the elution capacity of A 7906 type BSA was higher than A 8022 type BSA. This is due to the characteristics of BSA type, i. e. higher purity and uniform molecular weight and better pH stability of A 7906 type BSA than those of A 8022 type BSA.

착상전 이배체 단위발생 돼지난자의 체외 배양에서 세포사멸과 세포사멸에 관여하는 유전자의 발현에 관한 연구

X. S. Cui,I. H. Kim,N. H. Kim 한국동물생명공학회(구 한국동물번식학회) 2003 Reproductive & developmental biology Vol.27 No.2

본 연구는 착상전 이배체 단위발생 돼지난자를 체외 배양시 우태아혈청 (FBS), 우혈청 알부민 (BSA) 및 상피세포성장인자 (EGF)를 배양액에 첨가하였을 때 배반포, 총 세포수, 세포사멸 및 세포사멸에 관여하는 유전자의 발현을 조사하고자 수행하였다. 0.4% BSA를 배양액에 첨가하였을 때 2세포기 단위발생 난자의 배반포까지의 발달율이 증가되었다(P<0.01). FBS는 배반포의 총세포수를 감소시 켰고 세포사멸을 증가하였다(P<0.01). 그리고 EGF는 BSA가 존재하는 조건하에서 배반포의 총세포수를 증가하였는데 EGF와 BSA가 각각 단독으로 존재할 때는 이런 작용이 없었다. 세포사멸도 이와 이슷한 경향을 보였는데 EGF와 BSA가 각각 존재할 때에는 비처리군과 차이가 없었지만 함께 존재할 때에는 세포사멸을 감소시켰다. RT-PCR의 결과에 의하면 EGF는 BSA가 존재하는 배양액에서 Bcl-xL 유전자의 상대적 발현량을 증가시키고 Bak 유전자의 상대적 발현량에는 영향을 주지 않는 과정을 통하여 세포사멸을 감소시키는것 같다. 반면에 FBS는 Bcl-xL의 발현량을 감소시키고 Bak 유전자의 상대적 발현량을 증가시킨다. 이러한 결과는 세포사멸에 관여하는 유전자의 발현은 배양액의 첨가물에 따라 유의적으로 영향을 받으며, 체외배양시 배아의 초기발달에 관여함을 시사한다. This study was conducted to determine effects of polyvinyl alcohol (PVA), fetal bovine serum (FBS) bovine serum albumin (BSA) and epidermal growth factor (EGF) on blastocoel formation, total cell number, apoptosis and apoptosis-related gene expression of porcine diploid parthenotes developing in vitro. The addition of 0.4% BSA to the culture medium enhanced the development of 2-cell stage parthenotes to the blastocysts stage (P<0.01). FBS reduced cell numbers of blastocysts (P<0.01) and increased percentage of apoptosis in the blastocysts (P<0.001). However, while BSA increased cell numbers, it did so only when EGF was present. Either agent on its own had no effect. Similarly, apoptosis in the blastocysts was not influenced by either agent on its own but was reduced when both BSA and EGF were present. Furthermore, semi-quantitative reverse-transcriptase polymerase chain reaction revealed that EGF enhanced the mRNA expression of Bcl-xL in the presence of 0.4% BSA but BSA and EGF alone had no effect, and EGF and/or BSA did not influence Bak gene expression in the blastocyst stage parthenotes. However FBS reduced Bcl-xL mRNA expression (P <0.05) and enhanced Bak expression. This result suggests that apoptosis related genes expression is significantly affected by supplements, which may result in alteration of apoptosis and embryo viability of porcine embryos developing in vitro.

The rheological properties and gelation kinetics of corn starch/bovine serum albumin blend

Osita Sunday Nnyigide,현규 한국유변학회 2020 Korea-Australia rheology journal Vol.32 No.1

The rheological properties and gelation kinetics of corn starch (CS)/bovine serum albumin (BSA) blends were investigated using the mass ratio of [CS]/[BSA] of 0, 0.5, 1, 2, and 3. The results from the temperature ramp and time sweep tests within linear viscoelastic regime showed a decrease in the gelation temperature (Tgel) and gelation time (tgel) of the BSA with increasing the mass ratio of [CS]/[BSA]. A significant decrease in the Tgel and tgel occurred at 5 wt.% BSA with [CS]/[BSA] = 3, where about 12℃ and 11 min drops in the Tgel and tgel were recorded. At the molecular scale, the decrease in the Tgel and tgel with increasing the mass ratio of [CS]/[BSA] was attributed to the breaking down of hydrogen bonding sites in the CS molecules with increasing temperature, and thereby allowing the hydroxyl group to engage in intermolecular hydrogen bonding with the BSA polar amino acid residues. The hydrogen bonding in addition to other noncovalent forces appeared to strengthen the microstructure of the CS/BSA gel as confirmed by the dynamic frequency sweep test. The frequency sweep test also showed that the value of the storage modulus (G') at [CS]/[BSA] = 3 was about 10 to 103 orders of magnitude larger than its value recorded for the pure BSA. Kinetically, the gelation process was well modelled by the temperature dependency of reaction rate constant as represented by the Arrhenius equation. If interpreted in terms of the energy required to attain the gel state, the addition of CS reduced the gel activation energy (Ea) to 153.90 kJ/mol as against the original value of 268.55 kJ/mol that was observed for the BSA without CS.

Effect of Bovine Serum Albumin on the Stability of Methotrexate-encapsulated Liposomes

Kim, Chong-Kook,Kim, Han-Sung,Lee, Beum-Jin,Han, Jeong-Hee The Pharmaceutical Society of Korea 1991 Archives of Pharmacal Research Vol.14 No.4

The effect of bovine serum albumin (BSA) on the encapsulation efficiency and stability of liposomes containing methotrexate (MTX) having different surface charges and cholesterol contents were investigated. The encapsulation efficiency of MTX was lower and the release of MTX was faster by the addition of BSA. The leaking of MTX from lipid bilayer depends upon the BSA concentrations. These results may be derived from the interaction of BSA with lipid bilayers. The dynamic structural changes of BSA were monitored indirectly using circular dichroism spectra. Observed dynamic structural changes of BSA with liposomes are presumed to reflect the interaction of BSA with liposomes. Negatively charged liposomes have more strong interaction with BSA than neutral and positively charged liposomes. BSA attacks lipid bilayers whether it is at the inner or at the outer phase of lipid bilayer and induces leakage of entrapped MTX. Especially, negatively charged liposomes are more sensitive than others. The inclusion of cholesterol in the lipid layers inhibits the interaction of BSA with liposomes and shows protective effect against BSA-induced leakage of MTX. To endure the attacking of BSA liposomes as drug carriers should be made using cholesterol.

마이야르 반응에 의한 BSA-갈락토만난 복합체의 구조 및 유화 특성

문태화 서울대학교 농업개발연구소 1999 농업생명과학연구 Vol.3 No.-

Bovine serum albumin-galactomannan (BSA-GM) conjugates were prepared through Mail;lard reaction. With an increase in reaction ratio of GM to BSA, 2.5-7 moles of GM were bound to 1 mole of native BSA. Intrinsic fluorescence analysis suggested that the surface of each conjugate was covered with GM and the conformation of hydrophobic interior was not changed. Binding ability of BSA-GM conjugates to a hydrophobic probe was higher as compared to native BSA. Secondary structure showed little difference in native BSA and BSA-GM conjugates. Thus, it would suggest that the covalent bond between BSA and GM was formed outward of the α-helical region. The emulsifying properties of BSA-GM conjugates were improved as compared with those of native BSA and BSA-GM mixture. The improvement of emulsifying properties was due to the hydrophilicity, steric hindrance and viscoelastic properties caused by GM.

A Dual Effect of Hydrocortisone on the Inhibition of intracellular Free Calcium Level Which are Highly Correlated with Leukotrien C₄ Production in Rat Basophilic Leukemia Cells : 세포내 칼슘량과 LEUKOTRIENE C₄ 생산은 不可無의 相關關係

Her, Erk 건국대학교 1992 學術誌 Vol.36 No.2

人造 부신피질 호르몬중의 하나인 HYDROCORTISONE(HC)은 가장 강한 抗 Allergy 抗염증약이다. 이 약은 Allergy와 염증을 일으키는 물질들의 생산과 세포의 분비를 억제하는 것으로 알려져 있다. Leukotriene(LTC4)는 이러한 Allergy와 염증을 일으키는 주요한 물질중의 하나이다. LTC4는 5-lipoxygenase(5-LOX)라는 효소에 의해 세포막 지질에서 생성된 Arachdonic acid라는 지방산으로부터 생산된다. 이 효소의 촉매작용은 칼슘의 농도에 크게 의존한다. 이러한 학문 바탕 위에서, 호중구 암세포(RBL-2H3)에 있어 항원에 의해 유기된 LTC4 생산을 HC가 어떠한 mechanism속에서 억제하는지 알고자 함이 실험연구의 목적이다. 기본실험에 있어, LTC4 생산을 의한 DNP10BSA 항체 IgE와 항원 DNP10BSA의 최고 효과적인 농도는 각각 2㎍/106 cells, 18.8ng/106 cells이었다. HC가 항원이 유기 생산한 LTC4량을 억제하는 것은 배양시간과 농도에 의존했었다. 최고 효과적인 항원 농도에 의해 유기 생산된 LTC4량을 50% 억제하는데 최고 효과적인 HC농도(1㎍/ml)로 2.5 시간의 사전 배양이 요구되었다. HC 사전 배양시간이 증가함에 따라 항원에 유기생산된 LTC4량이 감소하는데, 4시간 사전 배양은 control에 비해 75%을 감소시켰다(p < 0.005). 4시간 HC 사전 배양후, LTC4 생산을 억제하는데 HC의 IC50價는 0.3μM이였고, 최대 억제농도는 27μM였다. LTC4량을 측정하는데 Radioimmunoassay(RIA)법의 신뢰 여부를 알기 위해, 다른 방법중의 하나인 Thin layer chromatography(TLC)법을 이용하여 비교해 봤다. 비교 결과, RIA법의 신뢰도가 높았고, 上同 2개의 방법에 의한 값이 거의 相同했었으며, RBL-2H3 암세포는 LTC4를 거의 생산치 않고 주로 LTC4를 생산한다는 것이 발견되었다(LTC4 vs LTD4 p<0.005). 세포내 방사선 동위원소 칼슘(45Ca2+)의 침투량을 측정하는 실험에 있어서는 세포내의 칼슘의 이온화와 불이 온화를 구별할 수 없는 단점이 있어 이온화된 칼슘만을 측정할 수 있는 방법을 모색했었다. 세포내 이온화된 칼슘 측정이 중요한 것은 세포학에서 말하는 주요한 second messenger가 이온화된 칼슘이기 때문이다. 그래서 이온화된 칼슘의 양의 증감을 측정하기 위해 Quin2/AM법을 사용했다. 항 DNP10 BSA 항체 IgE가 감작된 RBL-2H3 암세포에 항원 DNP10BSA로 유기했을 때 세포내 이온화된 칼슘([Ca2+]i,)의 양이 비교구보다 3.5배나 증가했었다(p<0.01). 항원 DNP10 BSA로 RBL-2H3를 유기했을 때 [Ca2+]i량이 최고치에 도달하는 데 소요되는 시간은 1.5∼2분 정도였다. 그런데 HC가 사전 처리한 세포에서는 [Ca2+]i, 최고치가 현저히 억제되었다(p<0.01). 항원을 투입한 뒤 12분후, HC를 사전 처리하지 않는 세포에 있어서는 최고치량에서 7 ± 3% 정도 감소했었다. 이에 반해 HC를 사전 처리한 세포에서는 75 ± 7% 감소했었다(p<0.005). HC를 6시간 사전 처리한 세포들은 현저히 LTC4 생산뿐만 아니라 [Ca2+], 증가를 현저히 감소시켰다(p<0.05). 이러한 HC 효라는 세포내 칼슘 침투를 억제하는 藥 Nifedipine과 세포내 칼슘을 세포외로 pumping하는 藥 TPA의 효과와 흡사했다. 그래서 HC는 세포내 칼슘량을 억제하는 데 양면성이 보인다고 예측되어진다. 그리고 [Ca2+]i량의 증감과 LTC4 생산 증감과 밀접한 상관관계가 있다는 것이 통계적으로 입증되었다(r = 0.94, p<0.01). 결론적으로 호염기구에서 HC이 LTC4를 억제하는 mechanism은 일차적으로 미지의 단백질을 생산하고 이러한 단백질이 세포내 칼슘의 침투를 억제하거나 세포내 칼슘을 세포외로 pumping함으로써 [Ca2+]i량을 억제하는 것 같다. Hydrocortisone(HC) is extremely potent anti-allergic and antiinflammalory druge which suppress the biosynthesis and/or release of inflammatory mediators. Leukotriene C4 (LTC4) is one of the maim mediators, which is produced through the 5-lipoxygenase. This enzyme activity is dependent on high Ca2+ concentrations. The aim of this study was to insight the mechanism of HC actions on antigen-induced LTC4 formation in rat basophilic leukemia(RBL-2H3) cells. The maximal effective doses IgE and its antigen DNP10BSA for stimulation of the LTC4 formation were 2㎍.106 cells and 18.8ng/106 cells, respectively, The inhibitory effect of HC on the antigen-induced LTC4 formation was time-and dele-dependent. The half maximal effective time for the HC action was about 2.5 hr(hours) of preincubation. This time-dependent inhibition increased slowly to approximately 75% inhibition(p < 0.005) after 4 hr of pretreatment. Under 4 hr pretreatment with HC, IC50 values of HC on LTC4 production was 0.3μM, and maximal inhibitory dose was 2μM. In validation of the radiommunoassay(RIA) for the measurement of LTC4 production using a thin layer chromatography(TLC), I found that RBL-2H3 produced mainly LTC4, while only slightly LTD4 (LTC4 vs LTD4 p,0.005). The results obtained with TLC with regard to LTC4 formation were similar to that obtained by RIA. Since radioisotope labelled calcium(45Ca2+) studios have limited resolution to distinguish intracellular free calcium([Ca2+]i) from the whole cellular Ca2+, 1 measured [Ca2+]i, using a Quin2/AM probe. In the cells stimulated by maximal effective dose of antigen, HC markedly suppressed [Ca2+]i elevation (p 01). Half maximal time for elevation of [Ca2+]i induced by antigen was less than 1 min, and maximal elevation of [Ca2+]i (3 fold increase) was reached within 1.5∼2 minutes(min). This peak of [Ca2+]i level in the control group decreased gradually to 7 ± 3% during 12 min of incubation. Following pretreatment with HC, the antigen-stimulated increase of [Ca2+], was stunted by 41 ± 8%(p<0.01) after 2∼3 min and drastically reduced by 75 ± 7%(p<0.005) at 12 min. Preincubation for 6 hr of RBL-2H3 cells with HC(1㎍/ml) abolished the anti DNP10BSA antibody IgE and antigen DNP10BSA complex(Ag-Ab) induced [Ca2+]i increment and LTC4 production(p <0.05). This HC effect on two parameters mimicked the direct effects of Ca2+ efflux enhancer, TPA, and a Ca2+ channel blocks, nifedipine. Moreover, there was high correlation between [Ca2+]i elevation and LTC4 formation(4 = 0.94, p < 0.01), suggesting a causal relation between the two parameters. These data indicate that the inhibitory effect of HC on LTC4 formation requires a DNA-dependent protein synthesis and reduction of [Ca2+]i.

Effect of Apoptosis on Porcine Parthenotes Development in vitro

Jae-Dal Lee(이재달) 한국산학기술학회 2013 한국산학기술학회논문지 Vol.14 No.8

이배체 단위발생 돼지 난자를 체외 배양시 배반포 형성 단계에서 FBS (우태아 혈청), BSA (우혈청 알부민), EGF (상피세포 성장인자)를 배양액에 첨가하였을 때 이배체 단위발생 에서 총세포수, 세포사멸 및 세포사멸에 관여하는 유전 자의 발현 효과를 조사하고자 본 연구를 수행하였다. 0.4% BSA를 배양액에 첨가 하였을 때 2 세포기 단계 단위발생의 발달은 배반포 까지는 강화 되었다 (p<0.01). FBS 처리 시는 배반포의 세포 수는 감소시켰으나 세포 사멸률은 증가하였다 (p<0.01). 하지만 EGF가 존재할 때 BSA 처리는 총 세포수를 증가 시켰다. RT-PCR의 결과에 의하면 EGF는 0.4% BSA가 존재하는 배양액에서는 Bcl-xL mRNA 발현을 증가시키고 BSA와 EGF 가 단독으로 존재 할 때는 효과가 없었다. 하지만 FBS 처리시 Bcl-xL 유전자 발현은 감소하고 Bak 유전자의 발현은 증가시킨다. 이러한 결과 세포사멸에 관여하는 유전자 의 발현은 배양액의 첨가물에 따라 유의적으로 영향을 받으며, 돼지 배아의 체외 배양시 세포사멸과 초기발달에 관여함을 시사한다. This study was conducted to determine the effects of fetal bovine serum (FBS), bovine serum albumin (BSA) and epidermal growth factor (EGF) on blastocoel formation, total cell number, apoptosis and apoptosis-related gene expression of porcine diploid parthenotes developing in vitro. The addition of 0.4% BSA to the culture medium enhanced the development of 2-cell stage parthenotes to the blastocysts stage (p<0.01). Treatment of FBS reduced cell numbers of blastocysts (p<0.01) and increased the percentage of apoptosis in blastocysts (p<0.001). However, BSA increased cell numbers, only in the presence of EGF reverse-transcriptase polymerase chain reaction revealed that EGF enhanced the mRNA expression of Bcl-xL in the presence of 0.4% BSA but BSA and EGF alone had no effect. However, Treatment of FBS reduced Bcl-xL mRNA expression (p<0.05) and enhanced Bak expression. This result suggests that apoptosis related gene expression is significantly affected by supplements, which may result in alteration of apoptosis and embryo viability of porcine embryos developing in vitro.