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Large Volume Sample Stacking 방법과 Head Column Stacking 을 이용한 프로틴과 펩타이드의 시료 농축
강대천,도길명,김용성,정두수 경남대학교 기초과학연구소 2001 硏究論文集 Vol.15 No.-
현재 세포 성분 내에서의 단백질들의 기능규명, 새로운 신약의 개발 등은 매우 중요함을 차지하고 있다. 그러나 현재의 분석 기술인 2-D 젤 모세관 전기 영동 장치, 액체 크로마토그래피 그리고 질량 분석기 등의 여러 가지 방법들은 세포 내에서 극 미량의 단백질들을 분석하는데 있어서 충분한 감도를 제공하지 못한다. 이 실험에서는 모세관 전기 영동 장치를 이용한 단백질과 펩타이드의 분석에서 시료의 낮은 농도의 감도를 향상시키기 위하여 시료 농축 방법인 Large Volume Sample Stacking 방법과 Head column stacking 방법을 이용하여 분석을 하였다. α - lactalbumin과 trypsin inhibitor들과 같은 단백질들을 위의 시료 농축 방법을 이용하여 낮은 시료의 농도 0.01 ㎍/㎖까지 농축이 가능하였다. 또한 효소로 처리한 잘려진 단백질들의 절편들도 극 미량의 low femtomole 수준까지 검출이 가능하였다. 그리고 low femtomole 수준의 단백질 절편들을 규명하기 위하여 CE-MS를 사용하였다 The identification proteins in the cell is very important for Proteomics research. However, current analytical techniques such as 2-D gel electrophoresis, 1iquid chromatography and mass spectrometry do not provide enough sensitivity for cell proteins especially for low-abundant proteins. Therefore, protein and peptide concentration method should be developed for the easy operation of current identification technologies. In order to enhance the concentration sensitivity in capillary electrophoresis of proteins deptides, large volume sample stacking using electroosmotic flow pump and LVSEP combined with Head column stacking were applied. Proteins such as α -Lactalbumin and trypsin inhibitor were successfully stacked and their limits of detection were below 0.01㎍/㎖. A large volume of digested protein samples was also stacked and the enhanced sensitivity allowed one to analyze protein digests at low femtomole levels. CE-MS was employed for the identification of protein digests at low femtomole levels.