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Kinetics of Cultivating Mammalian Cells in Fed-Batch Process for the Production of Erythropoeitin
Yu, Ho Kuem,Choi, Suk Kyu,Lee, Youn Soo,Shin, Kwang Soon,Hwang, Hee Koo,Lee, Hyeon Yong 한국산업미생물학회 1991 한국미생물·생명공학회지 Vol.19 No.5
유전자 재조합된 동물 세포의 유가 배양시 1.85×10 exp(-10)(mmole/cell/h)의 비 glucose 소비속도와 4.7×10 exp(-7)(㎍/cell/h)의 erythropoeitin(EPO)비 생산속도를 유지할 수 있었다. 또한 이같은 배양에서 회분 및 연속 배양에서보다 높은 세포수를 얻었으며 전 배양이 유사 안정상태에 도달하는 배양 후기에는 glutamolysis가 생육 공정에 매우 중요한 역할을 하고 있음이 확인됐다. 유가 배양시 13(mmole/l)의 glucose 농도에서 생육 제한 현상이 일어났으며, 이같은 농도에 도달할 때까지는 glucose의 농도가 증가함에 따라 배양시간의 경과와 함께 EPO 생산성이 증가했다. 1.85×10 exp(-10)(mmole/cell/h) of specific glucose consumption rate was obtained under fed-batch cultivation of recombinant mamalian cells with maintaining 4.7×10 exp(-7)(㎍/cell/h) of average specific erythropoeitin production rate. Higher maximum cell density was also achieved than for both cases of batch and perfusion cultivations. It proves that glutamolysis dominates metabolic pathways at latter period of cultivation where quasi steady state was maintained. Substrate limitation of glucose concentration was estimated as 13 (mmole/l) under fed-batch conditions, while specific product production rate was decreased according to cultivation time, erythropoeitin production was increased as glucose concentration in the media increased up to 13.2(mole/l).
인체 갑상세포의 대사조절에 의한 프로 유로카이나제의 생산
강재구,최석규,이현용 한국산업미생물학회 1990 한국미생물·생명공학회지 Vol.18 No.4
5% 혈청을 포함한 DMEM 배지에 갑상세포주 579를 연속배양하여 약 5.7×10 exp(-8) g/h/cell에 해당하는 pro-UK의 비생산속도를 얻을 수 있었다. 또한 배지의 이동속도가 증가할수록 glutamine의 소비속도가 증가하는 반면 ammonia 생산속도는 일정하게 유지되는, glutamine의 완전동화에 의한 물질생산증가 현상을 나타냈다. 5mM의 glucose와 2mM의 glutamine, 포화용존 공기의 10%에 해당하는 용존산소 및 pH6.2의 maintenance 생육조건하에서 약 15일간 유지시켜, 12×10 exp(-8)g of pro-UK/h/cell의 최대 비생산속도와 0.226㎎/g of glucose의 생산수율을 얻었으며, 이는 10㎖/min의 배지 이동속도를 유지하는 연속배양 조건에서 매일 0.223㎎의 pro-KU를 생산할 수 있음을 의미한다. Maximum specific pro-UX production rate was achieved at 15㎖/min of perfusion rate as 5.7×10 exp(-8) ㎍/h/cell by cytostatic cultivation of human cell line 579 with DAEM and 5% FBS. As perfusion rates were increased, glutamine uptake rates were also increased but ammonium production rates remained relatively constant, which resulted in low ratio of ammonium to glutamine at high perfusion rate. Partially it quantitatively explains why the productivity is increased in perfusion cultivations. At maintenance period of 15 days by controlling metabolic process, such as 5 mM of glucose, 2 mM of glutamine, 10% of air saturation and pH 6.2 high speecific product production rate and product yield on substrate were obtained as 12×10 exp(-8) ㎍/h/cell abd 0.226 ㎎/g of glucose, respctively. This product yield corresponds to 0.223 ㎎/day of productivity at 10㎖/min of perfusion rate.