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- 저자 : Gerald R. Fink (검색결과 3 건)
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Localization of KEMI::lacZ Fusion Protein in Yeast Cells
Kim, Jinmi,Fink, Gerald R 충남대학교 생물공학연구소 1996 생물공학연구지 Vol.4 No.-
Sacharomyces cerevisiae의 KEM1 유전자는 세포의 영양 상태에 따라 spindle pole body나 microtubules의 기능을 조절하는 것으로 알려져 있다. 이 유전자 산물의 세포내 분포 및 기능을 규명하기 위하여, KEMI::lacZ 융합 유전자를 제조하였다. 즉, 클론된 KEM1 유전자에 대장균의 β-galacatosidase 구조유전자를 갖는 mini-Tn10-LUK element를 무작위 삽입한 pool을 제조하고, 이를 분석하여 KEM1의 기능 부위가 약 3.5kb에 해당함을 확인하였고, KEM1의 기능이 살아있는 KEM1::lacZ 융합 유전자의 클론을 선별하였다. 이 클론을 β-galacatosidase 항체를 이용한 indirect immunofluorescence 방법으로 분석하여 KEM1::lacZ 융합 단백질이 핵주변에 위치함을 확인하였다. KEM1 is known to control the spindle pole body or microtubule function, probably in response to the cellular nutritional conditions in Saccharomyces cerevisiae. Transposon insertions were performed in the cloned KEM1 gene using mini-Tn10-LUK element carrying E. coli β-galactosidase structural gene. A collection of random Tn10-LUK insertions defined an approximately 3.5 kb region required for the KEM1 function. From this collection functional KEM1::lacZ protein fusions were identified. Indirect immunofluorescence using anti-β-galacatosidase antibodies localized the KEM1::lacz fusion protein to the periphery of the nucleus.
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Localization of a KEM1::lacZ Fusion Protein in Yeast Cells
김진미,Kim, Jin-Mi,Fink, Gerald R. The Microbiological Society of Korea 1994 미생물학회지 Vol.32 No.1
KEM1 is known to control the spindle pole body or microtubule function, probably in response to the cellular nutritional conditions in Saccharomyces cerevisiae. Transposon insertions were performed in the cloned KEM1 gene using mini-Tn10-LUK element carrying E. coli ${\beta}$-galactosidase structural gene. A collection of ranfom Tn10-LUK insertions defined an approximately 3.5 kb region required for the KEM1 function. From this collection functional KEM1::lacZ protein fusions were identified. Indirect immunofluorescence using anti-${\beta}$-galacatosidase antibodies localized the KEM1::lacZ fusion protein to the periphery of the nucleus. Saccharomyces cerevisiae의 KEMI 유전자는 세포의 영양 상태에 따라 spindle pole body나 microtubules의 기능을 조절하는 것으로 알려져 있다. 이 유전자 산물의 세포내 분포 및 기능을 규명하기 위하여, KEM1::lacZ 융합 유전자를 제조하였다. 즉, 클론된 KEM1 유전자에 대장균의 ${\beta}$-galactosidase 구조유전자를 갖는 mini-Tn10-LUK element를 무작위 삽입한 pool을 제조하고, 이를 분석하여 KEM1의 기능 부위가 약 3.5kb에 해당함을 확인하였고, KEM1의 기능이 살아있는 KEM1::lacZ 융합 유전자의 클론을 선별하였다. 이 클론을 ${\beta}$-galactosidase 항체를 이용한 indirect immunofluorescence 방법으로 분석하여 KEM1::lacZ 융합 단백질이 핵주변에 위치함을 확인하였다.
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kem Mutations Affect Nuclear Fusion in Saccharomyces cerevisiae
Kim, Jinmi,Per O. Ljungdahl,Gerald R. Fink 충남대학교부설 생명공학연구소 1992 생물공학연구지 Vol.2 No.-
We have identified mutaions in three genes of Saccharomyces cerevisiae, KEMI, KEM2 and KEM3, that enhance the nuclear fusion defect of kar1-1 yeast during conjugation. The KEMI and KEM3 genes are located on the left arm of chromosome Ⅶ. Kem mutations reduce nuclear fusion whether the kem and the kar1-1 mutations are in the same or in different parents(i.e., in both kem kar1-1×wild-type and kem×kar1-1 crosses). kem1×kem1 crosses show a defect in nuclear fusion, but kem1×wild-type crosses do not. Mutant kem1 strains are hypersensitive to benomyl, lose chromosomes at a rate 10_-20-fold higher than KEM^+ strains, and lose viability upon nitrogen starvation. In addition, kem1/ken1 diploids are unable to sporulate. Cells containing a ken1 null allele grow very poorly, have an elongated rod-shape and are defective in spindle pole body duplication and/or separation. The KEM1 gene, which is expressed as a 5.5-kb mRNA transcript, contains a 4.6-kb open reading frame encoding a 175-kD protein.
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