Clostridium thermocellum 으로부터 새로운 제한효소 Cth Ⅱ의 분리

최강덕,유욱준 ( Kang Duk Choi,Ook Joon Yoo ) 생화학분자생물학회 1990 BMB Reports Vol.23 No.3

A new restriction enzyme has been isolated by DEAE-cellulose and Phosphocellulose columns from a thermophilic anaerobic bacterium, Clostridium thermocellum ATCC 27405. Following CthI, the second peak of sequence specific endonuclease activity was eluted from the Phosphocelluse column. The enzyme was designated as CthII. The recognition sequence of CthII was determined to be the dcm sequence, 5`-CC↑ (A/T) GG-3` and the cleavage site was indicated by the arrow. CthII endonuclease requires Mg^(2+) ion for its activity and is maximally active at a pH range from 8.0 to 9.0. CthII endonuclease is heat stable and has an optimum reaction temperature of 55℃. Like BstNI and ZanI this enzyme was able to cleave dcm-methylated DNA.

Clostridium thermocellum으로부터 새로운 제한효소 CthII의 분리

최강덕,유욱준,Choi, Kang-Duk,Yoo, Ook-Joon Korean Society for Biochemistry and Molecular Biol 1990 한국생화학회지 Vol.23 No.3

Clostridium thermocellum(ATCC 27405) 2g(wet weight)으로부터 새로운 type II 제한효소인 CthII를 분리하여, 그 효소의 생화학적 특성을 연구하였다. CthII는 DEAE-Cellulose와 Phosphocellulose chromatography를 통하여 분리하였다. 두번째 column인 Phosphocellulose column을 통해 나온 fraction들 중 이미 발견된 CthI peak보다 나중의 fraction들에서 이 효소가 발견되었다. CthII는 5'-CC${\uparrow}$ (A/T) GG-3'를 인식하며 화살표로 표시한 위치를 절단하는 효소임이 밝혀졌다. 이 효소의 반응을 위한 최적온도는 $55^{\circ}C$였으며, $Mg^{2+}$ 존재하에 pH 8과 pH 9 사이에서 최대활성을 보여주었다. 또한 이 효소는 NaCI이 없는 상태에서 정상적인 효소 활성을 보여주었고, NaCl 농도가 100 mM 이상일 때는 그 효소 활성이 감소됨을 관찰하였다. CthII는 BstNI과 ZanI과 같이 dcm-methylated DNA(5'-$C^{me}C$(A/T)GG-3')도 정상적으로 절단할 수 있는 특성도 있음이 발견되었다. A new restriction enzyme has been isolated by DEAE-cellulose and Phosphocellulose columns from a thermophilic anaerobic bacterium, Clostridium thermocellum ATCC 27405. Following CthI, the second peak of sequence specific endonuclease activity was eluted from the Phosphocelluse column. The enzyme was designated as CthII. The recognition sequence of CthII was determined to be the dcm sequence, 5'-CC${\uparrow}$ (A/T) GG-3' and the cleavage site was indicated by the arrow. CthII endonuclease requires $Mg^{2+}$ ion for its activity and is maximally active at a pH range from 8.0 to 9.0. CthII endonuclease is heat stable and has an optimum reaction temperature of $55^{\circ}C$. Like BstNI and ZanI this enzyme was able to cleave dcm-methylated DNA.

번식 2 ; 생쥐의 유선조직에서 Lipase 유전자의 발현

최강덕,김도형,정형민,이상민,이훈택,정길생 한국동물자원과학회 ( 구 한국축산학회 ) 1993 한국축산학회 심포지움자료집 Vol.- No.-

Clostridium thermocellum 으로 부터 새로운 type Ⅱ 제한효소 Cth Ⅰ 분리

최강덕(K . D . Choi),김기태(Kitae Kim),유욱준(Ook Joon Yoo) 한국미생물생명공학회 1987 한국미생물·생명공학회지 Vol.15 No.5

성장생물학 : 한국 약용식물 추출물이 In vitro 돼지 지방조직의 지방합성과 지방전구세포의 분화에 영향을 미친다

최강덕 ( Kang Duk Choi ),김성도 ( Sung Do Kim ),정정수 ( Chung Soo Chung ),최영숙 ( Young Suk Choi ),필립오웬즈 ( Phillip Owens ) 한국동물자원과학회 ( 구 한국축산학회 ) 2010 한국축산학회지 Vol.52 No.5

In vivo 실험에 의해서 지방축적을 억제할 수 있는 물질을 찾아내는 것은 시간과 비용이 많이 든다. 본 연구는 돼지 지방조직을 이용한 in vitro system을 이용해서 한국의 약용식물 중에서 지방축적 억제 작용을 가지는 것을 조사하고자 수행하였다. 총 183종의 약용식물을 이용하여 이들이 돼지 지방조직의 지방합성과 지방전구세포의 분화에 미치는 작용을 조사하였다. 에탄올 추출물은 72종, 물 추출물은 111종, 이 중에서 65종은 물과 에탄올 모두 이용해서 추출하였다. 돼지 지방조직의 지방합성은 13종류의 약용식물이 영향을 미쳤는데, 그 중 11종은 대조구에 비하여 지방합성을 40% 이상 억제하였고, 4종은 지방합성을 70% 이상 억제하였다. 가장 강력한 지방합성 억제작용을 나타낸 것은 붓꽃과와 고삼(에탄올 추출) 그리고 좁쌀풀(물과 에탄올 추출)이었다. 그러나 소목과 황백은 지방합성을 촉진하였다. 돼지 지방전구세포의 분화에 미치는 결과는 총 28종의 약용식물이 돼지 지방전구세포의 분화에 영향을 미쳤는데, 이 중 16종의 약용식물은 증가시켰고, 12종은 억제시켰다. 목단피와 강활(에탄올 추출) 그리고 당귀, 목향 및 신이(물 추출)는 지방세포의 분화를 두 배 정도 증가시켰다. 10종의 약용식물 즉 감초, 형개 및 구월나무(에탄올 추출) 그리고 비름과, 천문동, 백출, 유자나무, 향부자, 구엽초 및 목단피(물 추출)은 지방세포의 분화를 35% 이상 억제시켰다. 구월나무(에탄올 추출)만이 지방합성뿐만 아니라 세포분화도 억제하였다. 본 연구 결과는 약용식물로부터 가축과 사람의 지방축적 억제효능 후보물질을 발굴하기 위한 기초자료로 활용할 수 있을 것으로 여겨진다. Identification of natural compounds that can prevent the development of obesity in vivo is time consuming and expensive. We have used in vitro systems derived from pig adipose tissue to screen simple aqueous or ethanolic extracts of Korean medicinal herbs (KMH) for their anti-adipogenic potential. A total of 183 extracts were tested for their actions in lipogenesis of pig adipose tissue and differentiation of pig preadipocytes. Ethanol extracts were prepared from 72 and aqueous extracts were prepared from 111 medicinal herbs. Both an ethanolic and an aqueous extract were prepared from 65 of these. Thirteen extracts substantially altered rates of lipogenesis in vitro. The effects of KMH on lipogenesis of pig adipose tissue are as follows. Elevens reduced lipogenesis to rates that were more than 40% lower than control and four of these reduced rates of lipogenesis by more than 70%. The most potent anti-lipogenic extracts were those obtained in ethanol from Iridaceae and from Sophora fiavescens AIT as well as both the aqueous and ethanolic extracts from Lysimachia vulgaris L. Two extracts, those prepared in water from Caesalpiniae lignum and from Phellodendri cortex, were found to promote rates of lipogenesis in vitro. The effects of KMH on differentiation of pig preadoipocytes are as follows. Twenty-eight extracts altered the rates of differentiation of cultured porcine preadipocytes. Sixteen increased and twelve reduced the rates of differentiation of preadipocytes. Extracts prepared in ethanol from Moutan radicis cortex and from Ostericum koreanum and those prepared in water from Angelicae gigantis radix, from Inula henenium L and from Magnolia fios doubled the rate of differentiation of cultured porcine preadipocytes. Ten extracts reduced the in vitro rate of differentiation of porcine preadipocytes by more than 35%. These were the ethanolic extracts from Glycyrrizae radix, Nepetae spica and from Polygala myrtifolia and the aqueous extracts from Amaranthaceae, Asparagus cochinchinesis, Atractylodis rhizoma alba, Citrus junos TANAKA, Cyperus rotundus, Epimedium grandiflorum and from Moutan radicis cortex. Only the ethanolic extract from Polygala myrtifolia was able to both reduce lipogenesis in adipose tissue slices and retard differentiation of cultured preadipocytes. The results of our study will provide meaningful information to identify medicinal herbs which would reduce fat deposition in livestocks and humans

번식 2 ; Polymerase Chain Reaction 을 이용한 착상전 돼지 수정란의 성판별

이형건,최강덕,정형민,김해정,이훈택,정길생 한국동물자원과학회 ( 구 한국축산학회 ) 1993 한국축산학회 심포지움자료집 Vol.- No.-

학술발표회 : 번식 ( 구두발표 ) ; 형질전환 동물의 유즙으로부터 성장호르몬의 분비에 관한 연구

구덕본,최강덕,이상민,김도형,이훈택,정길생 한국동물자원과학회 ( 구 한국축산학회 ) 1994 한국축산학회 심포지움자료집 Vol.- No.-

번식 2 ; SV40 - LacZ 유전자가 도입된 생쥐 수정란의 체외발생과 미세주입된 유전자의 발현

정형민,최강덕,이상민,김도형,구덕본,이훈택,정길생 한국동물자원과학회 ( 구 한국축산학회 ) 1993 한국축산학회 심포지움자료집 Vol.- No.-

닭의 인테페론 감마 유전자의 구조와 5'-조절부위의 규명

송기덕,최강덕,Lillehoj, Hyun S.,한재용 한국축산학회 1999 한국축산학회지 Vol.41 No.4

Phage clones harboring chicken interferon-gamma (chIFN-γ) were isolated and genomic structure was elucidated. The chIFN-γ contains four exons and three introns spanning over 14 kb, and follows the GT/AG rule for correct splicing at the exon/intron boundaries. The four exons encode 41, 26, 57, and 40 amino acids, respectively, suggesting that the overall structure of IFN-γ is evolutionarily conserved in mammalian and avian species. The 5'-untranslated region and signal sequences are located in exon 1. Several AT-rich sequences located in the 4th exon may indicate a role in mRNA turnover. The 5'-flanking region contains sequences homologous to the potential binding sites for the mammalian transcription factors, activator protein-1 (AP-1), activator protein-2 (AP-2), CAMP-response element binding protein (CREB), activating transcription factor (ATF), GATA-binding factor (GATA), upstream stimulating factor (USF). This suggests that the mechanisms underlying transcriptional regulation of chicken and mammalian IFN-γ genes may be similar.

생쥐 수정란에 미세주입된 Lac Z유전자의 발현

김도형,최강덕,이상민,이훈택,정길생,정형민 건국대학교 동물자원연구센터 1993 動物資源硏究誌 Vol.18 No.-

본 연구는 미세주입에 의한 형질전환 동물을 생산하기 위한 기초 연구로서 착상 전 단계의 생쥐 수정란에 미세주입된 외래유전자의 발현 유무를 수정란 발달 단계별로 조기에 판별할 수 있는 방법을 개발하고자 실시하였다. 주입용 DNA는 SV40 early promotor와 SV40 poly A site가 붙어 있는 Lac Z 유전자를 이용하였으며, 외래유전자의 발현유무를 조사하기 위하여 β-galactosidase에 의해서 분해되어 청색의 염색상을 나타내는 X-gal 염색법을 이용하였다. 전핵기 단계의 웅성전핵에 선형의 Lac Z 유전자를 미세주입후 체외배양한 결과, 미세주입된 수정란의 생존율은 84.0%였으며, 이들 수정란의 2-, 4-, 8-세포기, 및 상실배기 혹은 배반포기로의 배발생률은 각각 100%, 92.6%, 84.0% 및 76.6%였다. 이들 수정란 각 단계의 수정란에서 X-gal 염색이 관찰되었으며, 발현율은 각 단계에서 11.6%∼26.3%로서 발달 단계별 유의한 차는 없었다. 이상의 결과로 미루어 볼 때, Lac Z유전자를 reporter 유전자로 사용하여 미세주입된 외래유전자의 발현 유무를 조기에 판정이 가능하다고 본다. 또한, 이러한 외래유전자의 발현 조기판정 기술은 미세주입된 유전자가 발현된 수정란만을 선별하여 가친에 이식하여 형질전환 동물의 생산효율을 극적으로 제고시킬 수 있다고 사료된다. This basic study on the production of transgenic animal was designed to develop the early detection method for the expression of a microinjected foreign gene inthe preimplantation mouse embryos. DNA (5.5kb) for microinjection ws LacZ gene fused between SV40 early promotor and SV40 poly A site. Since X-gal is known to release an insoluble dye after enzymatic cleavage with β-galactosidase. we adopted X-gal staining method to examine the expression of microinjected LacZ gene in the developing mouse embryos. After microinjecting linear DNA into male pronuclei of mouse embroys and incubating them for 24∼72 hours, we found the survival rate of microinjected embroyos was 84.0。, and their developmental rates to 2-cell, 4∼, 8cell, and morula and blastocyst stage were 100, 92.6, 84.0 and 76.6%, respectively. Blue spots with X-gal staining were observed at every cell stage, adn the range of expression rates was 11.6%∼26.3% without significant differences among cell stages. Therefore, these results suggest that it is possible to detect the expression of microinjected LacZ at the preimplantation embryo stage. In addition to, this early detection method of the expression of a foreign gnen may highly increase the efficiency of transgenic animal production, because only expressioned embryos are able to be selected and transfeed to the foster mother.