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Phytophthora cambivora KACC 40160으로부터 새로운 elicitin의 분리
윤상홍,배신철,박인철,구본성,김용환,여윤수,Yoon, Sang-Hong,Bae, Shin-Chul,Park, In-Cheol,Koo, Bon-Sung,Kim, Young-Hwan,Yeo, Yun-Soo 한국응용생명화학회 2003 한국농화학회지 Vol.46 No.2
난균류에 속하는 Phytophthora spp.와 pythium spp.에서 분비되는 단백질인 elicitin은 식물과 병원균과의 비친화적 관계에서 과민감반응을 유도하는 인자로 알려져 왔다. 국내에서 수집된 5종의 Phytophthora spp로부터 분리된 elicitin들은 무, 배추, 고추에서 과민감 반응을 유도 하였으나 오이, 토마토에서는 볼 수 없었다. 특히 지금까지 보고가 되지않은 P. cambivora KACC 40160균주의 배양액으로부터 ion exchange와 gel filtration을 이용하여 고추에 과민감반응을 유도하며 분자량이 10kDa인 새로운 elicitin을 순수분리 하여 cambivorein이라 명명 하였다. 분리된 cambivorein의 N-말단 아미노산 서열분석 결과 ${\beta}-isoform$의 특징인 13번째 아미노산이 Iysine을 가지고 있었으며 기존의 다른 종류의 elicitin과는 다른 아미노산으로 구성되어 있었다. Elicitins, proteinaceous elicitors secreted from Oomycetes fungi (Phytophthora spp. and Pythium spp.), have been known as inducer of hypersensitive response (HR) in incompatible interactions between plant and pathogens. Five elicitins among many Korean Phytophthora species caused the reactions of distal HR in radish, chinese cabbage and some hot pepper cultivars, but not in cucumber and tomato. Because the isolation of elicitin from Phytophthora cambivora hasn't been reported yet, we have purified a cambivorein, a new member of the elicitin family, from the culture filtrate of Phytophtilora cambivora (KACC 40160) by using FPLC (Fast Protein Liquid Chromatography, AKTA) with sepharose S and Sephacryl HR columns. We confirmed that it induces necrosis activities in some hot pepper cultivars and its molecular weight is about 10 KDa by Tricine-SDS-PAGE. Comparison of amino acid sequences of its N-terminal ends also informed the identification of Iysine at the 13th position, which is characteristic of a kind of basic elicitin isoform $({\beta}-isoform)$. It Also showed that our elicitin is not identical with N-terminal sequences of many elicitins reported from Phytophthora spp..
Violacein을 생산하는 Massilia sp. EP15224 균주
윤상홍 ( Sang Hong Yoon ),백희진 ( Hee Jin Baek ),권순우 ( Soon Wu Kwon ),이창묵 ( Chang Muk Lee ),심준수 ( Joon Soo Sim ),한범수 ( Bum Soo Hahn ),구본성 ( Bon Sung Koo ) 한국미생물생명공학회(구 한국산업미생물학회) 2014 한국미생물·생명공학회지 Vol.42 No.4
비올라세인은 항균, 항암, 항산화, 항말라리아, 항설사 활성과 같은 다양한 생리활성을 가지는 보라색소 물질로 알려져 있다. 본 연구에서는 한국의 산림토양에서 분리되었으며 보라색 색소를 생산하는 EP15224 균주를 선발하여 16S rRNA유전자의 염기서열을 분석하였다. 그 결과 Massilia sp. BS-1과 97%의 가장 높은상동성을 보였다. 또한 16S rRNA 유전자에 근거한 계통분류학적 분석에서 EP15224는 기존 보고된 비올라세인 생산 세균들과는 별개로 구분되는 Massilia속의 새로운 종임을 확인하였다. 이 균주가 생산하는 보라색소물질을 분리하여 LC/MS/MS로 분석한 결과, 분자량이 343.34인 비올라세인과 일치하였다. 또한 비올라세인의 생산효율을 높여주는 최적의 배지성분[glucose 2 g/l, (NH4)2SO4 1 g/l, Na2HPO4· 7H2O 2 g/l, KH2PO4 1 g/l, MgSO4· 7H2O0.1 g/l, L-tryptophan 0.24 g/l]과 배양조건[25oC에서 72시간배양, 250 rpm, 10% 접종량]을 조사하였으며 이 조건에서 액체배양 하였을 때 리터 당 280 mg의 비올라세인이 생산되었다. Violacein has received much attention due to its various important biological activities, including broad-spectrum antibacterial and antifungal activity, anti-malarial, anti-tumoral, anti-oxidant, and anti-diarrheal activities. EP15224 strain isolated from forest soils in Korea was found to be a new species belonged to the genus Massilia based on its 16S ribosomal DNA sequences. The 16S ribosomal DNA of strain EP15224 displayed 97% homology with Massilia sp. BS-1, the nearest violacein-producing bacterium. Strain EP15224 produced bluish-purple pigment well in a synthetic MM2 medium containing glucose, (NH4)2SO4, Na2HPO4·7H2O, KH2PO4, MgSO4·7H2O, and 1 mM L-tryptophan. The chemical analysis of the pigment by LC/MS/MS showed that it is violacein with molecular weight of 343.34. This is the second report on the production of violacein by a Massilia species. In this study, the optimal culture conditions for violacein production were established under which 280 mg/l crude violacein was produced : glucose 2 g/l, (NH4)2SO4 1 g/l, Na2HPO4·7H2O 2 g/l, KH2PO4 1 g/l, MgSO4·7H2O 0.1 g/l, L-tryptophan 0.24 g/l, 25 ml medium in a 250 ml flask, with an inoculumn size of 10% (v/v), 72 h of cultivation with 250 rpm at 25oC.
Egr-1 유전자의 발현 유도물질을 생산하는 항균성 저 영양 세균의 분리 및 동정
윤상홍 ( Sang Hong Yoon ),김동관 ( Dong Gwan Kim ),이영한 ( Young Han Lee ),신순영 ( Soon Young Shin ),권순우 ( Soon Woo Kwon ),이창묵 ( Chang Muk Lee ),강한철 ( Han Chul Kang ),구본성 ( Bon Sung Koo ) 한국미생물생명공학회(구 한국산업미생물학회) 2011 한국미생물·생명공학회지 Vol.39 No.2
전국 경작지 토양에서 분리한 저 영양 세균 3,800주를 대상으로 암 억제유전자의 작동과 관여하는 전사인자인 Egr-1의 promoter 활성화를 유도하는 세 균주(SSG5, SSG6, SSG10)가 Egr-1 reporter assay와 western blotting 분석으로 최종 선발되었다. 이들 선발 균주들은 16S rDNA와 상업용 생화학적 키트(API 20NE, API ZYM, ID 32GN) 분석에 의해 모두 Pseudomonas koreensis인 것으로 최종 동정되었다. 이들 균주들은 Egr-1 발현을 유도하는 물질뿐만 아니라 다양한 세균의(B. subtilis, S. aureus, and L. monocytogenes) 성장을 저해하는 항균물질도 생산하는 것을 확인하였다. The Egr-1 gene is known to be a transcription factor for activating the expression of many tumor-repressing genes. In this study, three strains activating the promoter of the Egr-1 gene were selected, through the use of Egr-1 luciferase reporter assay and western blotting, from amongst approximately 3,800 oligotrophic bacteria isolated from the cultivated soils of various regions within Korea. These strains were identified as Pseudomonas koreensis on the basis of phylogenetic tree analysis of their 16S ribosomal DNA sequences and biochemical characteristics analyses using a variety of commercial kits (API 20NE, ID 32GN, API ZYM kits). In addition, we discovered that these strains produced anti-bacterial activity against Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes.
식품 및 환경, 기타 한국 전통젓갈에서 분리한 Bacillus subtilis JKK238 균주 유래 세 종류 Lipopeptide의 분리 및 특성
윤상홍 ( Sang Hong Yoon ),김정봉 ( Jung Bong Kim ),임융호 ( Yoong Ho Lim ),홍성렬 ( Seong Ryeul Hong ),송재경 ( Jae Kyeung Song ),김삼선 ( Sam Sun Kim ),권순우 ( Soon Wo Kwon ),박인철 ( In Cheol Park ),김수진 ( Soo Jin Kim ),여윤 한국미생물생명공학회 2005 한국미생물·생명공학회지 Vol.33 No.4
Methionine Enkephalin 유사물의 합성에 관한 연구 ( 1 )
최정,윤상홍,안봉전 ( Cheong Choi,Sang Hong Yoon,Boug Jeun An ) 생화학분자생물학회 1983 BMB Reports Vol.16 No.4
Synthesis of methionine enkephalin and (phe¹), (D-ala¹), (Dala²) analogues of methionine enkephalin was carried by solid phase method. The yield ranged from 55 to 65 % owing to an improved reaction vessel. Coupling was perfomed by dicyclohexylcarbodiimide. After cleavage with dried HBr, the peptides were purified by gel filtration and ion-exchange chromatography. Their purity was assessed by thin layer chromatography, paper electrophoresis, melting point and amino acid analysis. Methionine enkephalin and (phe¹), (D-ala¹), (Dala²) analogues of methione enkephalin were incubated in vitro with endopeptidase (α-chymotrypsin, trypsin) and exopeptidase (carboxypeptidase A, leucine aminopeptidase) in order to study the degradation patterns of peptides. Methionine enkephalin and (phe¹), (D-ala¹), (Dala²) analogues of methionine enkephalin were rapidly degradated by α-chymotrypsin, carboxypeptidase A and leucine aminopeptidase and therefore they were not attacked by trypsin.
생화학,분자생물학 : 토양의 DNA로부터 4-Hydroxyphenylpyruvate Dioxygenase 유전자 탐색 및 분리
윤상순 ( Sang Soon Yun ),이정한 ( Jung Han Lee ),김수진 ( Soo Jin Kim ),김삼선 ( Sam Sun Kim ),박인철 ( In Cheol Park ),이미혜 ( Mi Hye Lee ),구본성 ( Bon Sung Koo ),윤상홍 ( Sang Hong Yoon ),여윤수 ( Yun Soo Yeo ) 한국응용생명화학회 2005 Applied Biological Chemistry (Appl Biol Chem) Vol.48 No.4